[0001] 本发明涉及工业动物生产。具体地，本发明涉及一种饲养动物群的方法和一种测定动物的血液和/或卵黄中的分析物的方法。

[0002] 出于多种原因饲养动物，包括生产蛋和肉。在工业规模上，农场主负责数百或数千只动物：动物数量越多，大规模生产的效率就越高。管理动物健康、福利和表现对于工业动物生产至关重要。

[0003] 一种提高工业动物生产的盈利率的方法是精准动物营养。为了优化盈利率，农场主试图通过调适营养以满足动物的特定需求来影响动物的表现。

[0004] 为了受益于精准的动物营养，需要准确测量分析物状态并将所述状态与动物健康和表现关联。众所周知，饲料中的分析物并不总是与所述分析物的生物利用度和血液水平相关。真正重要的是动物可以生物利用多少分析物。因此，需要一种容易地允许随时测量动物的分析物状态的实用工具。

[0054] 测定动物的血液中的分析物参数的方法

[0055] 本发明的方法的优选实施方式涉及一种测定动物的血液中的分析物的方法。

[0056] 在本发明的优选实施方式中，所述动物是禽类，例如鸡或鸭。甚至更优选地，所述动物是肉鸡。众所周知的品种有Ross(例如Ross 708)和Cobb(例如Cobb 500)。

[0057] 在本发明的另一优选实施方式中，所述动物是猪。

[0058] 在本发明的方法的步骤iv)中，离体分析动物的血液样本。步骤iv)中所分析的血液样本优选包含静脉血。因此，本发明的方法的前述步骤i)优选包括提供动物静脉血，其中本发明的方法优选不是在动物体上实践的诊断方法。

[0059] 在本发明的方法的步骤iv)中，对步骤i)中提供的、在步骤ii)中收集在载体上并在步骤iii)中干燥的静脉血进行离体分析。所述血液样本优选在饲养动物的地方采集。本发明的方法优选包括从动物抽取静脉血的方式。实施例2中提供了采样工序的示例。样本可以使用载体卡直接发送到实验室，这消除了生物风险。与难以处理且需要冷藏、不能跨境发送或邮寄的传统血液样本相比，对于本发明的方法来说，运输和随后的存储不需要冷藏。它可以安全地发送到世界各地，而没有生物风险，也无需进口许可证。

[0060] 分析优选在样本已邮寄到的实验室中进行。通过常规方法对载体上的样本执行分析，例如通过液相色谱(liquid chromatography,HPLC)或高效液相色谱‑质谱联用(LC‑MS/MS)进行质量分析以测定动物体内分析物的水平。这种工序与针对所述分析物的血浆的常规HPLC测试高度相关。

[0061] 优选地，在进行步骤iv)中的分析之前已经做出了将在步骤vi)中分析哪些血液参数的决策。

[0062] 步骤v)中执行的任选关联可以将所述分析物的水平与改善健康和性能因素相关联。

[0063] 可以通过从外部供应商订购饲料或饲料添加剂来促进步骤vi)中执行的饲料对分析物的值的任选调适。

[0064] 出于本发明的目的，被包括在步骤i)至iv)中的本发明的方法的工序将被概括为干血斑测试(dried Blood Spot Test,DBS)。DBS允许以一种更简单且侵入性更小的方式对动物进行采样，因为只需要所述动物的一滴血液。考虑到发送测试材料的问题，DBS是一种更安全且不太复杂的技术，因为载体卡将材料保存更长时间段，从而抑制任何传染性病原体的存在并允许将样本轻松运输到国外或在室温下存储。所有这些都有助于提高发送样本的品质和敏捷性。

[0065] 测定卵黄中分析物参数的方法

[0066] 本发明的方法的优选实施方式涉及一种测定卵黄中的分析物的方法。

[0067] 在本发明的优选实施方式中，所述动物是禽类，例如鸡或鸭。甚至更优选地，所述动物是肉鸡。众所周知的品种有Ross(例如Ross 708)和Cobb(例如Cobb 500)。

[0068] 在本发明的方法的步骤iv)中，对在步骤i)中提供的、在步骤ii)中收集在载体上并在步骤iii)中干燥的卵黄进行离体分析。所述卵黄样本优选在饲养动物的地方采集。实施例3中提供了采样工序的示例。样本可以使用载体卡直接发送到实验室，这消除了生物风险。与难以处理且需要冷藏、不能跨境发送或邮寄的传统生物样本相比，对于本发明的方法来说，运输和随后的存储不需要冷藏。它可以安全地发送到世界各地，而没有生物风险，也无需进口许可证。

[0069] 分析优选在样本已邮寄到的实验室中进行。通过常规方法对载体上的样本执行分析，例如通过液相色谱(liquid chromatography,HPLC)或高效液相色谱‑质谱联用(LC‑MS/MS)进行质量分析以测定卵黄内分析物的水平。

