技术领域
[0001] 本发明涉及分子生物学领域，具体的说是两种抗菌肽及其应用。
相关背景技术
[0002] 抗菌肽(antimicrobial peptide)是一种具有抗微生物活性的多肽，通常具有较强的碱性，在先天性免疫中发挥重要作用。抗菌肽存在于几乎所有生命物种中，发挥抗细菌、抗病毒、抗真菌和抗寄生虫等生物活性。与抗生素类药物相比，抗菌肽具有绿色环保、且不会引起靶细菌耐药性的特点，因此具有广泛的应用前景。荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)属于革兰氏阴性好氧杆菌，是水生动物一种条件致病菌，能够感染多种海水和淡水动物，导致败血病和赤皮病。海豚链球菌(Streptococcus iniae)是革兰氏染色阳性细菌，能够引起鱼链球菌病，是多种海水鱼类和淡水鱼类的重要病原菌。藤黄微球菌(Micrococcus luteus)属于革兰氏染色阳性细菌，广泛分布于土壤、空气、水体等生活环境以及动物体表，能够感染人类，造成菌血症等。目前，同时对荧光假单胞菌、海豚链球菌和藤黄微球菌具有杀灭作用的抗菌肽的报道极少。
具体实施方式
[0009] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。
[0010] 实施例1
[0011] 人工设计抗菌肽(命名为BcP11和DrP16)分别为序列表SEQ ID No.1中和SEQ ID No.2的氨基酸序列。
[0012] 序列表SEQ ID No.1为：
[0013] KCFLRRRRSRA
[0014] (a)序列特征：
[0015] ●长度：11
[0016] ●类型：氨基酸序列
[0017] ●链型：单链
[0018] ●拓扑结构：线性
[0019] (b)分子类型：蛋白质
[0020] (c)假设：否
[0021] (d)反义：否
[0022] (e)最初来源：人工合成
[0023] 序列表SEQ ID No.2为：
[0024] MKRRRKFSHFSFKRGY
[0025] (a)序列特征：
[0026] ●长度：16
[0027] ●类型：氨基酸序列
[0028] ●链型：单链
[0029] ●拓扑结构：线性
[0030] (b)分子类型：蛋白质
[0031] (c)假设：否
[0032] (d)反义：否
[0033] (e)最初来源：人工合成
[0034] 实施例2
[0035] 抗菌肽的应用
[0036] 步骤1)细菌制备。
[0037] 在LB培养基中分别培养荧光假单胞菌、海豚链球菌和藤黄微球菌至OD600为0.8,然3
后离心(5000g，4℃)10min。收集菌体，将其悬浮于PBS中至终浓度为5x10 cfu/ml。
[0038] 所述LB组成成分按重量百分比计：1.0％蛋白胨，0.5％酵母粉，1.0％氯化钠，97.5％蒸馏水。所述PBS组成成分按重量百分比计：0.8％ NaCl,0.02％ KCl,0.358％ Na2HPO4.12H2O,0.024％ NaH2PO4。
[0039] 所述荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号为：CGMCC No.2329。所述海豚链球菌(Streptococcus iniae)保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号为：CGMCC No.1984。所述藤黄微球菌(Micrococcus luteus)保存于CGMCC，编号为CGMCC 1.191。
[0040] 步骤2)BcP11和DrP16的抗菌效应。
[0041] 将100ul上述步骤1)的荧光假单胞菌菌液、海豚链球菌菌液和藤黄微球菌菌液分别与抗菌肽BcP11(终浓度为20μM)、DrP16(终浓度为20μM)或PBS(对照)混合，22℃保温4h。随后将混合液涂布于LB固体平板，培养32－48h后观察荧光假单胞菌(图1A左)、海豚链球菌(图1B左)和藤黄微球菌(图1C左)的生长状况。同时，进行菌落计数。结果表明，与PBS处理组相比，BcP11和DrP16处理组的荧光假单胞菌(图1A右)、海豚链球菌(图1B右)和藤黄微球菌(图1C右)几乎没有存活，即BcP11和DrP16的杀菌率约为100％。
[0042] 这些结果表明，BcP11和DrP16具有高效的抗菌作用，可应用于荧光假单胞菌、海豚链球菌和藤黄微球菌相关的细菌性疾病的防治。
