[0001] 本发明涉及一种化合物、其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，制备用于预防、处理、治疗或减轻患者的磷脂酰肌醇3‑激酶(PI3K)介导的疾病的药物。

[0002] 磷脂酰肌醇3‑激酶(PI3K)包括脂激酶(lipidkinases)家族，这些脂激酶可催化磷酸集团转移到肌醇脂类的D‑3’位以产生3‑磷酸磷脂酰肌醇(PIP)、3,4‑二磷酸脂酰基醇(PIP2)和3,4,5‑三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3).这些PI3K催化反应的产物充当第二信使且在关键细胞过程，包括细胞生长、分化、移动、增殖和存货中起重要作用。

[0003] 在一般情况下，PIP2和PIP3将Akt(病毒癌基因v‑Akt的人类同源物的产物)募集到质膜，在那里它充当对生长和存活很重要的细胞内信号传导途径的节点(Fantl等人，Cell 69:413‑423(1992)；Bader等人，Nature Rev.Cancer 5:921(2005)；Vivanco和Sawyer，Nature Rev.Cancer 2:489(2002))。PI3K的异常调节通常通过Akt的激活来增加存活，这是人类癌症中最普遍的事件之一，并且已经显示出可在多种水平出现。肿瘤抑制基因PTEN在多种肿瘤中功能性缺失，所述基因在肌醇环的3’位使磷脂酰肌醇脱去磷酸，从而拮抗PI3K活性。其他肿瘤中，p110α亚型、PIK3CA和Akt的基因扩增，且在数种人类癌症中显示其基因产物的蛋白表达增加。此外，活化下游信号途径的PIK3CA中的体细胞错义突变在多种人类癌症中以显著频率被描述(Kang等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:802(2005)；Samuels等，Science304:554(2004)；Samuels等，Cancer Cell 7:561‑573(2005))。因此，已知PI3Kα抑制剂在治疗癌症和其他疾病中具有特殊价值。

[0004] 阿哌尼西(Alpelisib，BYL‑719)是由诺华制药公司开发的一种磷脂酰肌醇3激酶抑制剂。临床前数据显示，该药物对于PI3kα的抑制活性是其他PI3K亚型的50倍。该药于2019年5月在美国获批上市。用于与氟维司群联用治疗男性和绝经后女性的激素受体阳性(HR)/人表皮生长因子受体2阴性(HER2‑)携带PIK3CA突变的晚期转移性乳腺癌。阿哌尼西是首歌用于治疗该类乳腺癌的PI3K抑制剂。

[0005] 阿哌尼西(Alpelisib)的化学名为：(2S)‑N1‑[4‑甲基‑5‑[2‑(2,2,2‑三氟‑1,1‑二甲基乙基)‑4‑吡啶基]‑2‑噻唑基]‑1,2‑四氢吡咯二甲酰胺，其结构式为：

[0006]

[0007] 本发明的发明人在阿哌尼西的基础上进行结构修饰，得到了PI3kα抑制活性、选择性、药理药代更具有明显优势的化合物。

[0099] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例以对本发明作进一步的详细说明。

[0100] 一般合成过程

[0101] 一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到。下面的反应方案和实施例用于进一步举例说明本发明的内容。

[0102] 所属领域的技术人员将认识到：本发明所描述的化学反应可以用来合适地制备许多本发明的其他化合物，且用于制备本发明的化合物的其它方法都被认为是在本发明的范围之内。例如，根据本发明那些非例证的化合物的合成可以成功地被所属领域的技术人员通过修饰方法完成，如适当的保护干扰基团，通过利用其他已知的试剂除了本发明所描述的，或将反应条件做一些常规的修改。另外，本发明所公开的反应或已知的反应条件也公认地适用于本发明其他化合物的制备。

[0103] 下面所描述的实施例，除非其他方面表明所有的温度定为摄氏度。试剂购买于商品供应商如Aldrich Chemical Company,Inc.,Arco Chemical Company和Alfa Chemical Company，使用时都没有经过进一步纯化，除非其他方面表明。一般的试剂从汕头西陇化工厂，广东光华化学试剂厂，广州化学试剂厂，天津好寓宇化学品有限公司，青岛腾龙化学试剂有限公司，和青岛海洋化工厂购买得到。

