技术领域
[0001] 本申请涉及医药化工小核酸单体原料领域，尤其是涉及一种2‑TBS尿苷单体合成方法。
相关背景技术
[0002] 2‑TBS尿苷单体又称5'‑O‑(4,4‑二甲氧基三苯甲基)‑2'‑O‑[(叔丁基)二甲基硅基]尿苷‑3'‑(2‑氰基乙基‑N,N‑二异丙基)2‑TBS尿苷单体，其作为小核酸原料单体在药物化学研究领域发挥着巨大的潜力，在mRNA研究应用领域有着举足轻重的作用；
[0003] 目前常见的合成方案以尿苷始原料，先用DMTrCl保护5'‑OH,再通过TBSCl进行2'‑OH的保护,最后进行磷脂化反应得到目标产物。
[0004] 但是目前上述合成方法会产生多个问题，如：(1)DMTrCl保护5'‑OH这一阶段会产生双DMTr保护杂质析晶难以除去，需要柱层析；(2)TBSCl进行2'‑OH的保护这步没有选择性，得到产物的同时还会得到较多的3'‑OTBS的异构体，并且难以去除；因此现有工艺不仅工艺繁琐、产生杂质不易去除而且收率也较低。
具体实施方式
[0028] 以下结合附图1对本申请作进一步详细说明。
[0029] 本申请实施例公开一种2‑TBS尿苷单体合成方法。
[0030] 实施例1
[0031] 一种2‑TBS尿苷单体合成方法，其具体步骤如下：
[0032] Step1，将500mL的DMF、100g尿苷以及55.76g咪唑加入2000mL反应釜中，采用机械搅拌(转速100‑150r/min)，并保持搅拌状态，控温20℃缓慢加入142.08g的1,3二氯‑1,1,3,3‑四异丙基二硅氧烷并持续搅拌5h，采用HPLC检测直至原料消耗完全；
[0033] 后处理：采用乙酸乙酯萃取，水洗1次有机相，溶剂浓缩走后，得到S1，收率88％，纯度97％，质量为175.39g；
[0034] Step2，将500mL的DMF(N,N‑二甲基甲酰胺)、100gS1以及55.94g咪唑加入2000mL反应釜中，采用机械搅拌(转速100‑150r/min)，保持搅拌状态，控温20℃缓慢加入46.45g叔丁基二甲基氯硅烷，保持温度在20℃持续搅拌5h，HPLC检测直至原料消耗完全；
[0035] 后处理：利用甲叔醚萃取，水洗1次有机相，溶剂浓缩走后，得到S2，收率85％，纯度95％，质量为104.96g；
[0036] Step3，将1000mL四氢呋喃和100gS2加入到2000mL夹套反应釜中，降温至0℃保持搅拌状态，控温0℃下，采用蠕动泵缓慢加入43.5gTBAF(四丁基氟化铵)；保持0℃下搅拌5h，HPLC检测反应完全；
[0037] 反应完成后，再加入1000mL的乙酸乙酯，加入1000mL水萃取分层，有机相水洗1次，MgSO4干燥，在20℃浓缩除去溶剂，再利用甲叔醚0℃打浆得到S3，收率75％，纯度98％，质量为44.74g；
[0038] Step4，在1000mL反应釜中，将60gS3溶解在300mL吡啶中，将56.57g的DMTrCl加入体系中进行搅拌，搅拌温度为20℃，搅拌时间在5h；
[0039] 后处理：加入600mL的甲基叔丁基醚，600mL的水萃取分液，水洗有机相一次；加入质量分数为5％的柠檬酸水溶液洗掉吡啶，有机相干燥浓缩，再通过柱层析(正庚烷/乙酸乙酯＝1：1)得到S4，收率73％，纯度99％，质量为80.73g；
[0040] Step5，控制无水无氧条件下，将400mL的DCM(二氯甲烷)、80g的S4、8.47g的四氮唑、36.49g的CTPPA(双(二异丙基氨基)(2‑氰基乙氧基)膦)加入500mL反应釜中，保持搅拌状态，将80g的S4溶入800mL二氯甲烷溶液中，并将溶液缓慢加入体系中，保持温度在20℃搅拌5小时，HPLC检测直至原料消耗完全；
