[0001] 本发明属于化学医药技术领域，具体涉及一种苯并[d]异恶唑类化合物及其应用。

[0002] 表观遗传学是研究没有DNA序列变化的可遗传的基因表达的改变。表观遗传学主要通过DNA的甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和非编码RNA调控等方式控制基因的表达。其中，组蛋白是染色质的核心，参与转录后修饰，主要包括乙酰化、甲基化、磷酸化和泛素化等。溴结构域(BRD)超家族蛋白的溴结构域和额外末端结构域(BET)蛋白是重要的表观遗传
“阅读器”。BET家族蛋白包含BRD2、BRD3、BRD4和BRDT四个成员，且蛋白中包含两个串联的N‑末端溴结构域(BD1和BD2)。N‑末端溴结构域由4个α螺旋(αZ，αA，αB和αC)、ZA环和BC环组成。
这类蛋白依赖于溴结构域的疏水口袋识别乙酰化的组蛋白赖氨酸残基来发挥功能。BET蛋
白影响着细胞生长、增殖分化、凋亡和坏死等过程。多项研究表明，BET功能异常与癌症、细胞增殖性紊乱、炎症、自身免疫性疾病、败血症或病毒感染(如新型冠状病毒)等的发生发展相关。

[0003] GSPT1是一种翻译终止因子，通过结合eRF1，介导终止密码子识别并促进新生肽自核糖体释放。GSPT1也参与若干其他关键的细胞过程，如细胞周期调节、细胞骨架组织、细胞凋亡和转录。因此，GSPT1水平的下调可损害细胞增殖的控制，并促进细胞迁移和瘢痕形成。
GSPT1牵涉若干不同癌症类型(包括乳腺癌、肝细胞癌、胃癌和前列腺癌)的致瘤驱动。

[0004] BET蛋白和GSPT1蛋白异常表达与疾病相关，研究发现，靶向蛋白降解剂不仅能抑制靶蛋白活性，还可以利用体内的泛素‑蛋白酶体系统清除靶蛋白，从而达到治疗目的。现已开发出数个BET或GSPT1降解剂。

[0005] CN109311890A公开了一种BET蛋白降解剂，该发明公开的化合物降解BET溴结构域蛋白并且可用于各种疾病和病况的治疗，特别地，本公开的化合物可用于治疗其中BET溴结构域蛋白降解提供有益效果的疾病或病况的方法，所述疾病或病况例如，癌症和增殖性疾
病。

[0006] CN110062759A公开了一种作为BET蛋白降解剂的稠合的1,4‑氧氮杂环化合物。该发明公开的化合物是BET溴结构域蛋白降解剂，因此可用于治疗或预防其中BET溴结构域
(例如BRD2、BRD3、BRD4、BRD‑t或其同种型或突变体)的降解提供有益效果的疾病或病况。

[0007] CN112543764A公开了一种化合物，其在对癌细胞的细胞毒性作用、诱导癌细胞中BET蛋白降解的作用和对BET蛋白与乙酰化组蛋白的结合的抑制作用方面是优异的，并且可
用作抗癌剂、BET蛋白降解诱导剂或BET蛋白抑制剂。

[0008] CN111032043A公开了一种2‑(4‑氯苯基)‑N‑((2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1‑氧代异吲哚啉‑5‑基)甲基)‑2,2‑二氟乙酰胺的组合物和使用方法，该化合物作为单一剂测试或与依维莫司组合测试时，其对来自骨髓增生异常综合征患者的骨髓单核细胞中的半胱天冬酶‑3活化和GSPT1降解的作用。

[0009] 目前，多个公布的BET或GSPT1降解剂在体内或体外都具有较好的临床前抗肿瘤活性，但其研究仍处于早期阶段。因此，亟待开发一种新型的、高效的可诱导BET家族蛋白和/或GSPT1蛋白降解的化合物。

[0010] 综上所述，靶向BET蛋白和/或GSPT1蛋白的降解剂对于发展靶向癌症、炎性疾病、细胞增殖性紊乱、自身免疫疾病、败血症和病毒感染等在内疾病的治疗策略可能是有益的。

[0128] 下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

[0129] 制备例

[0130] 本制备例提供所述苯并[d]异恶唑类化合物制备过程所需原料T‑1/T‑2合成步骤

[0131] 化合物T‑1/T‑2的合成路线如下所示：

[0132]

[0133] (a)N‑(2,4‑二甲氧苯基)乙酰胺(1‑1)

[0134] 将2,4‑二甲氧基苯胺(25g，163.21mmol)和三乙胺(36.29mL，104.4mmol)溶于40mL二氯甲烷，冰水浴条件下，滴加醋酸酐(21.6mL，228.49mmol)反应结束后在反应体系中加入10％柠檬酸水溶液。用二氯甲烷溶液萃取，有机层分别用稀盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水萃取，无水硫酸钠干燥。减压浓缩后得到目标产物为深棕色固体(30g，收率94％)。

[0135] 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.99(s,1H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),6.59(s,1H),6.45(d,+
J＝8.8Hz,1H),3.79(s,3H),3.73(s,3H),2.01(s,3H).MS(ESI)m/z[M+H]理论值：196.09；
实际值：196.1。

[0136] (b)N‑(5‑乙酰基‑4‑羟基‑2‑甲氧基苯基)乙酰胺(1‑2)

[0137] 将1‑1(30g，153.85mmol)溶于50mL二氯甲烷，冰浴下分批缓慢加入三氯化铝(86.98g，652.32mmol)、氩气保护下加入乙酰氯(34.6mL，489.24mmol)，43℃下搅拌反应。反应结束后将反应液缓慢倒入冰水中淬灭2h，后用二氯甲烷萃取，有机层分别用水、饱和食盐水萃取，无水硫酸钠干燥。有机层减压浓缩后，粗产物过柱处理(PE:EA＝1:1),得目标产物(26.1g，收率76％)。

[0138] 1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.54(s,1H),9.17(s,1H),8.26(s,1H),6.59(s,1H),3.88+
(s,3H),2.52(s,3H),2.05(s,3H).MS(ESI)m/z[M+H]理论值：224.08；实际值：224.1。

[0139] (c)(E)‑N‑(4‑羟基‑5‑(1‑(羟基亚氨基)乙基)‑2‑甲氧基苯基)乙酰胺(1‑3)[0140] 将1‑2(26.1g，116.80mmol)溶于200mL乙醇水溶液(无水乙醇:水＝3:1，v/v)，加入盐酸羟胺(12.99g，186.88mmol)和醋酸钠(15.33g，186.88mmol)，80℃回流2h。TLC监测反应。反应结束后减压旋干溶剂，加入水，减压抽滤，将滤饼水洗干燥，得目标产物(24.5g，收率88％)。

[0141] 1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.74(s,1H),11.33(s,1H),9.03(s,1H),7.84(s,1H),+
6.54(s,1H),3.80(s,3H),2.17(s,3H),2.02(s,3H).MS(ESI)m/z[M+H]理论值：239.10；实
际值：239.1。

[0142] (d)N‑(6‑甲氧基‑3‑甲基苯并异恶唑‑5‑基)乙酰胺(1‑4)

