技术领域
[0001] 本发明涉及放射性免疫治疗技术领域，尤其涉及用于放射性免疫治疗的Lu‑177标记MUC1抗体。
相关背景技术
[0002] 177Lu的物理半衰期为6.7天，发射能量为176（12.2%）、384（9.1%），和497（78.6%）KeV的β粒子，对肿瘤细胞杀伤力强，但穿透力较弱，较不会伤及周边正常细胞，是一种很有177
潜力的放射性治疗用核素。另外， Lu还可发射能量为113（6.4%），208（11.0%）KeV的β射线
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并用于显像。而且 Lu较长的半衰期与抗体体内半衰期接近，能够很好的实现治疗作用。
[0003] Mucin1（简称MUC1）是重要的肿瘤标志物之一，它是粘蛋白家族中最容易识别的跨膜蛋白，由人MUC1基因编码，具有高度糖基化的胞外结构域。
[0004] 目前，针对基于MUC1抗体的放射诊断与治疗药物也已进行了大量研究。比如，64Cu64
标记PR81用于乳腺癌的PET显像的研究结果表明，Cu‑DOTA‑PR81具有良好的肿瘤靶向性，在肿瘤中具有长时间的高吸收和保留（24小时为7.63%ID/g，48小时后为6.09%ID/g），表明
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这种放射免疫偶联物在表达MUC1的肿瘤PET成像方面具有潜力； In标记PR81用于检测表达MUC1的乳腺癌，其在肿瘤部位的积累具有高灵敏度和特异性，可以用于该肿瘤抗原的预
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后成像； In‑MX‑DTPA‑BrE‑3（BrE‑3，一种鼠源IgG1 MUC1 mAb）的临床试验证明该抗体能够靶向过度表达MUC1的乳腺肿瘤，可以检测晚期乳腺癌患者86%的已知病灶。单次高剂量使
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用 Y‑MX‑DTPA‑BrE‑3的I期临床试验已经启动用于检测晚期乳腺癌。 Tc‑mAb‑170H.82（170H.82，MUC‑1鼠类抗体）原发性乳腺癌和局部复发灶显示出高灵敏度和阳性预测价值；
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Zr‑Df'‑GGSK‑1/30（Df'= desferrioxamine），用于检测表达hu(TA)MUC1的乳腺肿瘤，在表达hu(TA)MUC1的肿瘤小鼠中观察到肿瘤的高特异性摄取（72小时后>55%ID/g）和非靶组织的低非特异性摄取值，得到高对比度PET成像。
[0005] 但是，目前还没有一种能够针对肺癌的放射诊断与治疗药物。
具体实施方式
[0037] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0038] 本发明具体实施方式中，使用的MUC1抗体为IgG4型抗MUC1抗体，购自本康生物制药（深圳）有限公司的重组人MUC1单克隆抗体。
[0039] 实施例1
[0040] 本实施例提供177Lu‑DOTA‑MUC1的制备方法：所述制备方法包括，在2.5mL pH值分别为7.0、7.5、8.0、8.2、8.5、9.0、9.5的Na2HPO4‑ NaH2PO4缓冲溶液中，抗体（2.5mg/mL）与DOTA‑NHS摩尔比1:40，在4℃下孵育40h。
偶联反应后，用CH3COOH‑CH3COONH4缓冲液（0.2 M，pH=4.5）处理PD‑10柱，随后使用处理过的PD‑10柱进行偶联产物纯化，除去未结合的螯合剂，并可同时将Na2HPO4‑NaH2PO4缓冲体系置
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换为CH3COOH‑CH3COONH4缓冲液（0.2 M，pH=4.5）。在偶联纯化物中加入 LuCl3溶液（活度