[0070] 优选地，在进行步骤iv)中的分析之前已经做出了将在步骤vi)中分析哪些血液参数的决策。

[0071] 步骤v)中执行的任选关联可以将所述分析物的水平与改善健康和表现因素相关联。

[0072] 可以通过从外部供应商订购饲料或饲料添加剂来促进步骤vi)中执行的饲料对分析物的值的任选调适。

[0073] 出于本发明的目的，被包括在步骤i)至iv)中的本发明的方法的工序将被概括为干卵黄斑测试(Dried Yolk Spot Test,DYS)。DYS允许以一种更简单且侵入性更小的方式对动物进行采样，因为只需要所述动物的一滴卵黄。考虑到发送测试材料的问题，DYS是一种更安全且不太复杂的技术，因为载体卡可以将材料保存更长时间，抑制任何传染性病原体的存在，并允许样本轻松运输到国外或在室温下保存。所有这些都有助于提高发送样本的品质和敏捷性。

[0074] 饲养动物群的方法，其中分析动物的血液

[0075] 本发明的方法的优选实施方式涉及一种饲养同一物种、同一品种的动物群的方法。

[0076] 动物群中动物的数量可以变化并且取决于物种。在本发明的优选实施方式中，所述动物是禽类，例如鸡或鸭。甚至更优选地，所述动物是肉鸡。众所周知的品种有Ross(例如Ross 708)和Cobb(例如Cobb500)。因此，本发明的方法的优选实施方式涉及一种饲养同一物种且同一品种的禽类，优选鸡的群的方法。

[0077] 在本发明的另一优选实施方式中，所述动物是猪。

[0078] 优选地，所述动物群饲养在同一隔室中，例如在同一围栏中或在同一房舍中。在动物是鸡的情况下，则围栏通常容纳至多100只鸡，而鸡舍可容纳1,000只或更多只鸡。因此，本发明的一个实施方式涉及一种饲养同一物种且同一品种的动物群的方法，其中所述群在同一隔室中饲养和/或其中所述群包含多于10只，优选多于50只，甚至更优选多于100只并且最优选至少1,000只动物。

[0079] 在本发明的方法的步骤iv)中，离体分析动物群的至少一名成员的血液样本。虽然可以分析所述群中多于一名成员的血液样本，但通常分析所述群中仅一名成员的血液样本就足够了。因此，所述群的至少一名成员优选地从动物群中随机选择。步骤iv)中所分析的血液样本优选包含静脉血。因此，本发明的方法的前述步骤i)优选地包括提供来自所述群的至少一名成员的静脉血，其中本发明的方法优选不是在动物体上实践的诊断方法。

[0080] 在本发明的方法的步骤iv)中，对步骤i)中提供的、在步骤ii)中收集在载体上并在步骤iii)中干燥的静脉血进行离体分析。所述血液样本优选地在饲养动物的地方采集。本发明的方法优选包括从动物抽取静脉血的方式。实施例2中提供了采样工序的示例。样本可以使用载体卡直接发送到实验室，这消除了生物风险。与难以处理且需要冷藏、不能跨境发送或邮寄的传统血液样本相比，对于本发明的方法来说，运输和随后的存储不需要冷藏。
它可以安全地发送到世界各地，而没有生物风险，也无需进口许可证。

[0081] 分析优选在样本已邮寄到的实验室中进行。通过常规方法对载体上的样本执行分析，例如通过液相色谱(liquid chromatography,HPLC)或高效液相色谱‑质谱联用(LC‑MS/MS)进行质量分析以测定动物体内分析物的水平。这种工序与针对所述分析物的血浆的常规HPLC测试高度相关。

[0082] 优选地，在进行步骤iv)中的分析之前已经做出了将在步骤vi)中分析哪些血液参数的决策。

[0083] 步骤v)中执行的关联可以将所述分析物的水平与改善健康和性能因素相关联。

[0084] 可以通过从外部供应商订购饲料或饲料添加剂来促进步骤vi)中执行的饲料对分析物的值的调适。因此，本发明的优选实施方式涉及一种设置，所述设置包括本文所述的饲养动物群的方法，以及饲料添加剂、预混物和/或饲料的至少一名供应商，其中分析步骤iv)的结果或步骤v)的相关性被传达给所述饲料添加剂、预混物和/或饲料的至少一名供应商。

[0085] 出于本发明的目的，被包括在步骤i)至iv)中的本发明的方法的工序将被概括为干血斑测试(dried Blood Spot Test,DBS)。DBS允许以一种更简单且侵入性更小的方式对动物进行采样，因为只需要所述动物的一滴血液。考虑到发送测试材料的问题，DBS是一种更安全且不太复杂的技术，因为载体卡将材料保存更长时间段，从而抑制任何传染性病原体的存在并允许将样本轻松运输到国外或在室温下存储。所有这些都有助于提高发送样本的品质和敏捷性。