[0104] 无水四氢呋喃、二氧六环、甲苯、乙醚是经过金属钠回流干燥得到。无水二氯甲烷和氯仿是经过氢化钙回流干燥得到。乙酸乙酯、石油醚、正己烷、N,N‑二甲基乙酰胺和N,N‑二甲基甲酰胺是经无水硫酸钠事先干燥使用。

[0105] 以下反应一般是在氮气或氩气正压下或在无水溶剂上套一干燥管(除非其他方面表明)，反应瓶都塞上合适的橡皮塞，底物通过注射器打入。玻璃器皿都是干燥过的。

[0106] 色谱柱是使用硅胶柱。硅胶(300‑400目)购于青岛海洋化工厂。核磁共振光谱以CDC13、d6‑DMSO、CD3OD或d6‑丙酮为溶剂(报导以ppm为单位)，用TMS(0ppm)或氯仿(7.25ppm)作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s(singlet，单峰)、d(doublet，双峰)、t(triplet，三重峰)、q(quartet，四重峰)、m(multiplet，多重峰)、br(broadened，宽峰)、dd(doublet ofdoublets，双二重峰)、dt(doublet oftriplets，双三重峰)。偶合常数，用赫兹(Hz)表示。

[0107] 低分辨率质谱(MS)数据通过配备G1312A二元泵和a G1316ATCC(柱温保持在30℃)的Agilent 6320系列LC‑MS的光谱仪来测定的，G1329A自动采样器和G1315B DAD检测器应用于分析，ESI源应用于LC‑MS光谱仪。

[0108] 低分辨率质谱(MS)数据通过配备G1311A四元泵和G1316A TCC(柱温保持在30℃)的Agilent 6120系列LC‑MS的光谱仪来测定的，G1329A自动采样器和G1315D DAD检测器应用于分析，ESI源应用于LC‑MS光谱仪。

[0109] 以上两种光谱仪都配备了Agilent Zorbax SB‑C18柱，规格为2.1×30mm，5μm。注射体积是通过样品浓度来确定；流速为0.6mL/min；HPLC的峰值是通过在210nm和254nm处的UV‑Vis波长来记录读取的。流动相为0.1％的甲酸乙腈溶液(相A)和0.1％的甲酸超纯水溶液(相B)。梯度洗脱条件如表1所示：

[0110] 表1

[0111] 时间(min) A(CH3CN，0.1％HCOOH) B(H2O，0.1％HCOOH)0‑3 5‑100 95‑0
3‑6 100 0
6‑6.1 100‑5 0‑95
6.1‑8 5 95

[0112] HPLC制备的工艺条件为：

[0113] (1).取含有化合物(II)的非对映异构体混合物适量，用流动相溶解；

[0114] (2).设置流动相的流速、检测波长和柱温；

[0115] (3).取步骤(1)中的样品溶液适量注入高效液相色谱仪，记录色谱图，完成异构体的分离和分析；

[0116] 色谱柱：表面含有多糖衍生物的硅胶作为固定相的正相手性色谱柱；更具体地，所用的色谱柱为大赛璐AD‑H(10*250nm，5um)或大赛璐AD(20*250nm，5um)。

[0117] 流动相：甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、正己烷、正戊烷、异己烷、正庚烷、二乙胺、三乙胺、三氟乙酸、冰醋酸中的两种以上的混合物；更具体地，流动相的混合物中正己烷、正戊烷、异己烷、正庚烷的体积比例为10～20％，甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈的体积比例为20～95％，二乙胺、三乙胺、三氟乙酸、冰醋酸的体积比例为0～2％，流动相中各成分的总和为
100％；更具体地，其中所述的流动相的混合物中正己烷的体积比为15～20％，异丙醇的体积比例为80～90％，二乙胺、三乙胺的体积比例为0.5～1％，流动相中各成分的总和为
100％。