[0143] 将1‑3(24.5g)溶于200mL 1,4‑二氧六环，40‑60℃内剧烈搅拌下加入N,N‑二甲基甲酰胺二甲基缩醛。待反应体系稳定后，升温至100℃反应7min。冷却至室温，用二氯甲烷溶解，分别用水、饱和食盐水萃取，无水硫酸钠干燥。有机层减压浓缩后，得目标产物(22.2g，收率98％)。

[0144] 1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.26(s,1H),8.24(s,1H),7.36(s,1H),3.94(s,3H),2.47+
(s,3H),2.11(s,3H).MS(ESI)m/z[M+H]理论值：221.08；实际值：221.1。

[0145] (e)6‑甲氧基‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑5‑胺(1‑5)

[0146] 将1‑4(22.2g，100.64mmol)溶于400mL盐酸(3mol/L)，90℃回流3h。TLC监测反应。反应完毕，加入氢氧化钠溶液(3mol/L)调pH至中性(7‑9)，析出沉淀，减压过滤，少量水洗涤，干燥，得到棕褐色固体(17.1g,收率95％)。

[0147] 1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.14(s,1H),6.80(s,1H),4.80(s,2H),3.88(s,3H),2.39(s,3H)。

[0148] (f)5‑氨基‑3‑甲基苯并异恶唑‑6‑醇(1‑6)

[0149] 将1‑5(17.1g，95.96mmol)溶于100mL二氯甲烷，取BBr3溶于100mL二氯甲烷，冰浴下缓慢加入反应体系，常温下过夜反应。反应结束后，缓慢滴加甲醇和氯化胺溶液淬灭。加水，用氢氧化钠溶液调节pH至7，乙酸乙酯萃取。有机层分别用水、饱和食盐水萃取，无水硫酸钠干燥。有机层减压浓缩干燥得目标产物(6g，收率38％)。

[0150] (g)5‑溴‑N‑(6‑羟基‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑5‑基)‑2‑甲氧基苯磺酰胺(1‑7)[0151] 将1‑6(6g，36.57mmol)和4‑氯苯磺酰氯(10.44g，36.57mmol)溶于二氯甲烷中，加入7mL吡啶，常温下反应4h，反应结束后加水萃取，有机层分别用用稀盐酸水溶液，水、饱和食盐水萃取，无水硫酸钠干燥。有机层减压浓缩后粗产物过柱处理(DCM:MeOH＝250:1‑125:1),得目标产物(2.5g，收率17％)。

[0152] 1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.70(s,1H),9.09(s,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.69(d,J＝2.5Hz,1H),7.54(s,1H),7.18(d,J＝8.9Hz,1H),6.88(s,1H),3.82(s,3H),2.44
(s,3H)。

[0153] (h)2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰氨基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)乙酸叔丁酯(1‑8)

[0154] 将化合物1‑7(500mg，1.21mmol)溶于超干DMF中，加入KI(20mg，0.12mmol)、KHCO3(182mg，1.82mmol)。再将溴丁酸叔丁酯(0.21mL，1.21mmol)溶于2mL超干DMF中，冰浴搅拌并在氩气保护下分批加入反应体系，40℃下搅拌反应4h。反应结束后，将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行三次萃取，合并有机层并用饱和食盐水萃取。将有机层分离合并后用无水硫酸钠干燥并进行减压浓缩。浓缩后的粗产物通过硅胶柱进行分离纯化(PE:EA＝10:1，v/
v)，得到目标产物为白色固体(300mg，收率47％)。

[0155] (i)2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰氨基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)乙酸(T‑1)

[0156] 将化合物1‑8(300mg，0.59mmol)溶于二氯甲烷溶剂(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，常温下搅拌反应，通过TLC监测反应。反应结束后进行减压旋干溶剂。产物直接用于下一步反应。

[0157] (j)4‑(5‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基丁酸叔丁酯(1‑9)

[0158] 将化合物1‑7(500mg，1.21mmol)溶于超干DMF中，加入KI(20mg，0.12mmol)、KHCO3(182mg，1.82mmol)。再将溴丁酸叔丁酯(0.21mL，1.21mmol)溶于2mL超干DMF中，冰浴搅拌并在氩气保护下分批加入反应体系，40℃下搅拌反应4h，通过TLC进行监测反应。反应结束后，将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行三次萃取，合并有机层并用饱和食盐水萃取。将有机层分离合并后用无水硫酸钠干燥并进行减压浓缩。浓缩后的粗产物通过硅胶柱进行分离
纯化(PE:EA＝10:1，v/v)，得到目标产物为白色固体(134mg，收率20％)。

[0159] (k)4‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺基)‑3‑甲基苯并异恶唑‑6‑基)氧基)丁酸(T‑2)

[0160] 将化合物1‑9(134mg，0.24mmol)溶于二氯甲烷溶剂(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，常温下搅拌反应，通过TLC监测反应。反应结束后进行减压旋干溶剂。产物直接用于下一步反应。

[0161] 实施例1

[0162] 2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰氨基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)‑N‑(2‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)乙酰胺)乙基)

[0163]

[0164] 化合物1的合成路线如下所示：

[0165]

[0166] (a)2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑4‑羟基异吲哚啉‑1,3‑二酮(2‑1)

[0167] 将3‑羟基苯二甲酸酐(5.00g，30.47mmol)和3‑氨基‑2,6‑哌啶‑二酮盐酸盐(5.00g，30.38mmol)溶于甲苯溶剂中，并加入TEA(4.65mL)，在115℃下加热回流过夜，通过TLC监测反应。反应结束后进行减压旋干溶剂，粗产物通过硅胶柱进行分离纯化(DCM:MeOH
＝50:1，v/v)，得到目标产物为2‑1，墨绿色固体(8.00g，收率96％)。

[0168] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.18(brs,1H),11.08(s,1H),7.65(t,J＝7.8Hz,1H),7.32(d,J＝7.1Hz,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),5.09‑5.04(m,1H),2.92‑2.85(m,1H),2.64‑
2.53(m,2H),2.04‑2.00(m,1H)。

[0169] (b)2‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)乙酸叔丁酯(2‑2)[0170] 将化合物2‑1(2.00g，7.33mmol)溶于超干DMF中，加入KI(122mg，0.733mmol)、KHCO3(1.10g，11.00mmol)。再将溴乙酸叔丁酯(1.28mL，8.80mmol)溶于5mL超干DMF中，并在氩气保护下分批加入反应体系中，在60℃下搅拌过夜，通过TLC监测反应。反应结束后将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行萃取，萃取步骤重复三次，合并有机层并用饱和食盐水
萃取。将有机层分离合并后用无水硫酸钠干燥，并进行减压浓缩。粗产物通过硅胶柱进行分离纯化(DCM:MeOH＝100:1，v/v)，得到目标产物为2‑2，白色固体(2.15g，收率76％)。

[0171] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ11.11(s,1H),7.80(dd,J＝8.3,7.5Hz,1H),7.48(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.6Hz,1H),5.10(dd,J＝12.8,5.3Hz,1H),4.97(s,2H),2.93‑2.85
(m,1H),2.61‑2.53(m,2H),2.06‑2.01(m,1H),1.43(s,9H)。

[0172] (c)2‑(2‑(2,6‑二氧阿哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)乙酸(2‑3)