[0086] 饲养动物群的方法，其中分析卵黄

[0087] 本发明的方法的优选实施方式涉及一种饲养同一物种、同一品种的动物群的方法。

[0088] 动物群中动物的数量可以变化并且取决于物种。在本发明的优选实施方式中，所述动物是禽类，例如鸡或鸭。甚至更优选地，所述动物是肉鸡。众所周知的品种有Ross(例如Ross 708)和Cobb(例如Cobb500)。因此，本发明的方法的优选实施方式涉及一种饲养同一物种且同一品种的禽类，优选鸡的群的方法。

[0089] 优选地，所述动物群饲养在同一隔室中，例如在同一围栏中或在同一房舍中。在动物是鸡的情况下，则围栏通常容纳至多100只鸡，而鸡舍可容纳1,000只或更多只鸡。因此，本发明的一个实施方式涉及一种饲养同一物种且同一品种的动物群的方法，其中所述群在同一隔室中饲养和/或其中所述群包含多于10只，优选多于50只，甚至更优选多于100只并且最优选至少1,000只动物。

[0090] 在本发明的方法的步骤iv)中，分析所述动物群的至少一名成员的卵的卵黄样本。虽然可以分析所述群中多于一名成员的卵的卵黄样本，但通常分析所述群中仅一名成员的卵黄样本就足够了。因此，所述群的至少一名成员优选地从动物群中随机选择。

[0091] 所述卵黄样本优选地在饲养动物的地方采集。本发明的方法优选包括从卵中抽取样本的方式。实施例3中提供了采样工序的示例。样本可以使用载体卡直接发送到实验室，这消除了生物风险。与难以处理且需要冷藏、不能跨境发送或邮寄的传统生物样本相比，对于本发明的方法来说，运输和随后的存储不需要冷藏。它可以安全地发送到世界各地，而没有生物风险，也无需进口许可证。

[0092] 分析优选在样本已邮寄到的实验室中进行。通过常规方法对载体上的样本执行分析，例如通过液相色谱(liquid chromatography,HPLC)或高效液相色谱‑质谱联用(LC‑MS/MS)进行质量分析以测定动物体内分析物的水平。

[0093] 优选地，在进行步骤iv)中的分析之前已经做出了将在步骤vi)中分析哪些卵黄参数的决策。

[0094] 步骤v)中执行的关联可以将所述分析物的水平与改善健康和表现因素相关联。

[0095] 可以通过从外部供应商订购饲料或饲料添加剂来促进步骤vi)中执行的饲料对分析物的值的调适。因此，本发明的优选实施方式涉及一种设置，所述设置包括本文所述的饲养动物群的方法，以及饲料添加剂、预混物和/或饲料的至少一名供应商，其中分析步骤iv)的结果或步骤v)的相关性被传达给所述饲料添加剂、预混物和/或饲料的至少一名供应商。

[0096] 出于本发明的目的，被包括在步骤i)至iv)中的本发明的方法的工序将被概括为干卵黄斑测试(Dried Yolk Spot Test,DYS)。DYS允许以一种更简单且侵入性更小的方式对动物进行采样，因为只需要所述动物的一滴血液。考虑到发送测试材料的问题，DYS是一种更安全且不太复杂的技术，因为载体卡可以将材料保存更长时间，抑制任何传染性病原体的存在，并允许样本轻松运输到国外或在室温下保存。所有这些都有助于提高发送样本的品质和敏捷性。

[0097] 定义

[0098] 分析物：在本发明的上下文中，术语“分析物”是指分析工序中感兴趣的组分或化学物质。在本发明的优选实施方式中，分析物可以是营养物或生物标志物。

[0099] 动物：在本发明的上下文中，术语“动物”包括动物界的所有非人类成员。优选地，所述动物是单胃动物，例如猪(包括但不限于仔猪、生长猪和母猪)、家禽(包括但不限于家禽、火鸡、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子、乳鸽、仔鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和雏鸟)；宠物动物，例如猫和狗、鱼类(包括但不限于鰤鱼、巨滑舌鱼、鲅、鲈鱼、竹荚鱼、马格达河鲮脂鲤(bocachico)、鳊鱼、大头鱼、大盖巨脂鲤、鲤鱼、鲶鱼、厚唇鲃、虱目鱼、鲑类小鱼(char)、慈鲷、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷(dorada)、鼓鱼(drum)、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、丽鱼(guapote)、大比目鱼、java、野鲮属、lai、泥鳅、鲭鱼、遮目鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、paco、绿腹丽鱼(pearlspot)、银汉鱼、河鲈鱼、狗鱼、鲳鲹、斜齿鳊、鲑鱼、sampa、大眼鰤鲈、海鲈鱼、鲷鱼、银光鱼(shiner)、塘鳢(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼(snook)、鳎、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼、丁鲷、terror、罗非鱼、鳟鱼、金枪鱼、大菱鲆、白鲑、玻璃梭鲈和白鱼)；和甲壳纲动物(包括但不限于虾和对虾)。

