[0001] 本公开涉及一种细胞融合方法。

[0002] 一种以上多个细胞融合而成的融合细胞作为具有融合前的各细胞的特征、功能的细胞是有用的。例如，用于产生单抗的杂交瘤(B细胞与骨髓瘤癌细胞(骨髓瘤)的融合细胞等)、融合细胞疫苗(使癌患者的树突状细胞与癌细胞融合而成的细胞等)、再生医疗(利用胰岛细胞与骨髄细胞的融合进行的糖尿病治疗)等。

[0003] 作为融合细胞的制作方法，例如开发出了电细胞融合法(专利文献1)、仙台病毒法(非专利文献1、2)、聚乙二醇(PEG)法(非专利文献3、4)等。

[0004] 电细胞融合法是向细胞施加电压而将细胞膜穿孔，引起细胞融合的方法。本方法需要根据细胞的直径来对用于穿孔的最佳电压进行调整。

[0005] 仙台病毒法是对象限定于动物细胞的方法。

[0006] 就聚乙二醇(PEG)法而言，当使用高分子的PEG时容易抑制细胞膜的破坏，此外，与其他方法相比细胞融合率也高，成本低，因此也通用。另一方面，PEG的细胞毒性高，因此在以往方法中处理时间非常长，处理后的细胞的生存率降低。此外，操作繁琐，存在较多依赖实施者的手艺的过程，会根据手艺而结果产生大的偏差。

[0007] 如上所述，使用PEG的方法通用，但除了PEG以外，还已知具有细胞融合活性的化学试剂(化学细胞融合剂)(非专利文献5)。

[0008] 现有技术文献

[0009] 专利文献

[0010] 专利文献1：日本特开2012‑157312号公报

[0011] 非专利文献

[0012] 非专利文献1：Nature，256,495‑497(1975)

[0013] 非专利文献2：J.Immunol.，1；173(7)：4297‑307(2004)

[0014] 非专利文献3：Somatic Cell Genet.，1(4)：397‑400(1975)

[0015] 非专利文献4：Somatic Cell Genet.，5(2)：263‑9(1979)

[0016] 非专利文献5：膜(MEMBRANE)，6(5)，310‑320(1981)

[0031] 各实施方式中的各构成和它们的组合等是一个例子，可以在不脱离本公开的主旨的范围内，适当进行构成的附加、省略、置换以及其他变更。本公开不由实施方式限定，仅由权利要求书限定。

[0032] 本公开的一个实施方案为一种细胞融合方法，该细胞融合方法包括：利用加压部对容纳于容纳部的、包含一种以上多个细胞和一种以上化学细胞融合剂的溶液进行加压的过程。

[0033] 所述过程中的容纳部包括：包含一种以上多个细胞和一种以上化学细胞融合剂的溶液。所述容纳部的结构、材料只要是不使所述容纳部所包括的溶液变质，此外在利用加压部对所述容纳部所包括的溶液进行了加压的情况下经受该加压的结构、材料，就没有特别限制。

[0034] 所述一种以上多个细胞既可以是一种多个细胞，也可以是两种以上多个细胞，优选为一种多个细胞、两种多个细胞、或三种多个细胞。

[0035] 在所述一种以上多个细胞为一种多个细胞的情况下，就所述一种多个细胞而言，只要利用本实施方案的方法而细胞融合，就没有特别限制，可以是原核细胞也可以是真核细胞。此外，可以是黏附系细胞也可以是悬浮系细胞。此外，可以是细胞系也可以是原代细胞(primary culture cell)。此外，任一个细胞均可以是改变了基因的细胞。

[0036] 作为原核细胞，可列举出：细菌的细胞、古细菌的细胞。

[0037] 作为所述细菌，可列举出：大肠杆菌、肺炎双球菌、乳酸菌、根瘤菌、亚硝酸菌、硝酸菌等。

[0038] 作为所述古细菌，可列举出：高度嗜盐菌、甲烷菌、嗜热菌等。

[0039] 作为真核细胞，可列举出：动物的细胞、植物的细胞(包括原生质体)、真菌的细胞、原生生物的细胞。

[0040] 作为所述动物，既可以是脊椎动物(分类为哺乳类、爬行类、鸟类、两栖类、鱼类中的任意类)也可以是无脊椎动物。例如，可列举出：人、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠(例如，中国仓鼠等)、兔子、驴、绵羊、山羊、羊驼、美洲驼、鸡、果蝇、猴子(例如，非洲绿猴等)等。

[0041] 作为所述植物，既可以是种子植物也可以是孢子植物(分类为蕨类植物、苔藓植物、藻类中的任意类)。种子植物可以是被子植物也可以是裸子植物，被子植物可以是单子叶植物也可以是双子叶植物。

[0042] 作为所述真菌，可列举出：蘑菇、霉菌、单细胞性的酵母、游动孢子(具有鞭毛，进行运动的孢子)等。

[0043] 作为所述原生生物，可列举出：真核藻类(例如，褐藻类、红藻类等)、具有鞭毛的菌类生物(例如，卵菌类等)、粘菌类(例如，变形菌、细胞性粘菌等)、原生动物(例如，阿米巴原虫、草履虫等)。

[0044] 在所述一种以上多个细胞为两种以上多个细胞的情况下，作为所述两种以上多个细胞所含的各种细胞的方案，可列举出与所述一种以上多个细胞为一种多个细胞的情况的方案同样的方案。

[0045] 此外，就所述两种以上多个细胞的组合而言，只要利用本实施方案的方法而细胞融合，就没有特别限制。

[0046] 例如，既可以是作为原核细胞的两种以上多个细胞，也可以是作为真核细胞的两种以上多个细胞，也可以是作为原核细胞的一种以上细胞和作为真核细胞的一种以上细胞。

[0047] 此外，既可以是作为黏附系细胞的两种以上多个细胞，也可以是作为悬浮系细胞的两种以上多个细胞，也可以是作为黏附系细胞的一种以上的细胞和作为悬浮系细胞的一种以上细胞。

[0048] 此外，既可以是作为细胞系的两种以上多个细胞，也可以是作为原代细胞的两种以上多个细胞，也可以是作为细胞系的一种以上细胞和作为原代细胞的一种以上的细胞。