[0173] 将化合物2‑2(2.05g，5.20mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，常温下搅拌反应，通过TLC监测反应。反应结束后通过减压旋干溶剂。得到目标产物为2‑3，白色固体(1.40g，收率81％)，产物直接用于下一步反应。

[0174] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ11.11(s,1H),7.79(dd,J＝8.4,7.4Hz,1H),7.48(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.6Hz,1H),5.10(dd,J＝12.8,5.3Hz,1H),4.99(s,2H),2.94‑2.90
(m,1H),2.61‑2.53(m,2H),2.06‑2.01(m,1H)。

[0175] (d)(2‑(2‑((2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑4‑基)氧基)乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2‑4)

[0176] 取化合物2‑3(300mg，0.90mmol)溶于超干DMF中，加入HATU(411mg，1.08mmol)，氩气保护下加入DIPEA(0.5mL，2.70mmol)，常温下搅拌反应0.5h，再加入N‑BOC‑乙二胺(173mg，1.08mmol)，常温下搅拌反应，通过TLC监测反应。反应结束后，将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行三次萃取，合并有机层并用饱和食盐水萃取一次。将有机层分离合并后
用无水硫酸钠干燥，并进行减压浓缩。粗产物通过硅胶柱进行分离纯化(DCM:MeOH＝100:1，v/v)，得到目标产物为2‑4，淡黄绿色固体(136mg，收率23％)。

[0177] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ11.11(s,1H),8.03(t,J＝5.1Hz,1H),7.81(t,J＝8.0Hz,1H),7.50(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.5Hz,1H),6.84(t,J＝5.2Hz,1H),5.15‑
5.09(m,1H),4.76(s,2H),3.19‑3.15(m,2H),3.03‑2.99(m,2H),2.90‑2.85(m,1H),2.62‑
2.50(m,2H),2.05‑2.00(m,1H),1.36(s,9H)。

[0178] (e)N‑(2‑氨基乙基)‑2‑((2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异喹啉‑4‑基)氧基)乙酰胺(2‑5)

[0179] 将化合物2‑4(136mg，0.36mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，常温下搅拌反应，TLC监测反应。反应结束后进行减压旋干溶剂。产物为2‑5，直接用于下一步反应。

[0180] (f)2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰氨基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)‑N‑(2‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)乙酰胺)乙基)(实施例1)

[0181] 将化合物T1(50mg，0.11mmol)和HATU(46mg，0.12mmol)溶于DMF中，加入DIPEA(0.1mL，0.53mmol)，搅拌反应0.5h。再向反应体系中加入2‑5(44mg，0.12mmol)，常温下搅拌反应，TLC监测反应。反应结束后，将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行萃取，重复三次，合并有机层并用饱和食盐水萃取。将有机层分离后用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。粗产物通过硅胶色谱柱进行纯化(DCM:MeOH＝100:1，v/v)，得到目标产物为化合物1，白色固体
(33mg，收率38％)。

[0182] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.12(s,1H),9.67(s,1H),8.21(s,1H),8.17(s,1H),7.77(t,J＝7.8Hz,1H),7.71‑7.69(m,3H),7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.36(d,J＝8.5Hz,1H),
7.31(s,1H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),5.13‑5.10(m,1H),4.79(s,2H),4.36(s,2H),3.53(s,
3H),3.24‑3.20(m,4H),2.93‑2.86(m,1H),2.62‑2.55(m,2H),2.47(s,3H),2.04‑2.03(m,
13
1H)；C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.71,169.82,167.36,166.67,166.66,165.37,161.14,
155.92,154.99,153.31,137.13,136.84,133.01,131.36,129.50,123.12,120.32,118.53,
116.80,115.99,115.00,114.85,110.61,93.49,67.67,67.55,56.18,48.79,38.03,30.92,
‑
21.98,9.43；MS(ESI)m/z[M‑H] 理论值：825.09和827.09，实际值：825.8和827.5；HPLC分析:MeOH‑H2O(85:15),9.26min,98.26％纯度。

[0183] 实施例2

[0184] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(3‑(2‑((2‑(2,6))‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑4‑基)氧基)乙酰氨基)丙基)乙酰胺

[0185]

[0186] 合成方法参照实施例1的合成路线。

[0187] 区别仅在于：将N‑BOC‑乙二胺原料替换为等摩尔量的N‑叔丁氧羰基‑1,3‑丙二胺原料。

[0188] 化合物2为白色固体，收率28％。

[0189] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.11(s,1H),9.74(s,1H),8.25‑8.23(m,1H),8.12‑8.11(m,1H),7.80(t,J＝7.6Hz,1H),7.71‑7.68(m,3H),7.48(d,J＝7.0Hz,1H),7.40(d,J＝
8.3Hz,1H),7.29(s,1H),7.07(d,J＝8.6Hz,1H),5.13‑5.10(m,1H),4.80(s,2H),4.38(s,
2H),3.55(s,3H),3.22‑3.06(m,4H),2.97‑2.81(m,1H),2.67‑2.53(m,2H),2.49‑2.44(m,
13
3H),2.09‑1.98(m,1H),1.65‑1.53(m,2H)；C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.74,169.84,
166.85,166.71,166.42,165.42,155.91,155.06,154.96,153.53,137.03,136.91,133.03,
131.28,120.41,116.81,116.02,114.99,114.85,110.58,93.55,67.75,67.64,56.17,
‑
48.80,36.20,36.10,30.93,29.21,21.99,9.43；MS(ESI)m/z[M‑H] 理论值：839.11和
841.11；实际值：839.5和841.8；HPLC分析:MeOH‑H2O(85:15),11.20min,97.32％纯度。

[0190] 实施例3

[0191] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(4‑(2‑((2‑(2,6))‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑4‑基)氧基)乙酰胺基)丁基)乙酰胺

[0192]

[0193] 合成方法参照实施例1的合成路线。

[0194] 区别仅在于：将N‑BOC‑乙二胺原料替换为等摩尔量的N‑叔丁氧羰基‑1,4‑丁二胺原料。

[0195] 化合物3为白色固体，收率25％。

[0196] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.12(s,1H),9.70(s,1H),8.06(t,J＝5.4Hz,1H),7.96(t,J＝5.4Hz,1H),7.80(t,J＝7.9Hz,1H),7.72‑7.70(m,3H),7.49(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.5Hz,1H),7.30(s,1H),7.08(d,J＝9.5Hz,1H),5.15‑5.10(m,1H),4.77(s,2H),
4.38(s,2H),3.54(s,3H),3.15‑3.10(m,4H),2.93‑2.85(m,1H),2.61‑2.54(m,2H),2.49‑
13
2.48(m,3H),2.05‑2.01(m,1H),1.48‑1.37(m,4H)；C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.72,
169.83,166.69(2×C),166.23,165.48,161.14,155.91,155.04,154.99,153.43,137.14,
136.90,133.01,131.26,129.58,123.19,120.40,118.60,116.81,116.03,115.00,114.83,
110.58,93.50,67.71,67.65,56.17,48.80,38.01(2×C),30.93,26.54,26.49,21.97,
‑
9.42；MS(ESI)m/z[M‑H]理论值：853.12和855.12；实际值：853.4和855.5；HPLC分析:MeOH‑H2O(85:15),9.40min,95.21％纯度。

[0197] 实施例4

[0198] 2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰氨基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)‑N‑(5‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)乙酰胺)戊酰胺