[0041] 后处理：控温在5℃将二氯甲烷浓缩去除，加入800mL甲叔醚、400mL的DMF以及400mL的水，萃取分液，400mL的DMF以及400mL的水，进行1次洗涤有机相，干燥浓缩至400mL，滴加到2400mL的正庚烷中析晶得到最后产品S5，即2‑TBS尿苷单体，收率75％，纯度98％，质量为78.19g。
[0042] 实施例2
[0043] 一种2‑TBS尿苷单体合成方法，其具体步骤如下：
[0044] Step1，将500mL的DMF、100g尿苷以及111.52g咪唑加入2000mL反应釜中，采用机械搅拌(转速100‑150r/min)，并保持搅拌状态，控温25℃缓慢加入258.33g的1,3二氯‑1,1,3,3‑四异丙基二硅氧烷并持续搅拌5h，采用HPLC检测直至原料消耗完全；
[0045] 后处理：采用乙酸乙酯萃取，水洗3次有机相，溶剂浓缩走后，得到S1，收率88％，纯度97％，质量为179.37g；
[0046] Step2，将500mL的DMF(N,N‑二甲基甲酰胺)、100gS1以及83.90g咪唑加入2000mL反应釜中，采用机械搅拌(转速100‑150r/min)，保持搅拌状态，控温25℃缓慢加入77.42g叔丁基二甲基氯硅烷，保持温度在25℃持续搅拌5h，HPLC检测直至原料消耗完全；
[0047] 后处理：利用甲叔醚萃取，水洗3次有机相，溶剂浓缩走后，得到S2，收率89％，纯度95％，质量为109.9g；
[0048] Step3，将1000mL四氢呋喃和100gS2加入到2000mL夹套反应釜中，降温至10℃保持搅拌状态，控温10℃下，采用蠕动泵缓慢加入62.25gTBAF(四丁基氟化铵)；保持10℃下搅拌5h，HPLC检测反应完全；
[0049] 反应完成后，再加入1000mL的乙酸乙酯，加入1000mL水萃取分层，有机相水洗3次，MgSO4干燥，在25℃浓缩除去溶剂，再利用甲叔醚10℃打浆得到S3，收率64％，纯度98％，质量为38.18g；
[0050] Step4，在1000mL反应釜中，将60gS3溶解在1200mL吡啶中，将73.54g的DMTrCl加入体系中进行搅拌，搅拌温度为25℃，搅拌时间在5h；
[0051] 后处理：加入600mL的甲基叔丁基醚，600mL的水萃取分液，水洗有机相一次；加入质量分数为5％的柠檬酸水溶液洗掉吡啶，有机相干燥浓缩，再通过柱层析(正庚烷/乙酸乙酯＝1：1)得到S4，收率75％，纯度99％，质量为82.95g；
[0052] Step5，控制无水无氧条件下，将1600mL的DCM(二氯甲烷)、80g的S4、16.95g(的四氮唑、72.98g的CTPPA(1,3二氯‑1,1,3,3‑四异丙基二硅氧烷)加入500mL反应釜中，保持搅拌状态，将80g的S4溶入800mL二氯甲烷溶液中，并将溶液缓慢加入体系中，保持温度在25℃搅拌5小时，HPLC检测直至原料消耗完全；
[0053] 后处理：控温在15℃将二氯甲烷浓缩去除，加入800mL甲叔醚、400mL的DMF以及400mL的水，萃取分液，400mL的DMF以及400mL的水，进行3次洗涤有机相，干燥浓缩至400mL，滴加到2400mL的正庚烷中析晶得到最后产品S5，即2‑TBS尿苷单体，收率75％，纯度98％，质量为78.19g。
[0054] 实施例3
[0055] 一种2‑TBS尿苷单体合成方法，其具体步骤如下：