[0118] 检测波长：250nm～320nm；

[0119] 流速：0.5～10mL/min；更具体地为2～5mL/min；

[0120] 柱温：10～35℃。

[0121] 下面简写词的使用贯穿本发明：

[0122] LiHMDS：双(三甲基硅基)氨基锂

[0123] THF：四氢呋喃

[0124] Toluene：甲苯

[0125] TFA：三氟乙酸

[0126] POBr3：三溴氧磷

[0127] Pd(OAc)2：醋酸钯

[0128] t‑Bu3PHBF4：四氟硼酸三叔丁基膦

[0129] Cs2CO3：碳酸铯

[0130] DMF：N，N‑二甲基甲酰胺

[0131] HCl：盐酸

[0132] EtOH：乙醇

[0133] DCM：二氯甲烷

[0134] Et3N：三乙胺

[0135] CDI：N,N‑碳酰二咪唑

[0136] AcOH：醋酸

[0137] Boc2O，BOC酸酐：二碳酸二叔丁酯

[0138] Boc：叔丁基氧羰基

[0139] CH3CN：乙腈

[0140] DCC：二环己基碳二亚胺

[0141] DMAP：N,N‑二甲基‑4‑吡啶胺

[0142] EA：乙酸乙酯

[0143] H2O：水

[0144] NaOH：氢氧化钠

[0145] NaI：碘化钠

[0146] K2CO3：碳酸钾

[0147] rt，r.t.：室温

[0148] 化合物的合成通式如下：

[0149]

[0150] 式(12)或(13)所示的化合物可以通过下列过程制备得到：式(1)所示的3,3,3‑三氟‑2,2‑二甲基丙酰氯与(E)‑4‑甲氧基丁基‑3‑烯‑2‑酮在双(三甲基硅基)氨基锂的催化下反应得到式(2)所示的化合物。式(2)所示的化合物在三氟乙酸作用下关环得到式(3)所示的化合物。式(3)所示的化合物在氨水中胺化得到式(4)所示的化合物。式(4)所示的化合物与三溴氧磷反应得到式(5)所示的化合物。式(5)所示的化合物在醋酸钯催化下与(6)所示的化合物偶联得到式(7)所示的化合物。式(7)所示的化合物在乙醇中盐酸催化下脱去乙酰基保护得到式(8)所示的化合物。式(8)所示的化合物与CDI反应得到式(9)所示的化合物。式(9)所示的化合物与(10)或(11)所示的化合物反应得到式(12)或(13)所示的化合物。

[0151] 实施例

[0152] 实施例1(S)‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)氮杂环丁烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0153]

[0154] 步骤1)(1E,4Z)‑7,7,7‑三氟‑5‑羟基‑1‑甲氧基‑6,6‑二甲基己基‑1,4‑二烯‑3‑酮的合成

[0155] 向500mL反应瓶中加入无水四氢呋喃(100mL)和(E)‑4‑甲氧基丁基‑3‑烯‑2‑酮(10.0g,100.22mmol)，体系氮气保护，冷却至‑78℃。缓慢滴加双(三甲基硅基)氨基锂的四氢呋喃溶(100mL,1mol/L)，滴加完毕后，‑78℃搅拌30分钟。将3,3,3‑三氟‑2,2‑二甲基丙酰氯(8.72g,50.11mmol)加入无水THF(100mL)中，缓慢加入到反应体系中，加入完毕后，转移至室温反应2小时。反应液加入饱和氯化铵溶液淬灭，旋干四氢呋喃，加入水(300mL)稀释，乙酸乙酯(200mL)萃取3次，合并有机相，减压蒸馏除去残余溶剂，柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10/1)得到标题化合物为黄色油状物(6.12g，51.4％)。

[0156] MS(ESI,pos.ion)m/z:239.3[M+H]+；

[0157] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)5.65(s,1H),5.34(dd,J＝5.1,4.0Hz,1H),3.56(s,3H),2.77(dd,J＝16.8,3.8Hz,1H),2.65(dd,J＝16.8,5.4Hz,1H),1.41(t,J＝8.2Hz,6H).[0158] 步骤2)2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)‑4H‑吡喃‑4‑酮的合成

[0159] 依次将(1E,4Z)‑7,7,7‑三氟‑5‑羟基‑1‑甲氧基‑6,6‑二甲基己基‑1,4‑二烯‑3‑酮(1.46g,6.13mmol)、三氟乙酸(0.91mL,12.26mmol)和甲苯(15mL)加入到反应瓶中，室温搅拌反应14小时。停止反应，旋干溶剂，粗产物柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1)得到标题化合物为淡黄色液体(1.08g，85.7％)。

[0160] MS(ESI,pos.ion)m/z:207.2[M+H]+；

[0161] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)7.78(d,J＝5.8Hz,1H),6.45(d,J＝2.2Hz,1H),6.34(dd,J＝5.8,2.3Hz,1H),1.50(s,6H).