[0199]

[0200] 合成方法参照实施例1的合成路线。

[0201] 区别仅在于：将N‑BOC‑乙二胺原料替换为等摩尔量的单BOC‑戊二胺原料。

[0202] 化合物4为白色固体，收率29％。

[0203] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.11(s,1H),9.77(s,1H),8.03(brs,1H),7.92(brs,1H),7.80(t,J＝7.8Hz,1H),7.72‑7.70(m,3H),7.48(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.5Hz,
1H),7.29(s,1H),7.08(d,J＝8.8Hz,1H),5.15‑5.12(m,1H),4.78(s,2H),4.39(s,2H),3.55
(s,3H),3.13‑3.08(m,4H),2.94‑2.87(m,1H),2.63‑2.56(m,2H),2.49(s,3H),2.06‑2.04
13
(m,1H),1.39‑1.36(m,4H),1.30‑1.21(m,2H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.76,169.86,
166.73,166.65,166.26,165.51,161.09,155.92,155.07,154.97,153.59,137.03,136.90,
133.02,131.26,129.85,120.39,116.79,116.01,114.99,114.84,110.59,93.49,67.77,
67.64,56.18,48.83,38.27,38.26,30.95,28.79,28.66,23.69,22.00,9.44.MS(ESI)m/z
‑
[M‑H] 理论值：867.14和869.14；实际值：867.5和869.2.HPLC分析:MeOH‑H2O(85:15),
9.44min,98.43％纯度。

[0204] 实施例5

[0205] 2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰氨基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)‑N‑(6‑(2‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)乙酰氨基)己酰胺)

[0206]

[0207] 合成方法参照实施例1的合成路线。

[0208] 区别仅在于：将N‑BOC‑乙二胺原料替换为等摩尔量的N‑(6‑氨基己基)氨基甲酸叔丁酯原料。

[0209] 化合物5为白色固体，收率69％。

[0210] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.12(s,1H),9.70(s,1H),8.03(s,1H),7.92(s,1H),7.81(t,J＝7.7Hz,1H),7.71(d,J＝10.0Hz,3H),7.49(d,J＝7.0Hz,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,
1H),7.29(s,1H),7.09(d,J＝8.6Hz,1H),5.21‑5.05(m,1H),4.77(s,2H),4.40(s,2H),3.56
(s,3H),3.22‑3.01(m,4H),2.96‑2.82(m,1H),2.58(m,2H),2.37(s,3H),2.03(m,1H),1.45‑
13
1.32(m,4H),1.22(m,4H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.74,169.85,166.72,166.62,
166.19,165.51,161.17,155.92,155.02,154.99,153.47,137.13,136.90,133.02,131.23,
129.66,123.22,120.39,118.67,116.84,116.05,115.00,114.84,110.61,93.45,67.72,
67.68,56.18,48.83,38.25,30.95,29.11,28.94,26.04,25.97,22.00,9.43.MS(ESI)m/z
‑
[M‑H] 理论值：881.15和883.15；实际值：881.6和883.5.HPLC分析:MeOH‑H2O(85:15),
9.86min,98.60％纯度。

[0211] 实施例6

[0212] 2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰氨基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)‑N‑(2‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)乙酰胺)乙酰胺

[0213]

[0214] 化合物6的合成路线如下所示：

[0215]

[0216] (a)2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑4‑氟异吲哚啉‑1,3‑二酮(3‑1)

[0217] 将3‑氟酞酐(5.00g，30.10mmol)、3‑氨基‑2,6‑哌啶‑二酮盐酸盐(4.95g，30.10mmol)和醋酸钠(2.95g，36.00mmol)溶于醋酸溶液中，120℃下加热回流过夜，TLC监测反应。反应结束后，加入冰水至固体洗出，并进行抽滤，用水多次洗滤饼，在60℃干燥箱中烘干滤饼。得到目标产物为3‑1，灰白色固体(7.32g，收率88％)。

[0218] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.15(s,1H),7.95(m,1H),7.79(d,J＝7.4Hz,1H),7.73(t,J＝8.9Hz,1H),5.18‑5.14(m,1H),2.93‑2.85(m,1H),2.62‑2.52(m,2H),2.09‑2.05(m,1H)。

[0219] (b)(2‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)氨基)叔丁基氨基甲酸乙酯(3‑2)

[0220] 将化合物3‑1(100mg，0.36mmol)溶于超干DMF中，氩气保护下加入N‑BOC‑乙二胺(0.06mL，0.40mmol)，80℃下搅拌反应，通过TLC监测反应。反应结束后，将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行三次萃取后合并有机层，并用饱和食盐水萃取一次。将有机层分离合并后用无水硫酸钠干燥，并通过减压浓缩。粗产物通过硅胶柱进行纯化分离(DCM:MeOH＝
100:1，v/v)，得到目标产物为3‑2，黄色固体(30mg，收率20％)。

[0221] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ11.08(s,1H),7.57(t,J＝7.8Hz,1H),7.14(d,J＝8.6Hz,1H),7.03‑7.00(m,2H),6.70(t,J＝5.2Hz,1H),5.05(dd,J＝12.7,5.2Hz,1H),3.37‑
3.32(m,2H),3.12‑3.11(m,2H),2.93‑2.84(m,1H),2.61‑2.54(m,2H),2.03‑2.00(m,1H),
1.36(s,9H)。

[0222] (c)4‑((2‑氨基乙基)氨基)‑2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)异吲哚‑1,3‑二酮(3‑3)[0223] 将化合物3‑2(30mg，0.07mmol)溶于二氯甲烷溶剂(5mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，常温下搅拌反应，通过TLC监测反应。反应结束后进行减压旋干溶剂。产物3‑3直接用于下一步反应。

[0224] (d)2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰氨基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)‑N‑(2‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)乙酰胺)乙酰胺(实施例6)

[0225] 将化合物T‑1(34mg，0.07mmol)和HATU(33mg，0.09mmol)溶于DMF中，加入DIPEA(0.07mL，0.37mmol)，搅拌反应0.5h。再向反应体系中加入2‑3(23mg，0.07mmol)，常温下搅拌反应，TLC监测反应。反应结束后，将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行萃取，重复三次，合并有机层并用饱和食盐水萃取。将有机层分离后用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。粗产物通过硅胶色谱柱进行纯化(DCM:MeOH＝100:1，v/v)，得到目标产物为化合物6，黄色固体(20mg，收率36％)。

[0226] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(s,1H),7.90(s,1H),7.63‑7.59(m,2H),7.52‑7.42(m,3H),7.05‑7.04(m,1H),6.91‑6.86(m,3H),6.35(t,J＝5.0Hz,1H),4.95‑4.93(m,1H),
4.49(s,2H),3.88(s,3H),3.56‑3.55(m,2H),3.46‑3.45(m,2H),2.88‑2.73(m,3H),2.47(s,
13
3H),2.22‑2.15(m,1H),. C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.75,170.05,168.66,167.23,
167.19,161.09,155.92,154.96,153.32,146.18,137.12,136.18,132.20,131.27,129.48,
123.09,118.56,116.95,115.01,114.86,110.59,110.55,109.32,93.48,67.67,56.19,
‑
48.53,41.45,37.85,30.96,22.13,9.41.MS(ESI)m/z[M‑H]理论值：767.08和769.08；实际值：767.0和769.5.HPLC分析:MeOH‑H2O(70:30),13.75min,97.84％纯度。