[0056] Step1，将500mL的DMF、100g尿苷以及83.64g咪唑加入2000mL反应釜中，采用机械搅拌(转速100‑150r/min)，并保持搅拌状态，控温22.5℃缓慢加入193.75g的1,3二氯‑1,1,3,3‑四异丙基二硅氧烷并持续搅拌5h，采用HPLC检测直至原料消耗完全；
[0057] 后处理：采用乙酸乙酯萃取，水洗2次有机相，溶剂浓缩走后，得到S1，收率90％，纯度97％，质量为179.37g；
[0058] Step2，将500mL的DMF(N,N‑二甲基甲酰胺)、100gS1以及69.92gg咪唑加入2000mL反应釜中，采用机械搅拌(转速100‑150r/min)，保持搅拌状态，控温22.5℃缓慢加入61.94g叔丁基二甲基氯硅烷，保持温度在22.5℃持续搅拌5h，HPLC检测直至原料消耗完全；
[0059] 后处理：利用甲叔醚萃取，水洗2次有机相，溶剂浓缩走后，得到S2，收率90％，纯度95％，质量为111.14g；
[0060] Step3，将1000mL四氢呋喃和100gS2加入到2000mL夹套反应釜中，降温至5℃保持搅拌状态，控温5℃下，采用蠕动泵缓慢加入54.38gTBAF(四丁基氟化铵)；保持5℃下搅拌5h，HPLC检测反应完全；
[0061] 反应完成后，再加入1000mL的乙酸乙酯，加入1000mL水萃取分层，有机相水洗2次，MgSO4干燥，在22.5℃浓缩除去溶剂，再利用甲叔醚5℃打浆得到S3，收率80％，纯度98％，质量为47.72g；
[0062] Step4，在1000mL反应釜中，将60gS3溶解在600mL吡啶中，将65.05g的DMTrCl加入体系中进行搅拌，搅拌温度为22.5℃，搅拌时间在5h；
[0063] 后处理：加入600mL的甲基叔丁基醚，600mL的水萃取分液，水洗有机相一次；加入质量分数为5％的柠檬酸水溶液洗掉吡啶，有机相干燥浓缩，再通过柱层析(正庚烷/乙酸乙酯＝1：1)得到S4，收率80％，纯度99％，质量为88.47g；
[0064] Step5，控制无水无氧条件下，将800mL的DCM(二氯甲烷)、80g的S4、12.71g(的四氮唑、54.73g的CTPPA(1,3二氯‑1,1,3,3‑四异丙基二硅氧烷)加入500mL反应釜中，保持搅拌状态，将80g的S4溶入800mL二氯甲烷溶液中，并将溶液缓慢加入体系中，保持温度在22.5℃搅拌5小时，HPLC检测直至原料消耗完全；
[0065] 后处理：控温在10℃将二氯甲烷浓缩去除，加入800mL甲叔醚、400mL的DMF以及400mL的水，萃取分液，400mL的DMF以及400mL的水，进行2次洗涤有机相，干燥浓缩至400mL，滴加到2400mL的正庚烷中析晶得到最后产品S5，即2‑TBS尿苷单体，收率80％，纯度
99.26％，质量为83.40g。
[0066] 结合谱图可知，在11.403min和11.513min处有两个明显的吸收峰，并且二者很靠近，均为目标产物，分裂成两个峰的原因可能是目标产物是手性分子，滞留时间略有差异。因此可以看出，目标产物的纯度为99.26％。
[0067] 补充说明，上述各实施例中，Step1对应的方程式为：
[0068]
[0069] Step2对应的方程式为：
[0070]
[0071] Step3对应的方程式为：
[0072]
[0073] Step4对应的方程式为：
[0074]
[0075] Step5对应的方程式为：
[0076]
[0077] 以上均为本申请的较佳实施例，并非依此限制本申请的保护范围，故：凡依本申请的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本申请的保护范围之内。