10mCi）在37℃下反应2h。标记产物的HPLC图详见图1‑图7。
[0041] 其中，图1‑3为Na2HPO4‑ NaH2PO4缓冲溶液的pH值分别为7.0、7.5、8.0时，制备得到177
放射免疫偶联物的HPLC结果（未纯化）。纯化后， Lu‑DOTA‑MUC1的放射化学纯度可达90%以上。
[0042] 图1‑3中，左侧保留时间8.7min的峰为目标产物峰，右侧保留时间11.4min的为未标记的放射性峰。图4 图7的HPLC结果未出现保留时间8.7min左右的目标产物峰。
[0043] 图8是本实施例制备~ 177Lu‑DOTA‑MUC1的技术路线图。抗体与DOTA‑NHS在4℃下孵育40h。偶联反应后，用CH3COOH‑CH3COONH4缓冲液处理PD‑10柱进行偶联产物纯化，除去未结合的螯合剂，并将Na2HPO4‑NaH2PO4缓冲体系置换为CH3COOH‑CH3COONH4缓冲液。在偶联纯化物
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中加入 LuCl3溶液在37℃下反应2h即可得到未纯化的标记产物。
[0044] 实施例2
[0045] 本实施例研究177Lu‑DOTA‑MUC1在KM正常鼠和A549肺癌模型动物中的分布数据。
[0046] 用1ml注射器吸取纯化后的177Lu‑DOTA‑MUC1（实施例1中为Na2HPO4‑ NaH2PO4缓冲溶液pH值8.0时制备）适量，分别通过尾静脉给药正常KM鼠和A549肺癌肿瘤模型鼠，其中显177
像小鼠注射活度300μCi，生物分布小鼠注射100μCi Lu‑DOTA‑MUC。在24h、48h、72h、96h等时项进行SPECT/CT显像，同时解剖生物分布给药组进行脏器计数测量，计算肿瘤和正常脏器的放射性摄取（ID%/g）。
[0047] 图9是本实施例中KM正常鼠在给药177Lu‑DOTA‑MUC1后24h和48h时的SPECT/CT显像177
结果图。图10是本实施例中A549肺癌荷瘤鼠在给药 Lu‑DOTA‑MUC1后24h和48h时的SPECT/
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CT显像结果图。图11是本实施例中A549肺癌荷瘤鼠在给药 Lu‑DOTA‑MUC1后72h和96h时的
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SPECT/CT显像结果图。 Lu‑DOTA‑MUC1在KM和A549肺癌肿瘤鼠的显像结果表明，给药短时间内，药物主要分布在血液、心脏、肺部和肝脏。在24h后，肿瘤大量特异性摄取，肿瘤部位累积增多且具有长时间滞留。相对其他正常器官，肝脏的摄取较高。
[0048] 图12是本实施例中KM正常鼠在给药177Lu‑DOTA‑MUC1后24h、48h、72h和96h时小鼠177
各脏器的分布数据。图13是本实施例中A549肺癌荷瘤鼠在给药 Lu‑DOTA‑MUC1后24h、48h、
72h和96h时小鼠各脏器的分布数据。结果显示：从体内分布数据可以看到，药物在血液中的浓度较高，同时清除较慢、滞留时间较长，这与抗体较慢的分布速度有关，也可能是由于血液中游离的抗原与药物结合的原因。肝和脾的摄取较高，可能与抗体药物复杂的代谢途径有关。药物在肿瘤部位大量摄取，累积越来越多且具有很长的滞留时间，可以达到较好的治疗效果。
[0049] 实施例3
[0050] 使用氯化钠注射液冲洗PD‑10柱后纯化177Lu‑DOTA‑MUC1溶液（实施例1中Na2HPO4‑ NaH2PO4缓冲溶液pH值为8.0时制备），取0.5mL在37℃温度下保存，分别测定24小时、48小时、72小时和96小时的放射化学纯度。
[0051]
[0052] 177Lu‑DOTA‑MUC1在未添加其他组分条件下，在生理盐水中72h内较为稳定，96小时放化纯相对72h时有较明显降低。
[0053] 最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