[0100] 优选地，所述动物选自以下的组：小猪或猪(包括但不限于仔猪、生长猪和母猪)或家禽(包括但不限于家禽、火鸡、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子、乳鸽、小鸡、肉鸡、蛋鸡、小母鸡和雏鸟)。

[0101] 抗凝剂：有时，会向血液样本中添加抗凝剂。众所周知的抗凝剂是肝素和EDTA。在本发明的上下文中，含有肝素的血液被称为“肝素化的血液”。

[0102] 生物标志物：出于本发明的目的，生物标志物(生物标志物的缩写)是生物过程的客观、可量化的特性。生物标志物是一种客观的度量，其在捕获细胞或生物体中在给定时刻发生的情况。例如，生物标志物可帮助我们了解环境因素与疾病之间的关系，以提高我们诊断、监测或预测疾病风险的能力。用于本发明目的的生物标志物可选自但不限于白蛋白、钙、类胡萝卜素、肌酸激酶、球蛋白、葡萄糖、血红蛋白、磷、钾、钠、总二氧化碳、尿酸。

[0103] 白蛋白：在本发明的上下文中，术语“白蛋白”是指球状蛋白的家族。白蛋白家族的所有卵白质都是水溶性的，在浓盐溶液中适度溶解，并经历热变性。白蛋白常见于血浆中，并且与其他血液蛋白的不同之处在于它们未糖基化。含有白蛋白的物质称为类白蛋白(albuminoid)。血清中白蛋白(血清白蛋白，SA)的浓度可能受到若干种因素的影响，所述因素包括白蛋白的合成速率、分解代谢速率、血管外分布和外源性损失。此外，营养状况和全身炎症都会影响SA的合成。确定SA浓度有助于各种临床环境中的风险预测。全因死亡率和心血管(cardiovascular,CV)死亡率的风险增加可能与低SA浓度相关。

[0104] 钙：钙缺乏可能导致代谢改变或潜在的病理变化。因此，钙可以作为代谢问题和/或病理变化的生物标志物。

[0105] 类胡萝卜素：在本发明的上下文中，术语“类胡萝卜素”是指由植物和藻类以及若干种细菌和真菌产生的有机色素。类胡萝卜素是从饮食中作为颜色明亮的色素获得的。它们可以作为水果和蔬菜摄入量的生物标志物，但不限于此。

[0106] 肌酸激酶：在本发明的上下文中，术语“肌酸激酶”(CK)是指存在于组织和需求能量的细胞(例如骨骼肌和心肌)中的酶，并且被认为是用于检测和监测骨骼肌疾病的最佳标志物。肌酸激酶活性通常在血清或血浆中测量。

[0107] 球蛋白：在本发明的上下文中，术语“球蛋白”是指具有比白蛋白更高的分子量，并且不溶于纯水，但溶于稀盐溶液的球状蛋白家族。一些球蛋白是在肝脏中产生的，而其他球蛋白则是由免疫系统制造的。球蛋白、白蛋白和纤维蛋白原是主要的血液蛋白。较高的球蛋白水平与假体周围感染(Periprosthetic joint infection,PJI)的风险密切相关，并且可以作为诊断PJI的生物标志物。血清中的白蛋白/球蛋白比率被进一步认为是各种癌症中有价值的预后生物标志物。

[0108] 葡萄糖：在本发明的上下文中，术语“葡萄糖”是指具有分子式C6H12O6的简单糖。葡萄糖是最丰富的单糖，是碳水化合物的子类。葡萄糖主要由植物和大多数藻类在光合作用期间使用来自阳光的能量从水和二氧化碳制成，其中所述葡萄糖用于在细胞壁中制造纤维素，纤维素是世界上最丰富的碳水化合物。连续血糖监测提供详细的实时数据，所述详细的实时数据对于临床决策制定、评定对新糖尿病药物的反应以及闭环人工胰腺技术的开发具有重要价值。

[0109] 血红蛋白：在本发明的上下文中，术语“血红蛋白(Hemoglobin/haemoglobin)”，缩写为Hb或Hgb，是指几乎所有脊椎动物红血细胞(红细胞)以及某些无脊椎动物的组织中的含铁氧转运金属蛋白。血液中的血红蛋白将氧从肺或鳃携带到身体的其余部分(即组织)。在那里，它释放氧以允许有氧呼吸，从而在称为新陈代谢的过程中为生物体的功能提供能量。高血红蛋白水平(Hb)可能与总癌症和乳腺癌发病风险增加相关联。

[0110] 磷：在本发明的上下文中，术语“磷”是指具有符号P并且原子序数为15的化学元素。元素磷以两种主要形式白磷和红磷存在，但由于其是高度反应性的，所以地球上从未发现作为游离元素的磷。在矿物中，磷通常作为磷酸盐存在。二十四小时尿磷通常用作磷摄入和吸收的替代度量。