[0049] 此外，就所述动物的细胞所来源的动物的组合而言，也只要利用本实施方案的方法而细胞融合，就没有特别限制。例如，既可以是作为源自人的细胞的两种以上多个细胞、也可以是作为源自小鼠的细胞的两种以上多个细胞，也可以是作为源自人的细胞的一种以上细胞和作为源自小鼠的细胞的一种以上细胞。

[0050] 作为具体例子，可列举出：小鼠脾脏B细胞与小鼠骨髄瘤细胞(骨髓瘤)的组合(其例如用于单抗的制作)、癌细胞与树突状细胞的组合(其用于例如癌免疫疗法。需要说明的是，两细胞既可以源自人，也可以源自小鼠，也可以源自大鼠)，胰岛细胞与间充质干细胞的组合(其例如用于利用胰岛素分泌进行的糖尿病治疗。需要说明的是，两细胞既可以源自人，也可以源自大鼠)等。

[0051] 在本公开中，化学细胞融合剂是指具有细胞融合活性的化学试剂。在本实施方案的方法中，可以使用一种以上化学细胞融合剂。所述一种以上化学细胞融合剂用于以往的细胞融合法，只要利用本实施方案的方法而细胞融合，就没有特别限制。此外，就所述溶液中的所述一种以上化学细胞融合剂的含量而言，只要利用本实施方案的方法而细胞融合，就没有特别限制，例如为10％(v/v)以上，另一方面，例如为100％(v/v)以下、50％(v/v)以下。此外，也可以是它们不矛盾的组合。此外，一种以上多个细胞与所述一种以上化学细胞融合剂可以按照以往的混合方法进行混合。

[0052] 作为所述化学细胞融合剂，例如可列举出：作为油溶性低分子的化学细胞融合剂、作为水溶性高分子的化学细胞融合剂等。需要说明的是，所述化学细胞融合剂可以包含用于发挥其活性的公知的助剂。

[0053] 作为油溶性低分子的化学细胞融合剂，例如，如非专利文献5所述，可列举出：高级脂肪酸(例如，癸酸、十一酸、十一烯酸、十二酸、十三酸、十四酸、肉豆蔻油酸、棕榈油酸、油酸、反油酸、亚油酸、芥酸等)、高级脂肪酸酯(例如，十一酸甲酯、十二酸甲酯、蔗糖单月桂酸酯、十三酸甲酯、十四酸甲酯、十六酸甲酯、棕榈油酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、单油酸甘油酯、二油酸甘油酯、乙二醇单油酸酯、丙二醇单油酸酯等)、其他高级脂肪族衍生物(油胺、鲨油醇、油醇、视黄醇等)、离子载体(例如，A23187、X537A、缬氨霉素等)，除了它们以外，还可列举出：二甲基亚砜(DMSO)、α‑生育酚、2‑(2‑甲氧基)‑乙氧基乙酯9,10‑十九烷酸甲酯、秋水仙碱、两性霉素B、磷脂酶等。

[0054] 作为水溶性高分子的化学细胞融合剂，例如，如非专利文献5所述，可列举出：聚乙二醇(PEG)(例如，可列举出数均分子量为600以上、1500以上，另一方面，数均分子量为8000以下、4000以下的PEG。此外，也可以是它们不矛盾的组合。作为具体例子，可列举出4
PEG1500、PEG4000、PEG8000等)、聚乙烯醇、明胶、葡聚糖(例如，分子量为4×10以上且2×
6
10以下)、硫酸葡聚糖、聚‑L‑赖氨酸等。

[0055] 在所述过程中，利用加压部对所述溶液进行加压。所述加压部只要能对所述溶液进行加压，此外例如不破坏所述容纳部等不破坏体系，就没有特别限制。

[0056] 就利用所述加压部进行的加压而言，只要利用本实施方案的方法而细胞融合，就没有特别限制。例如，作为从加压开始至所述容纳部内的压力达到最大压力为止的时间，例如可以采用0.31毫秒、0.40毫秒、0.48毫秒、0.54毫秒、0.64毫秒、0.80毫秒、1.70毫秒、以及2.0毫秒中的任意个，在它们的不矛盾的组合中作为上限或下限。

[0057] 例如，鉴于后述的实施例2的结果和实施例6～8的结果，所述时间短的一方的细胞融合率高。其原因可推测为：接近的细胞彼此被一口气拉近，由此高效地发生细胞融合。因此，作为所述时间的上限，例如可列举出：2.0毫秒以下、1.70毫秒以下、0.80毫秒以下、0.64毫秒以下、0.54毫秒以下等。另一方面，作为下限，没有特别限制，例如可列举出：0.31毫秒以上、0.40毫秒以上、0.48毫秒以上等。

[0058] 此外，就利用所述加压部进行的加压而言，只要利用本实施方案的方法而细胞融合，就没有特别限制。例如，作为所述最大压力，可以采用1.75MPa、2.51MPa、5.35MPa、6.12MPa、6.26MPa、11.50MPa、以及30.74MPa中的任意个，以它们不矛盾的组合作为上限或下限。

[0059] 其中，从推测为融合细胞时会促进黏附的细胞彼此的细胞膜的融合的方面考虑，作为所述最大压力，例如可列举出：1.75MPa以上、2.51MPa以上、5.35MPa以上、6.26MPa以上、11.50MPa以上等。这与如下结果非常符合：例如，鉴于后述的实施例1～5的结果，所述最大压力大的一方的细胞融合率高。另一方面，从推测为形成非常大量的细胞结合而成的巨大细胞块的比例增加，然后，推测进行适当的细胞培养所产生障碍、操作变得繁琐的方面考虑，优选为30.74MPa以下。

[0060] 此外，就利用所述加压部进行的加压而言，只要利用本实施方案的方法而细胞融合，就没有特别限制，但从抑制细胞受到的损伤，提高细胞融合后的细胞生存率的观点考虑，优选为30.74MPa以下，更优选为11.50MPa以下，另一方面，例如为2.51MPa以上，优选为6.26MPa以上。此外，也可以是它们不矛盾的组合。

[0061] 其中，所述压力是指容纳部内的压力。其测定方法没有特别限制，例如在使用后述的实施例中记载的注入器进行测定的情况下，例如可以使用日本特开2005‑21640号公报中记载的方法进行测定。更具体而言，可以使用后述的“容纳部的内压的计测方法”栏中记载的方法进行测定。此外，在使用后述的实施例中记载的落锤试验器进行测定的情况下也可以同样地进行测定。