[0162] 步骤3)2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4(1H)‑酮的合成

[0163] 将2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)‑4H‑吡喃‑4‑酮(1.08g,5.24mmol)加入到氨水(20mL,28mass％)中，反应升温至回流反应1小时。停止反应，旋干溶剂，粗产物柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝10:1)得到标题化合物为淡黄色固体(0.95g，88.8％)。

[0164] MS(ESI,pos.ion)m/z:206.0[M+H]+；

[0165] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)7.78(d,J＝6.9Hz,1H),6.69(d,J＝1.0Hz,1H),6.52‑6.44(m,1H),1.58(d,J＝17.1Hz,6H).

[0166] 步骤4)4‑溴‑2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶的合成

[0167] 依次将2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4(1H)‑酮(4.63g,22.58mmol)和三溴氧磷(3.44mL,33.87mmol)加入到反应瓶中，升温至120℃反应30分钟。停止反应，冷却至室温，冰浴下用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，乙酸乙酯(100mL)萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝10:1)得到标题化合物为黄色油状物(4.65g，76.9％)。

[0168] MS(ESI,pos.ion)m/z:269.0[M+H]+；

[0169] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)8.45(d,J＝5.2Hz,1H),7.68(s,1H),7.42(dd,J＝5.2,1.5Hz,1H),1.62(s,6H).

[0170] 步骤5)N‑(4‑甲基噻唑‑2‑基)乙酰胺的合成

[0171] 依次向反应瓶中加入4‑甲基噻唑‑2‑胺(10.00g,87.72mmol)、二氯甲烷(100mL)和三乙胺(24.4mL,175.44mmol)，反应置于冰浴，缓慢滴加乙酰氯(7.5mL,105.26mmol)，加入完毕后，转移至室温反应8小时。停止反应，加入水(100mL)，静置分液，收集有机相，旋干溶剂，柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝3:1)得到标题化合物为淡黄色固体(12.56g，91.8％)。

[0172] MS(ESI,pos.ion)m/z:157.1[M+H]+；

[0173] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)11.65(s,1H),6.55(d,J＝0.9Hz,1H),2.36(d,J＝0.8Hz,3H),2.22(s,3H).

[0174] 步骤6)N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)乙酰胺的合成

[0175] 依次向100mL反应瓶中加入4‑溴‑2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶(4.53g,16.92mmol)、N‑(4‑甲基噻唑‑2‑基)乙酰胺(2.20g,14.10mmol)、碳酸铯(9.19g,
28.20mmol)、醋酸钯(0.32g,1.41mmol)、四氟硼酸三叔丁基膦(0.82g,2.82mmol)和N,N‑二甲基甲酰胺(20mL)，体系氮气保护，升温至90℃反应2小时。停止反应，冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，乙酸乙酯(20mL)萃取3次，合并有机相，依次经过水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，旋干有机相，柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝80:1)得到标题化合物为淡黄色固体(4.35g，89.9％)。

[0176] MS(ESI,pos.ion)m/z:344.0[M+H]+；

[0177] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)10.30(s,1H),8.65(d,J＝5.1Hz,1H),7.57(s,1H),7.30(dd,J＝5.1,1.3Hz,1H),2.50(s,3H),2.31(s,3H),1.68(d,J＝9.0Hz,6H).

[0178] 步骤7)4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑胺的合成

[0179] 依次向100mL反应瓶中加入N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)乙酰胺(1.00g,2.91mmol)、乙醇(25mL)和6mol/L盐酸(5mL)，加入完毕，升温至85℃反应2小时。停止反应，旋干乙醇，加入饱和碳酸氢钠溶液至无气泡产生，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次经过饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，有机相浓缩，柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝100:1)得到标题化合物为淡黄色固体(0.86g，97.9％)。

[0180] MS(ESI,pos.ion)m/z:302.1[M+H]+；

[0181] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)8.51(d,J＝5.2Hz,1H),7.43(s,1H),7.32(s,2H),7.26(d,J＝5.0Hz,1H),2.30(s,3H),1.59(s,6H).