[0111] 钾：在本发明的上下文中，术语“钾”是指具有符号K并且原子序数为19的化学元素。自然中的钾仅在离子盐中存在。钾是最丰富的细胞内阳离子，在传递神经冲动、心脏活动、膜运输、酸碱平衡和神经肌肉功能中发挥着关键作用。富含钾的饮食，例如DASH[停止高血压的饮食方法]可能会降低血压并减缓肾脏疾病进展。

[0112] 钠：在本发明的上下文中，术语“钠”是指具有符号Na并且原子序数为11的化学元素。自然中不存在所述游离金属。钠摄入过量会增加患高血压风险，而高血压(high blood pressure/hypertension,)是心血管疾病的主要风险因子。

[0113] 总二氧化碳：二氧化碳是在体内从细胞呼吸产生的。作为生物标志物，血清中的二氧化碳实际上是血液中碳酸氢盐的度量。从细胞呼吸产生的大部分CO2(约75％)作为碳酸氢根离子携带在血液中。5％作为溶解的CO2保留在溶液中，并且其余20％则保持与血红蛋白和其他血浆蛋白结合。在肺部形成的溶解的CO2对CO2值的贡献很小。在血液测试中，CO2或碳酸氢盐是组织酸度或碱度的一般度量。CO2含量是指碳酸氢盐，其是碱性或碱分子。它是溶液并且主要由肾脏调节，在血液化学面板上被称为CO2。另一方面，CO2气体是指溶解的CO2并且主要是酸性的。它由肺调节。两者都对酸碱调节有强大的影响，并受到不同器官系统的调节。二氧化碳血清，作为碳酸氢盐充当血液中储备碱性元素之一。碳酸氢盐中和代谢酸，例如盐酸和乳酸。我们可查看血清CO2来帮助评估体内碱中毒或酸中毒的趋势。血清CO2或碳酸氢盐水平升高可能与朝向代谢性碱中毒的趋势相关联，而水平降低则与朝向代谢性酸中毒的趋势相关，在这种情况下，碳酸氢盐被耗尽以缓冲体内不断增加的水平的酸度或H+。血清总二氧化碳也可能是脓毒症患者28天死亡率的预后因素。

[0114] 尿酸：在本发明的上下文中，术语“尿酸”是指具有式C5H4N4O3的含氮、氧和氢的杂环化合物。它形成被称为尿酸盐和酸尿酸盐的离子和盐，例如尿酸铵。尿酸是嘌呤核苷酸代谢分解的产物，并且它是尿液的正常组分。高血液尿酸浓度可导致痛风，并与其他医学病症，包括糖尿病以及尿酸铵肾结石的形成相关联。尿酸(uric acid,UA)最近作为一种炎症因子出现，其会增加氧化应激并促进肾素血管紧张素醛固酮系统的激活。因此，较高的UA水平与糖尿病性肾病的发作和进展的各个阶段，包括代谢、心血管和肾功能异常相关联。血清UA水平可作为肾脏和心血管风险的生物标志物，并作为糖尿病的潜在附加治疗靶标。

[0115] 血液参数：“血液参数”的值是可测量的。举例来说，血液参数Na(电解质)可以具有140mmol离子钠/升血液的值。血液参数的值可能取决于多个因果变量，例如年龄和品种。

[0116] 品种：在本发明的上下文中，术语“品种”是指具有独特外观并且通常已经通过有意选择而开发的物种内的动物种群。因此，这些动物可能由来自共同祖先的血统关联。举例来说，来自品种Ross 708和Cobb 500的肉鸡可以从当地商业孵化场商业采购。

[0117] 载体：在本发明的上下文中，术语“载体”是指样本收集卡。所述样本收集卡可以是各种基材，例如纸板、木材、玻璃、塑料。优选地，所述样本收集卡是表面印有采集圈的滤纸，其中可放置一滴血液和/或卵黄以供进一步分析。每个收集圈可用于放置一滴样本。多于一个收集圈允许放置多于一个样本并对样本进行单独分析。

[0118] 更优选地，样本收集卡是经化学处理的滤纸，被设计用于收集、保存和运输干燥的生物样本以用于后续的DNA和RNA分析，其中特殊的化学物质裂解和灭活细菌和/或病毒并保存它们的DNA和RNA以供通过例如PCR的分析方法进行检测。此类样本收集卡可作为903(GE  Healthcare,Piscataway,NJ,EUA)商购获得并且公开于
WO2000062023A1中。

[0119] 放置在此类载体上并干燥的样本得到保存，因此几乎可以在任何地方采集。载体上的干燥样本不需要冷藏运输。

[0120] 骨化二醇：术语“25‑OH D3”、“25‑羟基维生素D3”、“HyD”和“骨化二醇”可互换使用。

[0121] 胆钙化醇：术语“胆钙化醇”和“维生素D3”可互换使用。

[0122] 饮食指南：术语“饮食指南”、“基于饲料的饮食指南”或“营养指南”可互换使用，并且是指确保推荐的动物营养水平和/或改善健康和表现因素所需并且旨在为生产营养全面的饲料配给(complete feed ration)奠定基础的指南。