[0062] 就利用本实施方案的方法产生的融合细胞而言，按照所述技术领域中的融合细胞的定义，不限于一个细胞与另一个细胞融合而成为一个细胞，也包括三个以上细胞融合而成为一个细胞。需要说明的是，在显微观察下，有时融合细胞会被观察为细胞块。因此，本公开中的细胞融合率设为如下所述地利用所述技术领域中的通常的计算方法计算出的细胞融合率。

[0063] 在所述一种以上多个细胞为一种多个细胞的情况下，在将能用显微镜观察到的、所有细胞块的个数和不是细胞块而如通常培养时那样作为单一细胞存在的细胞的个数的合计设为X个，将“所述一种多个细胞融合而产生的细胞块的个数”设为Y个时，以Y与X的比例(即，Y/X)表示。

[0064] 其中，“所述一种多个细胞融合而产生的细胞块的个数”是指能确认到两个以上细胞核的细胞块的个数。此时，细胞核的个数例如可以通过使用能对核进行染色的色素来对细胞块进行染色，用显微观察等进行确认。

[0065] 在所述一种以上多个细胞为两种多个细胞的情况下，在将能用显微镜观察到的、所有细胞块的个数和不是细胞块而如通常培养时那样作为单一细胞存在的细胞的个数的合计设为X个，将“所述两种多个细胞融合而产生的细胞块的个数”设为Y个时，以Y与X的比例(即，Y/X)表示。

[0066] 其中，“所述两种多个细胞融合而产生的细胞块的个数”是指例如，在将所述两种细胞分别设为细胞种类A的细胞，细胞种类B的细胞时，一个以上细胞种类A的细胞与一个以上细胞种类B的细胞融合而产生的细胞块的个数。

[0067] 此时，例如，可以利用色素A对细胞种类A的细胞进行染色，利用色素B对细胞种类B的细胞进行染色，在细胞融合后，将检测到色素A和色素B这两者的细胞块的个数设为所述个数。

[0068] 此外，产生的细胞块所含的所述两种多个细胞不需要各自为一个，也可以包含两个以上，也不需要为相同数量。例如，产生的细胞块既可以是一个细胞种类A的细胞与一个细胞种类B的细胞融合而产生的细胞块，也可以是一个细胞种类A的细胞与两个细胞种类B的细胞融合而产生的细胞块等。

[0069] 在所述一种以上多个细胞为三种多个细胞的情况下，在将能用显微镜观察到的、所有细胞块的个数和不是细胞块而如通常培养时那样作为单一细胞存在的细胞的个数的合计设为X个，将“所述三种多个细胞融合而产生的细胞块的个数”设为Y个时，以Y与X的比例(即，Y/X)表示。

[0070] 其中，“所述三种多个细胞融合而产生的细胞块的个数”是指例如，在将所述三种细胞分别设为细胞种类A的细胞、细胞种类B的细胞、细胞种类C的细胞时，一个以上细胞种类A的细胞、一个以上细胞种类B的细胞以及一个以上细胞种类C的细胞融合而产生的细胞块的个数。

[0071] 此时，例如，可以利用色素A对细胞种类A的细胞进行染色，利用色素B对细胞种类B的细胞进行染色，利用色素C对细胞种类C的细胞进行染色，在细胞融合后，将检测到色素A、色素B以及色素C中的全部的细胞块的个数设为所述个数。

[0072] 此外，产生的细胞块所含的所述三种多个细胞不需要各自为一个，也可以包含两个以上，也不需要为相同数量。例如，产生的细胞块既可以是一个细胞种类A的细胞、一个细胞种类B的细胞以及一个细胞种类C的细胞融合而产生的细胞块，也可以是一个细胞种类A的细胞、一个细胞种类B的细胞以及两个细胞种类C的细胞融合而产生的细胞块等。

[0073] 在所述一种以上多个细胞为四种以上多个细胞的情况下也与上述是同样的。即，在将能用显微镜观察到的、所有细胞块的个数和不是细胞块而如通常培养时那样作为单一细胞存在的细胞的个数的合计设为X个，将“所述四种以上多个细胞融合而产生的细胞块的个数”设为Y个时，以Y与X的比例(即，Y/X)表示。

[0074] 关于“所述四种多个细胞融合而产生的细胞块的个数”，也可以与上述同样，例如除了所述一种以上多个细胞为三种多个细胞的情况下的细胞种类A的细胞、细胞种类B的细胞、细胞种类C的细胞以外，还假定细胞种类D以后的细胞，同样地计算出。

[0075] 此外，关于产生的细胞块所含的所述四种多个细胞，也可以与上述同样地考虑。

[0076] 利用本实施方案的方法产生的融合细胞优选其生存率高。在本公开中，生存率是指利用在所述技术领域中通常的计算方法计算出的生存率。

[0077] 例如，在所述一种以上多个细胞为一种多个细胞的情况下，将产生的细胞块在所述一种多个细胞的通常培养中使用的条件下培养24小时，然后，使用细胞的死活判定试剂，根据需要使用进行死活判定的装置进行判定等，计算出活细胞数量与所有细胞数量的比例即可。

[0078] 此外，在所述一种以上多个细胞为两种以上多个细胞，且根据所述种类而适合于细胞培养的条件不同的情况下，如在所述技术领域中进行的那样，在适合于对所述两种以上多个细胞中对环境的变化最脆弱的种类的细胞进行培养的条件下培养即可。在培养中，也可以适当追加需要的组分。而且，然后使用细胞的死活判定试剂，根据需要使用进行死活判定的装置进行判定等，计算出活细胞数量与所有细胞数量的比例即可。

[0079] 所述生存率在所有细胞数量为4×106以上的情况下，优选为32.75％以上，更优选为41.25％以上，进一步优选为48.25％以上，另一方面，上限优选大的一方，例如为100％以下、54.88％以下。此外，也可以是它们不矛盾的组合。

[0080] 本公开的另一个实施方案为一种细胞融合装置，该细胞融合装置具备：容纳部，容纳包含一种以上多个细胞和一种以上化学细胞融合剂的溶液；和加压部，工作时对容纳于所述容纳部的所述溶液进行加压。

[0081] 如上所述，所述容纳部的结构、材料只要是不使所述容纳部所包括的溶液变质，此外在利用加压部对所述容纳部所包括的溶液进行了加压的情况下经受该加压的结构、材料，就没有特别限制。