[0182] 步骤8)N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺的合成

[0183] 依次向100mL反应瓶中加入4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑胺(0.43g,1.43mmol)、CDI(0.35g,2.14mmol)和二氯甲烷(20mL)，反应升温至
40℃反应4小时。停止反应，冷却至室温，抽滤得到标题化合物为白色固体(0.48g，85.0％)。

[0184] 步骤9)(S)‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)氮杂环丁烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0185] 依次向25mL反应瓶中加入N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.44g,1.11mmol)、(S)‑氮杂环丁烷‑2‑甲酰胺盐酸盐(0.20g,1.44mmol)和N,N‑二甲基甲酰胺(5mL)，搅拌下加入三乙胺(0.77mL,5.55mmol)，体系氮气保护，室温反应14小时。停止反应，加入水(50mL)，室温搅拌30分钟，抽滤，所得固体柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝40:1)得到标题化合物为白色固体
(0.05g，10.5％)。

[0186] MS(ESI,pos.ion)m/z:428.3[M+H]+；

[0187] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)8.61(d,J＝5.1Hz,1H),7.68‑7.58(m,2H),7.56(s,1H),7.42(d,J＝5.1Hz,1H),7.25(s,1H),4.23(dd,J＝8.0,4.9Hz,1H),3.97(d,J＝3.7Hz,1H),3.80‑3.69(m,1H),2.43(d,J＝15.0Hz,3H),2.26‑2.06(m,2H),1.62(s,6H).[0188] 13C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)173.4,159.1,159.0,153.0,149.6,144.9,
141.4,129.7(t,J＝284.0Hz),122.5,122.1,120.9,52.6,46.8(q,J＝24.0Hz),43.0,24.6,
21.9,17.1。

[0189] 实施例2(2S,4S)‑4‑氟‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0190]

[0191] 步骤1)(2S,4S)‑4‑氟‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0192] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.43g,1.09mmol)、(2S,4S)‑4‑氟吡咯烷‑2‑甲酰胺对甲苯磺酸盐(0.42g,1.39mmol)、N,N‑二甲基甲酰胺(10mL)和三乙胺(0.76mL,5.45mmol)依次加入到反应瓶中，氮气氛围下室温反应14小时制备。反应结束后，加入水(100mL)，室温搅拌30分钟，抽滤，收集固体，所得粗产物经柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)得到标题化合物为白色固体(0.39g，78.2％)。

[0193] MS(ESI,pos.ion)m/z:460.0[M+H]+；

[0194] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)11.06(s,1H),8.61(d,J＝5.1Hz,1H),7.55(s,1H),7.42(d,J＝4.6Hz,1H),7.37(s,1H),7.02(s,1H),5.33(d,J＝53.7Hz,1H),4.49(s,
1H),3.96‑3.69(m,2H),2.42(s,3H),2.31(dd,J＝30.8,12.5Hz,2H),1.62(s,6H).

[0195] 13C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)173.5,159.0,149.6,141.3,128.8(q,J＝283.7Hz),121.8,120.7,59.4,53.7(d,J＝24.5Hz),46.8(q,J＝24.3Hz),36.8,21.9,16.8.[0196] 实施例3(2S,4S)‑4‑羟基‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0197]

[0198] 步骤1)(2S,4S)‑4‑羟基‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0199] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.33g,0.83mmol)、(2S,4S)‑4‑羟基吡咯烷‑2‑甲酰胺对甲苯磺酸盐(0.38g,1.25mmol)、N,N‑二甲基甲酰胺(10mL)和三乙胺(0.58mL,4.15mmol)依次加入到反应瓶中，氮气氛围下室温反应
14小时制备。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，所得粗产物经柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝40:1)纯化得到标题化合物为白色固体(0.34g，
89.2％)。

[0200] MS(ESI,pos.ion)m/z:458.2[M+H]+；

[0201] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)10.99(s,1H),8.60(d,J＝5.1Hz,1H),7.56(s,1H),7.51(s,1H),7.42(d,J＝5.1Hz,1H),7.12(s,1H),5.30(s,1H),4.26(d,J＝4.6Hz,2H),
3.68(dd,J＝10.6,5.3Hz,1H),3.44(d,J＝10.4Hz,1H),2.42(s,3H),2.36‑2.27(m,1H),
1.82(s,1H),1.62(s,6H).

[0202] 13C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)175.0,162.8,159.0,149.6,141.4,128.8(q,J＝283.8Hz),121.8,120.7,69.5,59.5,55.2,46.8(q,J＝24.2Hz),36.3,31.2,21.9.