[0123] 动物群：术语“动物群”是指在同一隔室(例如在同一围栏或同一房舍中)饲养的优选至少10只，更优选至少100只，最优选至少1000只动物。

[0124] 健康和表现因素：在本发明的上下文中，术语“健康和表现因素”是指动物表现和健康的客观的、可量化的特性。优选地，健康和表现因素选自但不限于以下的组：骨强度、产肉率和卵壳强度、乳热症可能性、孵化率、胚胎存活率、肠道健康(微生物区系)、营养吸收、骨骼健康、电解质平衡、肝脏健康、氧化应激和炎症。

[0125] 通过将血液和/或卵黄中的生物标志物水平与表现改进相关联，可以估计对经济上重要的参数的影响。例如，通过比较各种肉鸡试验中的表现提高，可以得出结论：平均而言，1％的血浆25‑OH‑D3水平增加导致平均日增重(ADG)、骨强度、胸肉产量和步态得分分别提高0.029％、0.173％、0.008％和0.296％。(Sakas等人，2019；Bray等人，2012；Sauders等人，2004；Vignale等人，2015)。

[0126] 骨强度：骨强度由骨几何形状、皮质厚度和孔隙率、骨小梁形态、以及骨组织的内在特性决定。骨强度可以使用例如双能X射线吸收测定法(dual‑energy  X‑ray absorptiometry,DXA)的分析方法，通过骨矿物质密度(BMD)来间接估计。骨质疏松症是一种由因骨量减少和微观架构改变而导致骨脆性增加和骨折风险增加所定义的疾病。骨质疏松症的主要并发症，即骨折，是由于骨强度较低。因此，骨质疏松症的任何治疗都意味着骨强度的改善。

[0127] 肉产率：在本发明的上下文中，术语“肉产率”或“瘦肉产率”(LMY％)是指胴体中瘦肉(肌肉)的比例，以百分比表示。胴体的LMY％是评定胴体组成的标准方法，并且不会根据用于销售胴体的切割规格而变化。绵羊和牛肉的LMY％不同地计算。对于绵羊，LMY％是使用热标准胴体重量(hot standard carcase weight,HSCW)和刀GR组织深度进行预测。热胴体重量是指冷却前胴体的重量。牛胴体由70％％至75％的水组成。随着胴体冷却和熟化，水会通过蒸发而损失。在仅前24小时内，胴体可损失其初始重量的2％至5％。HSCW越高且GR值越低，则LMY％越高。牛肉LMY％的算法是使用HSCW、肋骨脂肪深度以及在一些情况下眼肌面积(eye muscle area,EMA)来计算的。HSCW越高并且肋骨脂肪深度越低(并且在使用EMA的情况下，EMA越大)，则LMY％越高。处理员可能使用不同的系统来确定LMY％，但这些系统都已根据CT扫描—测量LMY％的金标准系统—进行了校准。这使得加工商和生产商能够以标准方式比较胴体。生产商可以通过例如营养和遗传选择的关键在农场实践来管理LMY％。提供有关LDL的LMY％信息意味着生产商可以做出更明智的管理决策以在未来最大化胴体价值。

[0128] 卵壳强度：壳破损一直是家禽业的财务消耗。测量卵壳强度的方法可包括准静态压缩。在这个破坏性过程中，卵在稳定不断增加的负载下被在两个平行板之间压缩，直到出现失效结果。连续记录力和变形，并以失效时的力给出卵壳强度。通常假设壳的非破坏性变形给予了其刚度特性的度量。

[0129] 乳热症：在本发明的上下文中，术语“乳热症”、或“产后低钙血症”或“产后瘫痪”是指主要发生在奶牛中，但也见于肉牛和非牛类家养动物的疾病，其特征在于血钙水平降低(低钙血症)。它发生在分娩后、哺乳期开始时、初乳和乳生产的钙需求超过了身体动员钙的能力时。“热”是用词不当，因为所述疾病期间体温通常不会升高。乳热症在老年动物(其从骨中动员钙的能力下降)和某些品种(例如Channel Island品种)中更为常见。

[0130] 孵化率：如本文所用的术语“孵化率”是指孵化出可存活雏鸟或幼禽的总卵的百分比(例如，每组卵数中孵化的幼禽数×100)。提高孵化率，即提高所产卵的孵化百分比，是特别理想的，因为即使百分比的小幅增加也会显著影响最终的雏鸟数量。因此，提高孵化率被认为是大规模育种计划的一个重要因素。卵孵化可能性的增加可以通过计算多个卵的“孵化率”或“受精孵化率”来测量。如本文所用的术语“受精孵化数”是指孵化出能存活的雏鸟或幼禽的总受精卵的百分比(例如，每组卵数中孵化的幼禽数量/×100)。