[0082] 本实施方案的装置可以具备用于使加压部对所述容纳部所包括的溶液进行加压的驱动部。所述驱动部的结构、材料没有特别限制。就加压而言，例如可以通过在压缩气体的压力被释放时产生的压力来进行，也可以通过由点火装置进行点火的火药的燃烧所产生的压力来进行。此外，也可以通过将压电元件等的电能、弹簧等的机械能用作加压能的压力来进行，也可以通过利用适当组合这些形态的能量从而生成的加压能的压力来进行。

[0083] 作为加压而言，在采用使用由点火装置进行点火的火药的燃烧所产生的压力的方案的情况下，作为火药，例如可以是以下之中的任一种火药、或者由它们中的多个组合而构成的火药：包含锆和高氯酸钾的火药(ZPP)、包含氢化钛和高氯酸钾的火药(THPP)、包含钛和高氯酸钾的火药(TiPP)、包含铝和高氯酸钾的火药(APP)、包含铝和氧化铋的火药(ABO)、包含铝和氧化钼的火药(AMO)、包含铝和氧化铜的火药(ACO)、包含铝和氧化铁的火药(AFO)。作为这些火药的特征，即使其燃烧产物在高温状态下为气体，在常温下也不含气体成分，因此点火后燃烧产物立即进行冷凝。由此，在所述溶液的加压过程中，能使由于点火药的燃烧而产生的该加压时的燃烧产物的温度和压力在从施加于所述液体的压力达到最初的峰值射出力起的短时间内推移至常温常压附近。

[0084] 作为本实施方式的装置的例子，可列举出注入器。以下，对其详细内容进行说明。

[0085] 在作为本实施方案的装置的例子的注入器中，在容纳部中并非从最初起就容纳有所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂。例如，在从注入器卸下注射筒部的状态下，并且在从注射筒部卸下后述的封闭构件的状态下，从注射筒部的上部开放端侧(位于与射出口的轴向相反一侧的开放端)将所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂注入至注射筒部内。在注射筒部中位于与射出口的轴向相反侧的端部形成为开放端，在柱塞未插入于注射筒部的状态下上述开放端对外部开放。在将所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂注入至注射筒部内后，以它们不从注射筒部的上部开放端且从喷嘴漏出的方式从所述上部开放端侧向注射筒部内稍微插入柱塞，由此在注射筒部内形成容纳部。由此，即使以使上部开放端朝下的方式变更注射筒部的姿势，容纳于注射筒部的容纳部内的所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂也不会从容纳部漏出。然后，例如，以射出口朝上的方式变更注射筒部的姿势，沿着在注射筒部的轴向上延伸的内壁面使柱塞滑动，将容纳部内的气体经由喷嘴从射出口向容纳部外排出。如此，通过采用需要向容纳部的填充操作的构成，能容纳期望的一种以上多个细胞和期望的所述一种以上化学细胞融合剂。因此，在该注入器中，注射筒(syringe)部构成为可拆装。

[0086] 此外，在注入器工作时，喷嘴顶端的射出口被封闭，以免所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂射出。就封闭构件、封闭方法而言，只要所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂不射出，就没有特别限制。

[0087] 以下，参照附图，作为注入器的例子，对注射器1(将顶端侧加工为可封闭的无针注射器)进行说明。需要说明的是，各实施方式中的各构成和各构成的组合等是一个例子，可以在不脱离本公开的主旨的范围内，进行适当的构成的附加、省略、置换以及其他变更。本公开不由实施方式限定，仅由权利要求书限定。这一点对于后述的实施例也同样。需要说明的是，使用“顶端侧”和“基端侧”作为表示注射器1的长度方向上的相对位置关系的术语。所述“顶端侧”表示靠近后述的注射器1的顶端即靠近射出口31a的位置，所述“基端侧”表示在注射器1的长度方向上与“顶端侧”相反一侧的方向即驱动部7侧的方向。此外，本示例是使用由点火装置进行点火的火药的燃烧能量，对容纳所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂的容纳部进行加压的示例，但本实施方案不限定于此。

[0088] (注射器1的构成)

[0089] 图1是表示注射器1的概略构成的图，也是注射器1的沿其长度方向的剖视图。注射器1通过如下方式构成：注射器组装体10安装于外壳(注射器外壳)2，该注射器组装体10将由注射筒部3和柱塞4构成的子组装体与由注射器主体6、活塞5以及驱动部7构成的子组装体一体地组装而成。

[0090] 如上所述，注射器组装体10构成为相对于外壳2拆装自如。在注射器组装体10所含的注射筒部3与柱塞4之间形成的容纳部32中填充有所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂，而且，所述注射器组装体10是在每次进行细胞融合时用完就扔掉的单元。此外，若在无菌环境下进行细胞融合，则生成无菌状态的融合细胞也是容易的。另一方面，在外壳2侧包括向注射器组装体10的驱动部7中所含的点火器71供电的电池9。来自电池9的供电通过用户进行按下设于外壳2的按钮8的操作，经由布线在外壳2侧的电极与注射器组装体10的驱动部7侧的电极之间进行。需要说明的是，就外壳2侧的电极和注射器组装体
10的驱动部7侧的电极而言，两电极的形状和位置被设计为在注射器组装体10安装于外壳2时自动地接触。此外，外壳2是只要在电池9中剩余能够向驱动部7供给的电力就能反复使用的单元。需要说明的是，在外壳2中，在电池9的电力耗尽的情况下，也可以仅更换电池9而继续使用外壳2。此外，喷嘴31的顶端的射出口31a被封闭部43封闭，以免所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂射出。封闭部43固定于顶盖41。此外，顶盖41经由固定部
42固定于注射筒部3。

[0091] 接着，对注射器组装体10的详细内容进行说明。首先，在对包括注射筒部3和柱塞4的子组装体进行说明时，注射筒部3在其内部形成有能容纳所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂的空间即容纳部32。更详细而言，如图1所示，柱塞4沿着在注射筒部3的轴向上延伸的内壁面滑动自如地配置，由注射筒部3的内壁面和柱塞4划定出容纳部32。此外，注射筒部3具有在顶端侧形成有射出口31a的喷嘴部31。在图1所示的例子中，柱塞
4的顶端侧的轮廓成为与喷嘴部31的内壁面的轮廓大致一致的形状。