[0203] 实施例4(2S,4R)‑4‑氟‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0204]

[0205] 步骤1)(2S,4R)‑4‑氟‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0206] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.35g,0.89mmol)、(2S,4R)‑4‑氟吡咯烷‑2‑甲酰胺对甲苯磺酸盐(0.41g,1.34mmol)、三乙胺(0.62mL,4.45mmol)加入到N,N‑二甲基甲酰胺(10mL)中，氮气氛围下，室温反应14小时制备。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩拌样，柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1)得到标题化合物为白色固体(0.34g，83.7％)。

[0207] MS(ESI,pos.ion)m/z:460.2[M+H]+；

[0208] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)8.58(d,J＝5.1Hz,1H),7.48(s,1H),7.21‑7.20(m,1H),5.37‑5.24(m,1H),4.74(t,J＝8.1Hz,1H),4.14‑4.09(m,1H),3.78(dd,J＝35.3,
10.3Hz,1H),2.62‑2.47(m,2H),2.38(s,3H),1.62(s,6H).

[0209] 13C NMR(151MHz,CDCl3)δ(ppm):171.2,159.7,149.1,140.5,128.2(q,J＝283.9Hz),121.4,121.0,60.4,58.6,47.0(q,J＝24.8Hz),29.7,22.0(q,J＝2.0Hz),14.2。

[0210] 实施例5(2S,4R)‑4‑羟基‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0211]

[0212] 步骤1)(2S,4R)‑4‑羟基‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0213] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.30g,0.76mmol)、(2S,4R)‑4‑羟基吡咯烷‑2‑甲酰胺盐酸盐(0.19g,1.14mmol)、三乙胺(0.53mL,
3.80mmol)加入到N,N‑二甲基甲酰胺(10mL)中，氮气氛围下，室温反应14小时制备。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，经柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝20:1)得到标题化合物为白色固体(0.23g，66.3％)。

[0214] MS(ESI,pos.ion)m/z:458.2[M+H]+；

[0215] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)11.01(s,1H),8.60(d,J＝5.1Hz,1H),7.56(s,1H),7.50‑7.37(m,2H),6.93(s,1H),5.13(s,1H),4.33(s,2H),3.60(d,J＝7.3Hz,1H),3.46(d,J＝11.8Hz,1H),2.42(s,3H),2.08(s,1H),1.87(s,1H),1.62(s,6H).

[0216] 13C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)174.3,159.0,149.6,141.4,128.8(q,J＝283.9Hz),121.8,120.7,69.3,59.4,55.4,46.8(q,J＝24.2Hz),38.7,21.9,16.8.

[0217] 实施例6(2S,4S)‑4‑甲基‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0218]

[0219] 步骤1)(2S,4S)‑4‑甲基‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0220] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.30g,0.76mmol)、(2S,4S)‑4‑甲基吡咯烷‑2‑甲酰胺盐酸盐(0.19g,1.14mmol)、三乙胺(0.53mL,
3.80mmol)加入到N,N‑二甲基甲酰胺(10mL)中，氮气氛围下，室温反应14小时制备。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，所得粗产物经柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝40:1)纯化得到标题化合物为淡黄色固体(0.30g，87.0％)。MS+
(ESI,pos.ion)m/z:456.2[M+H]；

[0221] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)10.95(s,1H),8.60(d,J＝5.1Hz,1H),7.55(s,1H),7.40(d,J＝5.2Hz,2H),6.92(s,1H),4.24(s,1H),3.87～3.72(m,1H),3.01(t,J＝
9.6Hz,1H),2.39(d,J＝12.0Hz,3H),2.37‑2.29(m,1H),2.22(d,J＝6.6Hz,1H),1.61(s,
6H),1.41(dd,J＝20.4,10.2Hz,1H),1.02(d,J＝6.4Hz,3H).

[0222] 13C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)174.3,162.8,159.0,149.6,141.4,128.8(q,J＝283.9Hz),121.7,120.7,54.2,46.8(q,J＝24.3Hz),36.3,31.2,21.9,17.5.

[0223] 实施例7(S)‑4,4‑二甲基‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0224]

[0225] 步骤1)(S)‑4,4‑二甲基‑N1‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)吡咯烷‑1,2‑二甲酰胺的合成

[0226] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.39g,0.99mmol)、(S)‑4,4‑二甲基吡咯烷‑2‑甲酰胺盐酸盐(0.26g,1.45mmol)、三乙胺(0.69mL,
4.95mmol)加入到N,N‑二甲基甲酰胺(10mL)中，氮气氛围下，室温反应14小时制备。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，经柱层析(二氯甲烷:
甲醇(v:v)＝40:1)纯化得到标题化合物为白色固体(0.38g，82.1％)。