[0227] 实施例7

[0228] 2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰氨基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)‑N‑(3‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧异吲哚‑4‑基)乙酰胺丙基)

[0229]

[0230] 合成方法参照实施例6的合成路线。

[0231] 区别仅在于：将N‑BOC‑乙二胺原料替换为等摩尔量的N‑叔丁氧羰基‑1,3‑丙二胺原料。

[0232] 化合物7为黄色固体，收率46％。

[0233] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.10(s,1H),9.70(s,1H),8.17(t,J＝4.9Hz,1H),7.71‑7.70(m,3H),7.56(t,J＝5.8Hz,1H),7.32(s,1H),7.08(d,J＝8.7Hz,1H),7.05‑6.98
(m,2H),6.66(t,J＝6.0Hz,1H),5.06‑5.02(m,1H),4.41(s,2H),3.54(s,3H),3.33‑3.26(m,
2H),3.23‑3.19(m,2H),2.95‑2.78(m,1H),2.63‑2.56(m,2H),2.49(s,3H),2.03‑2.01(m,
13
1H),1.71‑1.65(m,2H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.74,170.04,168.81,167.25,
166.54,161.14,155.91,154.98,153.40,146.20,137.11,136.20,132.23,131.20,129.63,
123.16,118.61,117.00,115.03,114.83,110.59,110.44,109.22,93.44,67.68,56.17,
‑
48.53,35.94,30.95,28.87,20.73,22.13,9.41.MS(ESI)m/z[M‑H] 理论值：781.10和
783.10；实际值：781.1和783.0.HPLC分析:MeOH‑H2O(85:15),9.10min,95.11％纯度。

[0234] 实施例8

[0235] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(4‑((2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑4‑基)氨基)丁基)乙酰胺

[0236]

[0237] 合成方法参照实施例6的合成路线。

[0238] 区别仅在于：将N‑BOC‑乙二胺原料替换为等摩尔量的N‑叔丁氧羰基‑1,4‑丁二胺原料。

[0239] 化合物8为黄色固体，收率54％。

[0240] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.09(s,1H),9.69(s,1H),8.08(s,1H),7.71‑7.69(m,3H),7.56(t,J＝7.7Hz,1H),7.30(s,1H),7.09‑7.06(m,2H),7.02‑7.01(m,1H),6.52(t,J＝
5.1Hz,1H),5.06‑5.03(m,1H),4.39(s,2H),3.54(s,3H),3.32‑3.31(m,2H),3.16‑3.14(m,
2H),2.98‑2.80(m,1H),2.67‑2.55(m,2H),2.49‑2.38(s,3H),2.09‑1.97(m,1H),1.63‑1.41
13
(m,4H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.75,170.05,168.91,167.26,166.25,161.12,
155.90,154.97,153.43,146.34,137.11,136.24,132.16,131.23,129.64,123.20,118.61,
117.14,114.99,114.82,110.58,110.40,109.05,93.47,67.70,56.15,48.53,41.47,
‑
38.01,30.95,26.59,26.16,22.13,9.41.MS(ESI)m/z[M‑H]理论值：795.12和797.11；实际值：795.5和797.1.HPLC分析:MeOH‑H2O(70:30),18.16min,98.93％纯度。

[0241] 实施例9

[0242] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(5‑((2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑4‑基)氨基)戊基)乙酰胺

[0243]

[0244] 合成方法参照实施例6的合成路线。

[0245] 区别仅在于：将N‑BOC‑乙二胺原料替换为等摩尔量的单BOC‑戊二胺原料。

[0246] 化合物9为黄色固体，收率81％。

[0247] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.08(s,1H),9.70(s,1H),8.04(t,J＝5.1Hz,1H),7.72‑7.69(m,3H),7.59‑7.56(m,1H),7.30(s,1H),7.09‑7.01(m,3H),6.50(t,J＝5.6Hz,
1H),5.06‑5.03(m,1H),4.39(s,2H),3.54(s,3H),3.32‑3.21(m,2H),3.12‑3.09(m,2H),
2.91‑2.84(m,1H),2.63‑2.55(m,2H),2.49(s,3H),2.04‑2.01(m,1H),1.59‑1.53(m,2H),
13
1.45‑1.39(m,2H),1.34‑1.26(m,2H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.74,170.04,168.93,
167.26,166.17,161.14,155.90,154.98,153.45,146.36,137.11,136.24,132.16,131.20,
129.68,123.22,118.64,117.10,115.01,114.81,110.58,110.39,109.05,93.46,67.72,
‑
56.15,48.53,41.76,38.17,30.95,28.86,28.34,23.66,22.13,9.41.MS(ESI)m/z[M‑H] 理
论值：809.13和811.13；实际值：809.8和811.5.HPLC分析:MeOH‑H2O(85:15),5.46min,
98.91％纯度。

[0248] 实施例10

[0249] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(6‑((2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑4‑基)氨基)己基)乙酰胺

[0250]

[0251] 合成方法参照实施例6的合成路线。

[0252] 区别仅在于：将N‑BOC‑乙二胺原料替换为等摩尔量的N‑(6‑氨基己基)氨基甲酸叔丁酯原料。

[0253] 化合物10为白色固体，收率71％。

[0254] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.09(s,1H),9.69(s,1H),8.02(brs,1H),7.71‑7.69(m,3H),7.57(t,J＝7.7Hz,1H),7.29(s,1H),7.09‑7.06(m,2H),7.01(d,J＝7.0Hz,1H),
6.50(t,J＝5.0Hz,1H),5.05(dd,J＝12.6,5.3Hz,1H),4.39(s,2H),3.55(s,3H),3.32‑3.24
(m,2H),3.11‑3.08(m,2H),2.91‑2.84(m,1H),2.61‑2.53(m,2H),2.49(s,3H),2.03‑2.01
13
(m,1H),1.53‑1.50(m,2H),1.39‑1.23(m,6H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.75,170.04,
168.94,167.27,166.15,161.15,155.90,154.97,153.47,146.39,137.09,136.23,132.16,
131.19,129.69,123.22,118.65,117.11,115.00,114.81,110.59,110.36,109.02,93.45,
67.72,56.16,48.53,41.75,38.25,30.96,29.08,28.61,26.09,26.02,22.14,9.40.MS
‑
(ESI)m/z[M‑H]理论值：823.15和825.15；实际值：823.5和825.5.HPLC分析:MeOH‑H2O(70:
30),22.45min,99.55％纯度。

[0255] 实施例11

[0256] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺胺基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(2‑((2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑5‑基)氨基)乙基)乙酰胺

[0257]