[0092] 而且，注射筒部3具有用于固定顶盖41的固定部42，在固定部42固定有顶盖41。顶盖41具有用于封闭射出口31a的封闭部43，在顶盖41被固定于注射筒部3的固定部42的状态下，喷嘴部31的射出口31a被封闭部43封闭。在该状态下，注射筒部3内的容纳部32成为被密封的状态。需要说明的是，顶盖41能拆装自如地固定于注射筒部3的固定部42。此外，如图1所示，注射筒部3中的喷嘴部31具有与射出口31a和容纳部32连通的流路，所述流路的流路截面积从容纳部32侧趋向射出口31a侧逐渐减少。

[0093] 接着，对包括注射器主体6、活塞5以及驱动部7的子组装体进行说明。活塞5例如是金属制，构成为通过由驱动部7的点火器71生成的燃烧产物(燃烧气体)进行加压，在形成于注射器主体6的内部的贯通孔中滑动。注射器主体6是大致圆筒状的构件，沿着在其轴向上延伸的内壁面滑动自如地容纳有活塞5。需要说明的是，活塞5也可以是树脂制，在该情况下，也可以在要求耐热性、耐压性的部分并用金属。此外，如图1所示，活塞5与柱塞4一体地连结。在本实施方式中，“加压部”包含柱塞4和活塞5而构成。

[0094] 接着，对驱动部7进行说明。如图1所示，驱动部7以注射器主体6中的贯通孔为基准固定于基端侧。驱动部7具有作为电点火器的点火器71。点火器71以面向注射器主体6中的贯通孔的内部的方式配置，在其内部容纳有点火药。作为点火药，可以如上所述采用各种火药。此外，点火药例如可以容纳于由适当的薄壁金属形成的火药杯中。

[0095] 接着，对上述构成的注射器1的动作内容进行说明。如上所述，注射筒部3构成为可拆装。在从注入器1卸下注射筒部3的状态下，并且在从注射筒部3的固定部42卸下顶盖41的状态下，例如，从注射筒部3的上部开放端侧(位于与射出口的轴向相反一侧的开放端)将所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂注入至注射筒部3内，以它们不从注射筒部3的上部开放端且从喷嘴漏出的方式，从所述上部开放端侧向注射筒部3内稍微插入柱塞4，以射出口31a朝上的方式变更注射筒部3的姿势，沿着在注射筒部3的轴向上延伸的内壁面使柱塞4滑动，经由喷嘴部31从射出口31a将容纳部32内的气体向容纳部32外排出。

[0096] 由此，能将期望的所述一种以上多个细胞和期望的所述一种以上化学细胞融合剂容纳于容纳部32内。此时，所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂优选在与以往技术同样地预先混合的状态下容纳于容纳部32内。不过，最终，所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂只要能在与以往技术同样地混合的状态下容纳于所述容纳部32内，其方案就没有特别限制。

[0097] 此外，优选在利用加压部对包含一种以上多个细胞和一种以上化学细胞融合剂的溶液进行加压时，容纳部32内不含气体(空气等)，因此，例如可列举出：如上所述，在将所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂容纳于容纳部32后，将空气通过射出口31a从容纳部32排出。

[0098] 接着，将顶盖41安装于注射筒部3的固定部42。其结果是，喷嘴部31的射出口31a被封闭部43封闭，由此容纳部32被密封。

[0099] 从该状态起，例如，当用户进行按下设于外壳2的按钮8的操作时，以此作为触发，从电池9向驱动部7的点火器71供给工作电力，点火器71进行工作。当点火器71进行工作时，点火药被点火而燃烧，生成燃烧产物(火焰、燃烧气体等)。其结果是，例如点火器71的火药杯裂开，点火药的燃烧气体向注射器主体6中的贯通孔内释放。由此，注射器主体6的贯通孔内的压力急剧升高，朝向注射器主体6的顶端侧按压活塞5，其结果是，活塞5沿着注射器主体6中的贯通孔的内壁面朝向顶端侧滑动。如上所述，由于柱塞4与活塞5一体地连结，因此柱塞4也以与活塞5联动的方式沿着注射筒部3的内壁面滑动。即，通过将柱塞4朝向位于注射筒部3的顶端侧的喷嘴部31压入，容纳有所述一种以上多个细胞和所述一种以上化学细胞融合剂的容纳部32的容积减少并被急剧地加压。

[0100] 如上所述，当驱动部7中的点火器71进行工作时，利用点火药的燃烧能借助活塞5压入柱塞4，由此容纳于密封状态的容纳部32的液体被急剧地加压。其中，注射器1中，调整点火药的种类、用量、其他任意的参数，以使驱动部7(点火器71)进行工作，加压部对容纳于所述容纳部的所述溶液进行加压。其结果是，适当地进行了细胞融合。如此，在生成融合细胞后，例如，在从外壳2卸下注射器组装体10后，从注射筒部3卸下顶盖41。然后，可以卸下插入有柱塞4的注射筒部3，进而从其中卸下柱塞4，将容纳于容纳部32的包含融合细胞的内容物，例如用移液管等取出，回收至适当的容器。

[0101] 如上所述，根据作为本实施方案的装置的一个例子的注射器1，无需大规模的装置、对该装置进行处理的技术人员的高等的技术，就能简单地进行细胞融合。而且，根据注射器1，注射器组装体10相对于外壳2拆装自如，也可以将注射器组装体10构成为一次性单元。因此，只要在融合细胞的生成后废弃使用完毕的注射器组装体10即可，由此，无需在每次进行细胞融合时清洗使用完毕的注射器组装体10，能抑制用户耗费大的劳动力、工作量，提供使用便利性优异的细胞融合装置。

[0102] 作为本实施方案的细胞融合装置的例子，还可列举出落锤试验器。以下，参照附图，对落锤试验器进行说明。

[0103] 图2是表示落锤试验器100的概略构成的图。落锤试验器100具备：床身110、支承板120、对支承板120进行支承的支柱130、从支承板120起朝向上方立起设置的框架140、引导杆150、锤160、设置于支承板120的注射器组装体10A等。

[0104] 床身110是载置于地面、工作台等适当的载置面的基座，具有用于将床身110载置于载置面的多个脚部111。例如，床身110可以是平面矩形的钢制板，其四角设有脚部111。