[0227] MS(ESI,pos.ion)m/z:470.1[M+H]+；

[0228] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)10.92(s,1H),8.60(d,J＝5.1Hz,1H),7.55(s,1H),7.41(dd,J＝5.2,1.2Hz,2H),6.94(s,1H),4.32(s,1H),3.40(t,J＝14.5Hz,1H),3.23(d,J＝9.6Hz,1H),2.40(d,J＝11.0Hz,3H),1.98(d,J＝8.0Hz,1H),1.62(s,7H),1.09(s,
13
3H),0.99(s,3H). C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)174.2,162.8,159.0,149.6,141.4,
129.8(d,J＝13.3Hz),127.8,121.8,120.7,119.3,115.7,59.8,46.8(q,J＝24.3Hz),46.7,
36.3,31.2,26.6,26.1,21.9.实施例82‑(3‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)脲基)乙酰胺的合成

[0229]

[0230] 步骤1)2‑(3‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)脲基)乙酰胺的合成

[0231] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.24g,0.61mmol)、2‑氨基乙酰胺(0.07g,0.92mmol)、三乙胺(0.42mL,3.05mmol)加入到N,N‑二甲基甲酰胺(5mL)中，氮气氛围下，室温反应14小时制备。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，所得粗产物经柱层析(EA)纯化得到标题化合物为白色固体(0.20g，82.1％)。

[0232] MS(ESI,pos.ion)m/z:402.1[M+H]+；

[0233] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm):10.78(s,1H),8.60(d,J＝5.1Hz,1H),7.55(s,1H),7.50(s,1H),7.40(dd,J＝5.1,1.3Hz,1H),7.13(s,1H),6.81(t,J＝5.0Hz,1H),3.76(d,J＝5.2Hz,2H),2.39(s,3H),1.62(s,6H).

[0234] 13C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm):171.0,159.0,154.2,149.6,145.9,141.4,128.8(q,J＝283.8Hz),121.8,120.8,120.3,49.1,46.8(q,J＝24.2Hz),42.8,21.9(d,J＝
1.5Hz),17.0.

[0235] 实施例9(S)‑2‑(3‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)脲基)丙酰胺的合成

[0236]

[0237] 步骤1)(S)‑2‑(3‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)脲基)丙酰胺的合成

[0238] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.23g,0.58mmol)、(S)‑2‑氨基丙酰胺(0.08g,0.87mmol)、三乙胺(0.40mL,2.90mmol)加入到N,N‑二甲基甲酰胺(5mL)中，氮气氛围下，室温反应14小时制备。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，所得粗产物经柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝
100:1)纯化得到标题化合物为淡黄色固体(0.16g，66.2％)。

[0239] MS(ESI,pos.ion)m/z:416.1[M+H]+；

[0240] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm):10.59(s,1H),8.60(d,J＝4.9Hz,1H),7.59(s,1H),7.55(s,1H),7.41(d,J＝4.4Hz,1H),7.15(s,1H),6.94(d,J＝7.0Hz,1H),4.30‑4.15(m,1H),2.39(s,3H),1.62(s,6H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H).

[0241] 13C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm):174.4,159.0,153.4,149.6,145.8,141.3,128.8(q,J＝283.8Hz),121.8,120.8,120.4,49.0,46.8(q,J＝24.2Hz),21.9,20.1,17.0,
14.5.

[0242] 实施例10(S)‑2‑(3‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)脲基)丁酰胺的合成

[0243]

[0244] 步骤1)(S)‑2‑(3‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)脲基)丁酰胺的合成

[0245] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.38g,0.96mmol)、(2S)‑2‑氨基丁酰胺(0.15g,1.47mmol)、三乙胺(0.67mL,4.80mmol)加入到N,N‑二甲基甲酰胺(5mL)中，氮气氛围下，室温反应14小时制备。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，所得粗产物经柱层析(乙酸乙酯)纯化得到标题化合物为白色固体(0.27g，65.4％)。

[0246] MS(ESI,pos.ion)m/z:430.2[M+H]+；

[0247] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm):10.56(s,1H),8.60(d,J＝5.1Hz,1H),7.62(s,1H),7.55(s,1H),7.40(d,J＝4.2Hz,1H),7.17(s,1H),6.91(d,J＝7.7Hz,1H),4.19(dd,J＝
12.8,6.5Hz,1H),2.38(s,3H),1.73(td,J＝13.9,7.3Hz,2H),1.61(s,6H),0.85(t,J＝
7.3Hz,3H).