[0258] 合成方法参照实施例6的合成路线。

[0259] 区别仅在于：将3‑氟酞酐原料替换为等摩尔量的4‑氟邻苯二甲酸酐原料。

[0260] 得到目标产物为化合物11为黄色固体(70mg，收率54％)。

[0261] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.06(s,1H),9.63(s,1H),8.30‑8.29(m,1H),7.71‑7.70(m,3H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.32(s,1H),7.15(t,J＝5.5Hz,1H),7.09(d,J＝
9.5Hz,1H),6.99(s,1H),6.87(d,J＝8.4Hz,1H),5.05‑5.01(m,1H),4.39(s,2H),3.56(s,
3H),3.27‑3.25(m,2H),3.17‑3.16(m,1H),2.87‑2.85(m,1H),2.64‑2.50(m,2H),2.47(s,
13
3H),2.36(brs,1H),2.00‑1.99(m,1H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.68,170.03,167.51,
167.01,166.89,161.06,155.87,154.91,154.11,153.27,137.08,134.17,131.22,129.44,
124.98,123.05,118.44,116.40,114.99,114.83,110.52,93.49,67.69,56.15,48.59,
+
48.51,41.68,37.50,30.91,22.14,9.35.MS(ESI)m/z[M+H] 理论值：769.08和71.08；实际
值：769.11和771.17.HPLC分析:MeOH‑H2O(80:20),4.70min,95.15％纯度。

[0262] 实施例12

[0263] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(3‑((2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑5‑基)氨基)丙基)乙酰胺

[0264]

[0265] 合成方法参照实施例7的合成路线。

[0266] 区别仅在于：将3‑氟酞酐原料替换为等摩尔量的4‑氟邻苯二甲酸酐原料。

[0267] 化合物12为黄色固体，收率38％。

[0268] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.06(s,1H),9.69(s,1H),8.15(t,J＝5.6Hz,1H),7.71‑7.70(m,3H),7.55(d,J＝8.3Hz,1H),7.30(s,1H),7.09‑7.08(m,2H),6.92(s,1H),
6.80(d,J＝8.4Hz,1H),5.05‑5.01(m,1H),4.42(s,2H),3.56(s,3H),3.24‑3.22(m,2H),
3.14‑3.12(m,2H),2.89‑2.85(m,1H),2.63‑2.56(m,2H),2.47(s,3H),2.01‑1.98(m,1H),
13
1.72‑1.69(m,2H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.72,170.08,167.62,167.09,166.47,
161.10,155.89,154.92,154.26,153.48,137.05,134.13,131.15,129.65,124.98,123.22,
118.56,116.00,115.01,114.83,110.57,93.48,67.73,56.15,52.99,48.61,41.39,36.24,
+
30.94,28.29,22.20,9.36.MS(ESI)m/z[M+H]理论值：783.10和785.10；实际值：783.08和
785.13.HPLC分析:MeOH‑H2O(80:20),4.70min,98.83％纯度。

[0269] 实施例13

[0270] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(4‑((2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑5‑基)氨基)丁基)乙酰胺

[0271]

[0272] 合成方法参照实施例8的合成路线。

[0273] 区别仅在于：将3‑氟酞酐原料替换为等摩尔量的4‑氟邻苯二甲酸酐原料。

[0274] 化合物13为黄色固体，收率49％。

[0275] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.05(s,1H),9.69(s,1H),8.08(brs,1H),7.72‑7.69(m,3H),7.55(d,J＝8.3Hz,1H),7.31(s,1H),7.11‑7.07(m,2H),6.94(s,1H),6.83(d,J＝
8.3Hz,1H),5.04‑5.01(m,1H),4.39(s,2H),3.54(s,3H),3.31‑3.29(m,2H),3.16‑3.13(m,
2H),2.91‑2.87(m,1H),2.64‑2.59(m,2H),2.47(s,3H),2.01‑1.97(m,1H),1.55‑1.47(m,
13
4H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.69,170.07,167.63,167.06,166.23,161.09,155.87,
154.93,154.35,153.41,137.08,134.16,131.21,129.60,125.01,123.18,118.52,115.85,
114.98,114.80,110.55,93.47,67.70,56.12,54.82,48.58,42.08,37.98,30.92,26.74,
+
25.60,22.17,9.36.MS(ESI)m/z[M+H] 理论值：797.12和799.11；实际值：797.23和
799.35.HPLC分析:MeOH‑H2O(80:20),4.84min,99.59％纯度。

[0276] 实施例14

[0277] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(5‑((2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑5‑基)氨基)戊基)乙酰胺

[0278]

[0279] 合成方法参照实施例9的合成路线。

[0280] 区别仅在于：将3‑氟酞酐原料替换为等摩尔量的4‑氟邻苯二甲酸酐原料。

[0281] 化合物14为黄色固体，收率36％。

[0282] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.05(s,1H),9.70(s,1H),8.05(brs,1H),7.72‑7.69(m,3H),7.55(d,J＝8.3Hz,1H),7.30(s,1H),7.09‑7.06(m,2H),6.92(s,1H),6.82(d,J＝
8.4Hz,1H),5.04‑5.01(m,1H),4.39(s,2H),3.54(s,3H),3.13‑3.08(m,4H),2.88‑2.84(m,
1H),2.63‑2.55(m,2H),2.47(s,3H),2.00‑1.97(m,1H),1.58‑1.53(m,2H),1.45‑1.39(m,
13
2H),1.34‑1.30(m,2H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.70,170.07,167.63,167.07,
166.16,161.12,155.87,154.93,154.36,153.44,137.07,134.14,131.17,129.63,125.01,
123.17,118.59,115.81,114.99,114.79,110.56,93.45,67.69,56.13,48.58,42.37,
+
38.17,30.92,28.86,27.85,23.83,22.18,9.36.MS(ESI)m/z[M+H] 理论值：811.13和
813.13；实际值：811.21和813.17.HPLC分析:MeOH‑H2O(80:20),5.06min,97.47％纯度。

[0283] 实施例15

[0284] 2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)‑N‑(2‑(2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1,3‑二氧代异吲哚啉‑5‑基)氨基)己基)乙酰胺

[0285]

[0286] 合成方法参照实施例10的合成路线。

[0287] 区别仅在于：将3‑氟酞酐原料替换为等摩尔量的4‑氟邻苯二甲酸酐原料。

[0288] 化合物15为黄色固体，收率50％。

[0289] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.05(s,1H),9.70(s,1H),8.03(brs,1H),7.71‑7.69(m,3H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.29(s,1H),7.09‑7.07(m,2H),6.93(s,1H),6.83(d,J＝
8.7Hz,1H),5.04‑5.01(m,1H),4.39(s,2H),3.54(s,3H),3.14‑3.07(m,4H),2.88‑2.84(m,
1H),2.63‑2.55(m,2H),2.49(s,3H),2.00‑1.98(m,1H),1.55‑1.49(m,2H),1.39‑1.31(m,
13
4H),1.27‑1.24(m,2H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.70,170.07,167.63,167.07,
166.13,161.12,155.87,154.93,154.38,153.44,137.07,134.15,131.17,129.63,125.02,
123.17,118.58,115.77,114.98,114.79,110.56,99.45,93.43,67.70,56.13,48.58,
+
42.35,38.24,30.92,29.08,28.12,26.17,26.09,22.18,9.36.MS(ESI)m/z[M+H]理论值：
825.15和827.15；实际值：825.31和827.36.HPLC分析:MeOH‑H2O(80:20),5.28min,98.81％纯度。

[0290] 实施例16

[0291] 2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(3‑(2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1‑氧代异吲哚啉‑4‑基)丙酰基‑2‑炔‑1‑基)乙酰胺[0292]

[0293] 化合物16的合成路线如下所示：

[0294]