[0105] 支承板120如图2所示，是借助从床身110的上表面110A起立起设置的支柱130固定于床身110，与床身110隔开间隔平行地对置配置的板构件。例如，支承板120是平面矩形的钢制板。例如，在支承板120的平面中央部以在厚度方向上贯通支承板120的方式设有用于拆装自如地保持注射器组装体10A的保持孔121。保持孔121包括：在支承板120的上表面120A侧开口的保持凹部121A；以及在支承板120的下表面120B侧开口并且比保持凹部121A小径的小径孔部121B。小径孔部121B与保持凹部121A的下方相连。

[0106] 如图2所示，在支承板120的上表面120A立起设置有一对棒状的引导杆150。引导杆150是使锤160从规定高度下落时，用于引导锤160的下落方向的杆构件。在锤160处以横跨上表面160A至下表面160B的方式贯通形成有用于使一对引导杆150插通的一对插通孔(未图示)。通过使引导杆150插通至各插通孔，能使锤160沿着引导杆150下落。需要说明的是，在本实施方式中，引导杆150在与支承板120的上表面120A垂直的方向上立起设置。

[0107] 需要说明的是，在本说明书中，使锤160从规定高度下落是指，使锤160在大气中，不赋予初速度从规定高度向铅垂下方下落。

[0108] 此外，在支承板120的上表面120A如图2所示立起设置有框架140。框架140是具有背面框架141和连结背面框架141的两侧边缘的一对侧面框架142，横截面具有大致C形的框架构件。在图2所示的例子中，在被框架140包围的内侧的空间配置有引导杆150。在背面框架141处设有多个用于供销(未图示)拆装自如地插入的插入孔143，所述销用于将锤160定位于规定的高度。例如，插入孔143在背面框架141的高度方向上按一定间隔(例如，10mm间隔)形成。销能选择性地插入至任意的插入孔143。将销从背面框架141的背面侧插入至期望的插入孔143，并且将所述销插入至在锤160的背面形成的固定用孔，由此能在定位于期望的高度的状态下固定锤160。此外，通过从该状态拔出销，锤160的固定解除，其结果是，能使锤160沿着引导杆150向下方下落。需要说明的是，在本实施方式中，可以准备重量不同的多种(例如，30g、40g、50g、300g等)锤160。

[0109] 接着，对能保持于支承板120的保持孔121的注射器组装体10A进行说明。图3是表示应用于落锤试验器100的注射器组装体10A的概略构成的图。注射器组装体10A具有：注射筒部3、柱塞4、活塞5、注射器主体6、支架11等。注射器主体6例如具有大致圆筒形，在轴向上形成有贯通孔。在注射器主体6的贯通孔中，活塞5和柱塞4沿着所述贯通孔可移动地配置。

[0110] 支架11是安装于注射器主体6的顶端侧，在其内侧保持注射筒部3的构件。注射筒部3中，柱塞4沿着在该注射筒部3的轴向上延伸的内壁面滑动自如地配置，由注射筒部3的内壁面和柱塞4划定出容纳部32。此外，注射筒部3具有在顶端侧形成有射出口31a的喷嘴部31。在图3所示的例子中，柱塞4的顶端侧的轮廓成为与喷嘴部31的内壁面的轮廓大致一致的形状。与图1中说明的注射器组装体10同样，容纳部32中能容纳一种以上多个细胞和一种以上化学细胞融合剂。需要说明的是，支架11和注射筒部3相对于注射器主体6拆装自如。

[0111] 在支架11的顶端侧能拆装自如地安装顶盖41。在将顶盖41安装于支架11的状态下，喷嘴部31的射出口31a被顶盖41的封闭部43封闭，其结果是，成为注射筒部3内的容纳部32被密封的状态。需要说明的是，如图3所示，注射筒部3中的喷嘴部31具有与射出口31a和容纳部32连通的流路，所述流路的流路截面积从容纳部32侧朝向射出口31a侧逐渐减少。

[0112] 活塞5例如是金属制，构成为在形成于注射器主体6的内部的贯通孔中可滑动。活塞5的顶端部与柱塞4的后端部连结。此外，在活塞5的后端部形成有锤承接部51。活塞5的锤承接部51以穿过注射器主体6的贯通孔从注射器主体6的后端突出的方式向外部露出。在注射器主体6的外周面61形成有圆形凸缘状的凸缘62。注射器主体6的外周面61的外周面61的外径小于支承板120的小径孔部121B。此外，注射器主体6的凸缘62比支承板120的保持凹部121A稍微小径，比小径孔部121B大径。支承板120的保持凹部121A形成为用于支承注射器主体6的凸缘62的凹部。如上所述地构成的落锤试验器100所含的注射器组装体10A不具备包括点火器71的驱动部7，在这一方面与图1中说明的注射器组装体10不同。

[0113] 接着，对包括注射器组装体10A的落锤试验器100的动作内容进行说明。在将注射器组装体10A设置于支承板120之前，在注射器组装体10A的容纳部32中容纳期望的一种以上多个细胞和期望的一种以上化学细胞融合剂。这些被容纳溶液向容纳部32的容纳可以按与使用上述的注射器1的情况同样的顺序进行。即，在从注射器主体6卸下注射筒部3的状态下，并且在从支架11卸下顶盖41的状态下，例如，从注射筒部3的上部开放端侧(位于与射出口的轴向相反一侧的开放端)将上述的被容纳溶液(一种以上多个细胞和一种以上化学细胞融合剂)注入至注射筒部3内，以它们不从注射筒部3的上部开放端且从喷嘴漏出的方式，从上述上部开放端侧向注射筒部3内稍微插入柱塞4。然后，以射出口31a朝上的方式变更注射筒部3的姿势，沿着在注射筒部3的轴向上延伸的内壁面使柱塞4滑动，将容纳部32内的气体经由喷嘴部31从射出口31a向容纳部32外排出。由此，能将期望的所述一种以上多个细胞和期望的所述一种以上化学细胞融合剂容纳于容纳部32内。

[0114] 接着，通过将顶盖41安装于注射器组装体10A的支架11，封闭喷嘴部31的射出口31a来密封容纳部32。如此，将密封了容纳部32的注射器组装体10A如图2所示地设置于支承板120。即，在使注射器组装体10的顶盖41成为下方的状态下，将注射器组装体10A插入至支承板120的保持孔121，将注射器主体6的凸缘62嵌入至保持凹部121A，由此注射器组装体
10A向支承板120的设置完成。此时，如图2所示，在顶盖41与床身110的上表面110A之间形成有微小的间隙。即，注射器组装体10A在从床身110分离的状态下被支承固定于支承板120。