[0248] 13C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm):173.5,159.0,153.6,149.6,145.9,141.3,128.8(q,J＝283.8Hz),121.8,120.8,120.4,54.1,46.8(q,J＝24.2Hz),26.6,21.9,17.0,
9.8.

[0249] 实施例11(S)‑2‑(3‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)脲基)戊酰胺的合成

[0250]

[0251] 步骤1)(S)‑2‑(3‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)脲基)戊酰胺的合成

[0252] 本步骤标题化合物参照实施例1步骤9所描述的方法制备得到，即将N‑(4‑甲基‑5‑(2‑(1,1,1‑三氟‑2‑甲基丙基‑2‑基)吡啶‑4‑基)噻唑‑2‑基)‑1H‑咪唑基‑1‑甲酰胺(0.31g,0.78mmol)、(2S)‑2‑氨基戊酰胺(0.18g,1.18mmol)、三乙胺(0.54mL,3.90mmol)加入到N,N‑二甲基甲酰胺(5mL)中，氮气氛围下，室温反应14小时制备。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，二氯甲烷(20mL)萃取3次，合并有机相，依次饱和碳酸氢钠溶液洗、水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，所得粗产物经柱层析(乙酸乙酯)纯化得到标题化合物为淡黄色固体(0.30g，86.3％)。

[0253] MS(ESI,pos.ion)m/z:444.2[M+H]+；

[0254] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ(ppm):10.53(s,1H),8.59(s,1H),7.59(d,J＝28.5Hz,2H),7.40(s,1H),7.15(s,1H),6.89(d,J＝5.9Hz,1H),4.22(s,1H),2.38(s,3H),1.62(s,
8H),1.35‑1.22(m,2H),0.89(s,3H).

[0255] 13C NMR(151MHz,DMSO‑d6)δ(ppm):173.8,159.0,153.6,149.5,145.9,141.3,128.8(q,J＝283.7Hz),121.8,120.8,120.4,52.9,46.8(q,J＝24.2Hz),35.7,21.9,18.6,
17.0,14.2.

[0256] 生物试验

[0257] 实施例A：评价本发明化合物对PI3Kα激酶的抑制作用实验

[0258] 实验方法：

[0259] 运用ADP‑Glo LuminescentAssay方法测定化合物对PI3Kɑ激酶的抑制作用。实验过程中首先将PI3Kɑ溶解于提前配制好的HEPES缓冲液中(3mM MgCl2，1mM EGTA，100mM NaCl，0.03CHAPS，2mM DTT，50mM HEPES,pH 7.5)，配制浓度为1.5ug/ml。取2.5ul PI3Kɑ溶液溶于384孔板内，每孔内加入测试化合物(DMSO终浓度为1％)10个浓度梯度，同时设置仅不加PIKa组及仅不加测试化合物组，标准参照化合物选用Staurosporine。然后每孔加入2.5ul底物溶液，室温孵育60min。然后每孔加5ulADP‑Glo试剂终止反应，室温平衡120min。
后每孔加入10ul激酶检测试剂，充分混匀，于室温孵育30min，使之产生稳定的荧光信号，利用荧光酶标仪读取荧光信号，数值以相对荧光强度(RLU)表示。根据实验结果计算酶活性抑制率，计算公式如下：inh％＝(Max‑Signal)/(Max‑Min)*100，其中，Max为仅不加药物时所测的值，Min为仅不加PI3Kɑ激酶时所测的值，Signal为样品当前浓度时所检测的值。

[0260] 通过系列浓度的实验测试获得标准曲线，从而计算出IC50。

[0261] 表A本发明化合物对PI3Kα的活性抑制作用测试结果

[0262] 实施例号 IC50(nM)实施例2 15
实施例3 9
实施例4 14
实施例5 17
实施例7 13
实施例9 4.9
实施例10 19

[0263] 实验结果显示，本发明化合物对PI3Kɑ的活性具有较好的抑制作用。

[0264] 对于本领域技术人员显而易见的是，本发明内容并不限于前述说明性实施例，而且可以体现在其它具体形式中而又不偏离其实质特性。因此，预期各实施例在所有方面都被视作说明性的且非限制性的，应参照所附权利要求书，而不是前述这些实施例，因此，在所附权利要求书等同内容的含义和范围内的所有变化都包括在本文中。