[0131] 胚胎存活率：如本文所用的术语“胚胎存活率”是指胚胎的存活预期或生存能力。

[0132] 肠道健康：如本文所用的术语“胚胎存活率”是指改善微生物群系的多样性和/或增加肠道，特别是结肠中的有益细菌的量。已知栖息在结肠中的有益细菌包括氨基酸球菌属(Acidaminococcus)、阿克曼氏菌属种属(Akkermansia sp.)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)、双歧杆菌属种属(Biifidobacterium spp.)、生产布拉氏菌(Blautia producta)、耳蜗形梭菌(Clostridium cocleatum)、产气柯林斯菌(Collinsella aerofaciens)、长链多尔氏菌(Dorea longicatena)、大肠杆菌(Escherichia coli)、真杆菌属种属(Eubacterium spp.)、普氏粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)、裂果胶毛螺菌(Lachnospira pectinoshiza)、乳杆菌属种属(Lactobacillus spp.)、狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)、拉乌尔菌属种属(Raoultella spp.)、罗斯氏菌属种属(Roseburia  spp.)、瘤胃菌球菌属种属(Ruminococcus spp.)和链球菌属种属
(Streptococcus spp.)。优选地，增加的细菌选自由以下组成的组：双歧杆菌属、阿克曼氏菌属、粪杆菌属(Faecalibacterium)和拟杆菌属(Bacteriodes)。更优选地，在施用本发明的抗氧化剂后，青春双歧杆菌(Bifidobacterium  adolescentis)、长双歧杆菌
(Bifidobacterium longum)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)、解木聚糖拟杆菌(Bacteroides xylanisolvens)、毛梭菌属种属(Lachnoclostridium sp.)、嗜黏蛋白艾克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)、韦氏布劳特氏菌(Blautia wexlerae)和/或普氏粪杆菌增加。当动物正在经历选自由以下组成的组的病症时，增加细菌的多样性和/或增加有益细菌的量是特别有帮助的：代谢紊乱、2型糖尿病、肥胖、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎症性肠病、肠易激综合征、渗漏性肠病、营养不良、慢性炎症和心血管疾病。

[0133] 骨骼健康：如本文所用的术语“骨骼健康”可以指但不限于骨骼健康的各个方面，例如骨强度、良好的骨矿化、高骨密度和/或抗骨折性。

[0134] 电解质平衡：如本文所用的术语“电解质平衡”是指不存在电解质失衡或水电解质失衡，这是体内电解质浓度异常。电解质在维持体内稳态方面发挥着至关重要的作用。它们有助于调节心脏和神经功能、体液平衡、氧气输送、酸碱平衡等。电解质失衡可能是由于电解质消耗过少或过多以及排出电解质过少或过多而导致的。

[0135] 电解质紊乱参与许多疾病过程，并且是医学患者管理的重要组成部分。这些紊乱[3]的原因、严重度、治疗和结局可能根据所涉及的电解质而有很大差异。 最严重的电解质紊乱涉及钠、钾或钙水平异常。其他电解质失衡不太常见，并且通常与主要电解质变化一起发生。肾脏是维持适当液体和电解质平衡的最重要器官，但例如荷尔蒙变化和生理压力的其[2]
他因素也发挥着作用。

[0136] 肝健康：如本文所用的术语“肝健康”是指维持健康的肝功能。

[0137] 氧化应激：氧化应激反映了反应性氧物质的全身表现与生物系统的轻松解毒反应性中间体或修复所造成的损坏的能力之间的不平衡。细胞的正常氧化还原状态的干扰可通过产生损害细胞的所有组分(包括蛋白质、脂质和DNA)的过氧化物和自由基，而产生毒性效应。来自氧化代谢的氧化应激会导致碱基损伤，以及DNA中的链断裂。碱损伤大多是间接的‑并且由所生成的反应性氧物质(ROS)，例如O2 (超氧化物自由基)、OH(羟基自由基)和H2O2(过氧化氢)引起。进一步，一些反应性氧化物质在氧化还原信号传导中充当细胞信使。因此，氧化应激可导致细胞信号传导的正常机制受到破坏。

[0138] 炎症：炎症是身体组织对例如病原体、受损细胞或刺激物的有害刺激的复杂生物反应的一部分，并且是涉及免疫细胞、血管和分子介质的保护性反应。炎症的功能是消除细胞损伤的初始原因，清除因原始损伤和炎症过程而受损的坏死细胞和组织，并启动组织修复。

[0139] 五个主要体征是热、痛、红、肿和功能丧失(拉丁语calor、dolor、rubor、tumor和functio laesa)。炎症是一种通用反应并且因此它被认为是一种先天免疫机制，相比之下适应性免疫则特定于每种病原体。炎症太少可能会导致有害刺激(例如细菌)对组织进行性破坏，并损害生物体的存活。相比之下，过多的慢性炎症形式的炎症与多种疾病，例如花粉热、牙周病、动脉粥样硬化和骨关节炎相关联。