[0115] 落锤试验器100利用使从规定的高度下落的锤160与注射器组装体10A中的活塞5的锤承接部51碰撞时的能量，对容纳于容纳部32的被容纳溶液进行加压。锤160使用设于框架140的期望的插入孔143和销设置于规定的高度。在对容纳于注射器组装体10A的容纳部32的被容纳溶液进行加压时，将固定锤160的销从插入孔143拔出。其结果是，锤160沿着引导杆150向下方下落。其中，以床身110成为水平的姿势的方式预先进行了调整，由此引导杆
150成为沿着铅垂方向延伸的状态，其结果是，锤160向铅垂下方下落。在锤160的下方定位有活塞5的锤承接部51，因此从规定高度下落的锤160与活塞5的锤承接部51碰撞。如此，对活塞5赋予锤160的碰撞能，其结果是，活塞5沿着注射器主体6的贯通孔的内壁面朝向顶端侧滑动。由此，与活塞5连结的柱塞4也沿着注射筒部3的内壁面滑动，所述柱塞4朝向喷嘴部
31被压入。由此，容纳部32的容积减少，容纳于容纳部32的溶液被急剧地加压，其结果是，适当地进行细胞融合。在落锤试验器100中，“加压部”包括注射器组装体10A的柱塞4和活塞5而构成。

[0116] 如此，如上所述地生成融合细胞后，例如，拆除锤160并且从支承板120卸下注射器组装体10A。然后，卸下注射器组装体10A的顶盖41，从注射器主体6卸下插入有柱塞4的注射筒部3。进而，可以将容纳于拔掉了柱塞4的注射筒部3的容纳部32的、包含融合细胞的内容物例如用移液管等取出，回收至适当的容器。

[0117] 从加压开始至所述容纳部内的压力达到最大压力为止的时间可以通过增加锤的重量来延长，使锤下落时的高度没有影响。因此，所述时间例如可以如下所述地适当设定：作为预备试验，准备各种重量的锤，使它们下落，确定锤的重量与所述时间的关系。此外，所述时间也可以通过在活塞上放置缓冲件(例如，海绵橡胶等)来延长。因此，可以在与上述同样地进行了预备试验的基础上适当设定。

[0118] 此外，所述最大压力可以通过增大载荷(锤的重量×使锤下落时的高度)来增大。因此，所述最大压力例如可以如下所述地适当设定，：作为预备试验，准备各种重量的锤，使其从各种高度下落，确定锤的重量、下落时的高度以及与所述最大压力的关系。

[0119] 如上所述，从加压开始至所述容纳部内的压力达到最大压力为止的时间和该最大压力可以独立地适当设定。

[0120] 实施例

[0121] 虽然以下记载了实施例，但所有实施例均不是可以解释为限定性含义的实施例。

[0122] <容纳部的内压的计测方法>

[0123] 在实施例1～4中，将图1所记载的注入器用作细胞融合装置，在该注入器的容纳部内进行小鼠脾脏细胞与NS‑1细胞的融合。

[0124] 从加压开始至压力达到最大压力为止的时间和该最大压力的测定如下所述地进行。按照日本特开2005‑21640号公报中记载的测定方法，通过下述方法进行测定：将射出的力分散地施加于配置于喷嘴的下游的测力传感器的隔膜(diaphragm)，经由检测放大器，由数据采集装置采集来自测力传感器的输出，存储为按照时间的射出力(N)。将如此测定出的射出力除以注入器的射出口31a的面积，由此计算出射出压力。需要说明的是，容纳部的容积为100μL，用Milli‑Q水(Millipore公司)填充容纳部内，抽出空气进行了测定。

[0125] 确认到如上所述地测定出的射出压力与利用国际公开2020/116353号中记载的测定方法得到的容纳部的内压几乎相同。此外，即使在将容纳部内的Milli‑Q水置换为后述的实施例中使用的溶液的情况下，也不对从加压开始至压力达到最大压力为止的时间和该最大压力造成影响。

[0126] 在实施例5～8中，将图2所示的落锤试验器用作细胞融合装置。从加压开始至压力达到最大压力为止的时间和该最大压力的测定使用测力传感器与上述同样地进行。

[0127] <细胞的混合方法>

[0128] (小鼠脾脏细胞的制备)

[0129] 小鼠脾脏细胞从BALB/c小鼠(雌性，6～8周龄等)中回收。即，使小鼠安乐死后，采集脾脏，利用PBS(nacalai tesque)进行清洗。利用70μm细胞过滤器(FALCON)对经均化的脾脏细胞进行了过滤后，回收至15mL离心管(VIOLAMO)中，为了溶解红血球，加入脏器重量的1.5倍量的ACK裂解液(ACK Lysing Buffer)(GIBCO)，在常温下静置5分钟。为了进行清洗，加入45mL的PBS，进行离心分离(700×g，5分钟)，去掉上清液。向利用PBS调整为1×
8
10 cell/mL而得到的细胞悬浮液每1mL中，添加Brilliant Violet 421抗小鼠CD45抗体(Brilliant Violet421anti‑mouse CD45 Antibody)(30‑F11，BIO LEGEND)20μL，在4℃下进行由抗体实现的荧光染色15分钟。利用染色溶液的10倍量的PBS对细胞进行两次清洗后，
7
利用PBS调整为3×10cell/mL。

[0130] (NS‑1细胞的制备)

[0131] NS‑1细胞(购自JCRB cell bank，细胞注册编号JCRB9107)通过使预先通过传代而6
冻存的细胞保存物(cell stock)溶解而得到。利用PBS调整为1×10 cell/mL，添加DIR(5mg/mL in DMSO，invitrogen公司)5μL/mL，在CO2培养箱(37℃，95％CO2)内进行荧光染色
7
10分钟。利用染色溶液5倍量的PBS对细胞进行三次清洗后，利用PBS调整为1×10cell/mL。

[0132] (细胞的混合)

[0133] 将染色的小鼠脾脏细胞与NS‑1细胞按3∶1的比例混合。即，利用微量移液管将小鼠脾脏细胞和NS‑1细胞各100μL移取至相同的1.5mL管中，进行离心分离(700×g，5分钟)。尽6
可能去掉上清液，得到包含按细胞总数计为4×10 个的颗粒，轻敲1.5mL的管使颗粒松散，混合细胞，得到了细胞混合液。