[0295] (a)叔丁基(3‑(2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1‑氧代异吲哚啉‑4‑基)丙酸‑2‑炔‑1‑基)氨基甲酸酯(4‑1)

[0296] 将化合物3‑(4‑碘‑1‑氧代异吲哚啉‑2‑基)哌啶‑2,6‑二酮(3.0g,9.28mmol)，N‑Boc‑氨基丙炔(4.32g,27.85mmol)，Pd(PPh3)2Cl2(652mg,0.93mmol)和CuI(177mg,0.93mmol)加入干燥的双口瓶并密封，加入30mL超干DMF溶解和19.36mL三乙胺后，用氩气换气后在80℃条件下反应12h，TLC监测反应。反应结束后，将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行萃取，重复三次，合并有机层并用饱和食盐水萃取。将有机层分离，用无水硫酸钠干燥后进行减压浓缩。粗产物通过硅胶色谱柱进行纯化(DCM:MeOH＝100:1，v/v)，得到目标产物为4‑1，棕色固体(2.4g，收率65％)。

[0297] 1HNMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.02(s,1H),7.74(d,J＝7.5Hz,1H),7.66(d,J＝7.2Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,1H),7.40(br,1H),5.17(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.45(d,J＝
17.7Hz,1H),4.30(d,J＝17.7Hz,1H),4.02(d,J＝5.4Hz,2H),2.97‑2.90(m,1H),2.65‑2.57(m,1H),2.43‑2.34(m,1H),2.08‑2.00(m,1H),1.40(s,9H).

[0298] (b)3‑(4‑(3‑氨基丙‑1‑炔‑1‑基)‑1‑氧异喹啉‑2‑基)哌啶‑2,6‑二酮(4‑2)[0299] 将化合物4‑1(1.00g，2.52mmol)溶于二氯甲烷溶剂(10mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，常温下搅拌反应2h，通过TLC监测反应。反应结束后，将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行三次萃取，合并有机层并用饱和食盐水萃取。将有机层分离合并后用无水硫酸钠
干燥和减压浓缩。粗产物通过硅胶柱进行分离纯化(DCM:MeOH＝100:1，v/v)，得到目标产物为4‑2，棕色固体(730mg，收率98％)。

[0300] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.06(s,1H),8.37(s,2H),7.82(d,J＝7.5Hz,1H),7.71(d,J＝7.2Hz,1H),7.60(t,J＝7.6Hz,1H),5.21(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.49(d,J＝17.8Hz,1H),4.35(d,J＝17.8Hz,1H),4.06(s,2H),3.00‑2.90(m,1H),2.67‑2.58(m,1H),
2.39‑2.29(m,1H),2.12‑2.02(m,1H).

[0301] (c)2‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(3‑(2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1‑氧代异吲哚啉‑4‑基)丙酰基‑2‑炔‑1‑基)乙酰胺(实施例16)

[0302] 将化合物T‑1(80mg，0.17mmol)和HATU(100mg，0.30mmol)溶于DMF中，加入DIPEA(0.10mL，0.51mmol)，搅拌反应0.5h。再向反应体系中加入3‑2(79mg，0.20mmol)，常温下搅拌反应，TLC监测反应。反应结束后，将二氯甲烷和水加入到反应体系中进行萃取，重复三次，合并有机层并用饱和食盐水萃取。将有机层分离后用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。粗产物通过硅胶色谱柱进行纯化(DCM:MeOH＝100:1，v/v)，得到目标产物为化合物16，白色固体(70mg，收率55％)。

[0303] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.00(s,1H),9.76(s,1H),8.81(t,J＝5.5Hz,1H),7.76(d,J＝7.3Hz,1H),7.72‑7.71(m,2H),7.70‑7.67(m,1H),7.65(d,J＝7.0Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.08(d,J＝8.9Hz,1H),5.16‑5.13(m,1H),4.48(s,2H),4.31‑
4.29(m,2H),3.61(s,3H),2.94‑2.87(m,1H),2.63‑2.57(m,2H),2.47(s,3H),2.44‑2.36(m,
13
2H),2.02‑1.99(m,1H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.69,170.88,167.44,166.39,
160.96,155.90,154.93,152.96,143.88,137.17,134.20,132.02,131.40,129.10,128.65,
123.29,122.99,117.90,117.64,115.03,114.86,110.56,93.60,91.77,77.63,67.65,
+
56.21,51.61,46.85,31.12,28.46,22.35,9.37.HRMS(ESI)m/z[M+H]理论值：750.51和
752.51；实际值：750.0840和752.0827.HPLC分析:MeOH‑H2O(80:20),4.92min,96.37％纯
度。

[0304] 实施例17

[0305] 2‑((5‑((5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺胺基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(3‑(2‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑1‑氧异喹啉‑4‑基)丙基)乙酰胺

[0306]

[0307] 化合物17的合成路线如下所示：

[0308]

[0309] 步骤(a)、(b)与实施例16相同。

[0310] 区别仅在于进行步骤(d)：3‑(4‑(3‑氨丙基)‑1‑氧异喹啉‑2‑基)哌啶‑2,6‑二酮(4‑3)

[0311] 将化合物4‑2(300mg，1.01mmol)溶于20mL甲醇，用氩气置换气体后，加入10％钯碳，再用氢气置换体系3次，并在室温条件下搅拌反应24h，TLC监测反应。反应结束后，抽滤除去钯碳并减压浓缩，粗产物通过硅胶色谱柱进行纯化(DCM:MeOH＝100:1‑50:1，v/v)，得到目标产物为4‑3，白色固体(270mg，收率89％)，直接进行下一步反应。

[0312] 步骤(e)合成方法参照实施例16的步骤(c)，区别仅在于将原料化合物4‑2替换为本实施例制备得到的原料化合物4‑3。

[0313] 化合物17为白色固体，收率39％。

[0314] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.00(s,1H),9.70(s,1H),8.81(t,J＝5.9Hz,1H),7.71‑7.68(m,3H),7.58(d,J＝7.3Hz,1H),7.47‑7.40(m,2H),7.32(s,1H),7.08(d,J＝
8.7Hz,1H),5.15‑5.11(m,1H),4.46‑4.41(m,3H),4.29(d,J＝8.6Hz,1H),3.54(s,3H),
3.17‑3.15(m,3H),2.95‑2.90(m,1H),2.64‑2.59(m,2H),2.47(s,3H),2.43‑2.36(m,2H),
13
2.02‑1.99(m,1H),1.74‑1.71(m,1H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.75,170.94,168.25,
166.31,161.12,155.87,154.94,153.40,140.46,137.08,136.65,131.57,131.32,131.18,
129.60,128.25,123.14,120.72,118.60,115.00,114.81,110.55,93.43,67.69,56.14,
+
51.51,46.14,37.97,31.13,29.13,28.44,22.47,9.37.MS(ESI)m/z[M+H]理论值：754.11
和756.11；实际值：754.09和756.19.HPLC分析:MeOH‑H2O(80:20),4.88min,96.98％纯度。

[0315] 实施例18

[0316] 4‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(3‑(2‑(2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1‑氧代异吲哚啉‑4‑基)丙酰基‑2‑炔‑1‑基)丁酰胺[0317] 化合物18的合成路线如下所示：

[0318]