[0140] 炎症可分为急性或慢性。急性炎症是身体对有害刺激的初始反应，并且是通过血浆和白细胞(特别是粒细胞)从血液进入受损组织的运动增加而实现的。一系列生化事件传播并使炎症反应成熟，涉及局部血管系统、免疫系统和受伤组织内的各种细胞。长期炎症(称为慢性炎症)会导致炎症部位存在的细胞类型(例如单核细胞)的渐进转变，并且其特征是炎症过程对组织的同时破坏和愈合。

[0141] 高效液相色谱‑质谱联用：高效液相色谱‑质谱联用(LC‑MS/MS)是一种高度灵敏的分析技术。其读取分析物、分析物、质量/负载(m/z)及其片段(产物离子)。它是一种高度灵敏的技术，测定十亿分之一(ppb或ng/mL)，与此同时仅需要150μL(微升)的小样本量，且生物基质(血浆)和代谢产物组分的干扰极低。

[0142] 营养参数：出于本发明的目的，营养参数是生物体用于存活、生长和繁殖的物质。营养素可经分类以描述动物的营养需求，并分为常量营养素和微量营养素。常量营养素，例如碳水化合物、脂肪、蛋白质、水，消耗量相对较大(克或盎司)，并且主要用于生成能量或融入组织以用于生长和修复。微量营养素(例如维生素和饮食矿物质)的需要量较小(毫克或微克)。用于本发明的目的的微量营养素可以是但不限于矿物质和维生素。营养参数可选自由以下组成的组：脂溶性维生素、水溶性维生素、痕量矿物质。优选地，营养参数选自维生素D3、25‑OH‑D3、维生素A和/或维生素E。

[0143] 饲养动物：在本发明的上下文中，“饲养动物”是指动物的生产，而无论其目的如何。因此，“饲养动物”包括饲养用于肉和/或蛋生产的动物。为肉生产而饲养的仔鸡是肉用仔鸡。

[0144] 维生素D3：维生素D3是一种脂溶性维生素，需要经过酶促消化过程(脂肪酶)并在肠道中形成胶束才能被肠上皮细胞吸收(Combs Jr.和McClung，2017)。当通过肝脏时，其被羟基化并产生以下第一代谢产物：25‑OH‑D3，其是生物体中最丰富的形式，并且将可用于主要在肾脏中以维生素D的活性形式代谢和转化。

[0145] 由于与饮食维生素D3相比的优势，25‑OH‑D3饲料包含是当前在动物营养中使用的策略。在相同包含水平下，25‑OH‑D3的吸收率(74.9％)高于维生素D3的吸收率(66.5％)(Bar等人，1980)。当饲喂时，25OHD3不需要在肝脏中经历转化阶段(Soares等人，1995)，与维生素D3相比，在肠道中吸收更有效，保留率更高，且排泄较少(Bar等人，1980)，生物活性是2.0高至2.5倍高(Soares等人，1978；Fritts和Waldroup，2003)，并且在其推荐剂量的高达10倍的情况下不显示毒性效应(Yarger等人，1995)。

[0146] 25‑OH‑D3是血流中最丰富的维生素D形式，其评估是评估所有动物物种(包括人类)中的维生素D状态的度量。这种代谢产物的评估已用于确定理想的饮食水平并与重要参数建立关联，所述重要参数是例如：血浆钙和磷水平、骨特性(Tizziani等人，2019)、肌肉蛋白合成(Vignale等人，2015；Prokoski等人，2019)、具有表现变量(Zhang等人，2020)和建立生产条件之间的差异(DSM Field Trial.Lozano,2021)。

[0147] 维生素D在钙和磷代谢、生理过程和家禽需求中的作用已有详细记录(Rama‑Rao等人，2006；Rama‑Rao等人，2009)。此外，它在调节免疫反应(Chou等人，2009；Morris等人，2014)、肌肉形成和肉产率(Hutton等人，2014；Prokoski等人，2019)方面的作用也在最近的文献中被广泛描述。

[0148] 几十年来维生素D3的最佳包含水平一直是研究的主题。第一个建议是基于在受控实验条件下使用纯化或半纯化饮食进行的研究(NRC，1994)。然而，这些建议已导致低于在商业生产条件下或在通常会增加营养需求的病原体攻击下所需的那些。

[0149] 在商业水平上，维生素D3的包含在3,000UI/kg饲料或5,000UI/kg饲料之间变化(Bozkurt等人，2017年；Sakkas等人，2019年)。通常，家禽公司基于那些可用的建议、所述建议自身的生产条件、预期表现、最终产品和最大投资回报来确定要使用的水平。

[0150] 一般来说，测量血浆中的25OHD3允许我们知道动物体内的维生素D状况。健康状况、免疫力和表现与维生素D3状态之间存在相关性。当在饲料中补充HyD时，由于HyD相对于维生素D和竞争物的代谢优势，动物达到的血浆/血液25OHD3水平将始终会更大。