[0319] 合成方法参照实施例16的合成路线。

[0320] 区别仅在于：将T‑1原料替换为等摩尔量的T‑2原料。

[0321] 化合物为白色固体，收率64％。

[0322] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.01(s,1H),9.20(s,1H),8.36(t,J＝5.3Hz,1H),7.74‑7.70(m,3H),7.61‑7.59(m,2H),7.52‑7.49(m,1H),7.24(s,1H),7.14(d,J＝8.8Hz,
1H),5.17‑5.14(m,1H),4.43(d,J＝17.7Hz,1H),4.30(d,J＝17.7Hz,1H),4.19(d,J＝
5.4Hz,2H),3.90(t,J＝6.4Hz,2H),3.72(s,3H),2.95‑2.88(m,1H),2.61‑2.53(m,1H),2.45
13
(s,3H),2.43‑2.36(m,1H),2.22(t,J＝7.3Hz,2H),2.03‑1.99(m,1H),1.81‑1.74(m,2H). C NMR(126MHz,DMSO‑d6)δ172.72,171.47,170.88,167.44,161.32,155.90,154.77,154.57,
143.86,136.97,134.05,131.94,131.01,129.87,128.57,123.14,123.03,117.75,117.69,
115.16,113.86,110.56,92.56,92.40,77.33,68.09,56.25,51.56,46.81,31.11,28.59,
+
23.97,22.40,9.33.HRMS(ESI)m/z[M+H] 理论值：778.11和780.11；实际值：778.1144和
780.1147.HPLC分析:MeOH‑H2O(80:20),5.03min,97.71％纯度。

[0323] 实施例19

[0324] 4‑(5‑(5‑溴‑2‑甲氧基苯基)磺酰胺基)‑3‑甲基苯并[d]异恶唑‑6‑基)氧基)‑N‑(2‑(2‑(2,6‑二氧代哌啶‑3‑基)‑1‑氧代异吲哚啉‑4‑基)丙基)丁酰胺

[0325]

[0326] 合成方法参照实施例17的合成路线。

[0327] 区别仅在于：将T‑1原料替换为等摩尔量的T‑2原料。

[0328] 化合物19为白色固体，收率37.59％。

[0329] 1H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ11.01(s,1H),9.76(s,1H),8.80(t,J＝5.5Hz,1H),7.74(d,J＝7.3Hz,1H),7.72‑7.70(m,2H),7.70‑7.68(m,1H),7.65(d,J＝7.0Hz,1H),7.55
(t,J＝7.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.08(d,J＝8.9Hz,1H),5.16‑5.13(m,1H),4.48(s,2H),
4.31‑4.29(m,2H),4.19(d,J＝5.4Hz,2H),3.90(t,J＝6.4Hz,2H),3.61(s,3H),2.94‑2.87
13
(m,1H),2.63‑2.57(m,2H),2.47(s,3H),2.44‑2.36(m,2H),2.03‑1.99(m,1H). C NMR
(126MHz,DMSO‑d6)δ172.69,170.88,167.44,166.39,160.96,155.90,154.93,152.96,
143.88,137.17,134.20,132.02,131.40,129.10,128.65,123.29,122.99,117.90,117.64,
115.03,114.86,110.56,93.60,91.77,77.63,67.65,56.21,51.61,46.85,31.12,28.59,
+
23.97,22.40,9.37.HRMS(ESI)m/z[M+H] 理论值：782.14和784.14；实际值：782.1486和
784.1462.HPLC分析:MeOH‑H2O(80:20),5.03min,98.76％纯度。

[0330] 测试例1

[0331] 细胞增殖抑制实验(CellTiter‑Glo)

[0332] 实验目的：采用CellTiter‑Glo检测试剂对本发明化合物抗肿瘤细胞增殖活性进行评价。

[0333] 实验方法：按每孔500‑1500个细胞/20μl接种在384或96孔板中，于恒温培养箱中培养过夜。化合物用对应细胞的培养基(+10％FBS)稀释至指定浓度，将稀释后的化合物按每孔10μl加入到孔板中，继续培养72‑120h。再向每孔加入25μL的CellTiter‑Glo试剂，利用多功能酶标仪(PerkinElmer)测量荧光信号。

[0334] 实验结果如下表1所示：

[0335] 表1

[0336]

[0337]

[0338] 注：抗癌细胞增殖抑制活性，小于1μM为强活性，以具体数值表示；1‑10μM为中等活性；10‑20μM为弱活性；大于20μM表示抗细胞增殖抑制活性微弱。

[0339] 根据表1结果发现，本发明化合物实施例7、实施例8、实施例9、实施例16和实施例18对多种肿瘤细胞具有较好的抗增殖抑制活性。

[0340] 测试例2

[0341] 蛋白免疫印迹实验

[0342] 实验目的：蛋白免疫印迹(Western Blot)技术可以用于检测、表征和半定量蛋白质。

[0343] 实验方法：总蛋白样品收集：收集给药处理后的细胞，将细胞进行充分裂解后取上清进行SDS‑PAGE电泳分离。再将SDS‑PAGE胶上蛋白进行转膜，转膜完全后将膜放入5％脱脂牛奶中进行封闭。封闭结束后，按照蛋白分子量大小进行切膜。相应的一抗用封闭液稀释至适当浓度，并与PVDF膜在4℃下孵育过夜。一抗孵育结束后，用1×TBST洗膜3‑6次，随后与相应的二抗稀释液在室温下孵育1‑2h。孵育结束后，用1×TBST洗膜3‑6次，每次10min。最后进行化学发光和显影。

[0344] 实验结果如下图1‑9所示：

[0345] 如图1所示，本发明化合物实施例7、8、9下调细胞内BET家族中BRD2水平具有浓度依赖性；

[0346] 如图2‑3所示，本发明化合物实施例9下调细胞内BRD2蛋白水平具有浓度依赖性；其中，如图2所示，明显能够看出333nM的化合物9在处理22Rv1细胞9h就能显著诱导细胞内
BRD2蛋白的降解；如图3所示，37nM的化合物9在处理MV4；11细胞6h就能显著诱导细胞内
BRD2蛋白的降解。

[0347] 如图4‑5所示，本发明化合物实施例9下调细胞内BRD2蛋白水平具有时间依赖性；其中，如图4所示,300nM的化合物9处理22Rv1细胞明显能够看出处理12h后就能明显诱导细
胞内BRD2蛋白的降解；如图5所示，300nM的化合物9处理MV4；11细胞,明显能够看出处理6h后，就能明显诱导细胞内BRD2蛋白的降解。

[0348] 如图6‑7所示，本发明化合物实施例9可诱导GSPT1蛋白的降解，其中，如图6所示，作用6h条件下，能够看出37nM开始明显诱导22Rv1细胞内GSPT1蛋白的降解；如图7所示，能够看出12nM就能明显的诱导MV4；11细胞GSPT1蛋白的降解。

[0349] 如图8‑9所示，本发明化合物下调GSPT1蛋白水平具有时间依赖性，其中，如图8所示，明显能够看出4h就可诱导22Rv1细胞内GSPT1蛋白的降解；如图9所示，4h内可明显诱导MV4；11细胞内GSPT1蛋白的降解效果。

[0350] 申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明所述苯并[d]异恶唑类化合物及其应用，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤
才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围
之内。