[0134] <细胞融合率的测定方法>

[0135] 就作为“融合细胞的个数”的Y个而言，对通过细胞融合而得到的融合细胞液，在流式细胞仪(BECKMAN公司)中使用PB450和APCA750的滤光片，流动5000个细胞，将感测到这两方荧光的细胞作为融合细胞。

[0136] 即，作为所有细胞块的个数和不是细胞块而如通常培养时那样作为单一细胞存在的细胞的个数的合计的X个设为5000个，将融合细胞的个数设为Y个，以Y与5000个的比例(即，Y/5000)表示。

[0137] <细胞生存率的测定方法>

[0138] 将融合细胞液播种于六孔板(VIOLAMO)，在CO2培养箱(37℃，95％CO2)中培养24小时。利用台盼蓝(nacalai tesque)将细胞的一部分染色，利用TC20全自动细胞计数器(Bio‑Rad)对被染色的细胞和未被染色的细胞的数量进行测定，计算出细胞生存率。细胞生存率设为测定出的活细胞数量与所有细胞数量的比例。

[0139] 〔实施例1〕

[0140] 对按照所述“细胞的混合方法”得到的颗粒进行以下操作。在颗粒时放置移液管的顶端，缓慢地同时进行以轻轻放置的方式排出100μL的PEG1500(数均分子量为1500的聚乙二醇，Roche)的操作以及用移液管的顶端画圆的操作，由此将颗粒和PEG1500混合后，缓慢地进行了6‑7次吹打(pipetting)。从注射筒部的上部开放端侧填充该细胞混合液，以它们不从注射筒部的上部开放端且从喷嘴漏出的方式从所述上部开放端侧向注射筒部内稍微插入柱塞，以射出口朝上的方式变更注射筒部的姿势，沿着在注射筒部的轴向上延伸的内壁面使柱塞滑动，经由喷嘴部从射出口将容纳部内的空气向容纳部外排出。其中，该注入器是用作细胞融合装置，图1所记载的注入器。在本实施例中，该注入器设置于ZPP为15mg的条件下，通过在容纳部的喷嘴侧牢固地装接顶盖而使容纳部内成为密封状态下进行点火操作。由此，小鼠脾脏细胞与NS‑1细胞融合。在该条件下，从加压开始至达到最大压力为止的时间为0.31毫秒，该最大压力为2.51MPa。然后，从外壳卸下注射器组装体，从注射筒部卸下顶盖，卸下插入有柱塞的注射筒部，进而从其中卸下柱塞，利用PIPETMAN移液器抽吸其内容物。与预先加温至37℃的RPMI1640(nacalai tesque)1mL一并在1.5mL管内缓慢地进行吹打混合，进行离心分离(500×g，10分钟)，对细胞进行清洗。去除上清液后，利用PBS使细胞悬浮，得到了融合细胞液。

[0141] 然后，分别测定出细胞融合率和细胞生存率。

[0142] 〔实施例2～4〕

[0143] 变更作为火药的ZPP的量，除此以外，与实施例1同样地进行。

[0144] 〔实施例5〕

[0145] 对按照所述“细胞的混合方法”得到的颗粒进行以下操作。在颗粒时放置移液管的顶端，缓慢地同时进行以轻轻放置的方式排出100μL的PEG1500(数均分子量为1500的聚乙二醇，Roche)的操作以及用移液管的顶端画圆的操作，由此将颗粒和PEG1500混合后，缓慢地进行了6‑7次吹打。从注射筒部的上部开放端侧填充该细胞混合液，以它们不从注射筒部的上部开放端且从喷嘴漏出的方式从所述上部开放端侧向注射筒部内稍微插入柱塞，以射出口朝上的方式变更注射筒部的姿势，沿着在注射筒部的轴向上延伸的内壁面使柱塞滑动，经由喷嘴部从射出口将容纳部内的空气向容纳部外排出。接着，使用图2所示的落锤试验器对容纳部内进行加压。在本实施例中，设置于使50g的锤从高度30mm的位置下落的条件下，通过在容纳部的喷嘴侧牢固地装接顶盖而使容纳部内成为密封状态下使锤下落。由此，小鼠脾脏细胞与NS‑1细胞融合。在该条件下，从加压开始至达到最大压力为止的时间为0.64毫秒，该最大压力为1.75MPa。然后，从落锤试验器卸下注射器组装体，从注射筒部卸下顶盖，卸下插入有柱塞的注射筒部，进而从其中卸下柱塞，利用PIPETMAN移液器抽吸其内容物。与预先加温至37℃的RPMI1640(nacalai tesque)1mL一并在1.5mL管内缓慢地进行吹打混合，进行离心分离(500×g，10分钟)，对细胞进行清洗。去除上清液后，利用PBS使细胞悬浮，得到了融合细胞液。

[0146] 然后，测定出细胞融合率。

[0147] 〔实施例6〕

[0148] 使300g的锤从高度20mm的位置下落，在活塞上放置EPDM海绵橡胶(和气产业EPT‑01S)，除此以外，与实施例5同样地进行。需要说明的是，在活塞上放置EPDM海绵橡胶(和气产业EPT‑01S)是为了延长从加压开始至容纳部内的压力达到最大压力为止的时间。

[0149] 〔实施例7〕

[0150] 使300g的锤从高度10mm的位置下落，除此以外，与实施例5同样地进行。

[0151] 〔实施例8〕

[0152] 使50g的锤从高度70mm的位置下落，除此以外，与实施例5同样地进行。

[0153] 〔比较例1〕

[0154] 将作为以往方法的PEG法设为比较例1。对按照所述“细胞的混合方法”得到的颗粒进行以下操作。在颗粒时放置移液管的顶端，缓慢地同时进行以轻轻放置的方式排出100μL的PEG1500(数均分子量为1500的聚乙二醇，Roche)的操作以及用移液管的顶端画圆的操作，由此将颗粒和PEG1500混合后，浸于37℃的水浴槽，缓慢地振荡90秒。缓慢地添加预先加温至37℃的100μL的RPMI1640，轻轻摇晃管，将液体混合。进而以阶段性地增量为300μL、1000μL的方式加入RPMI1640(均缓慢地添加)，轻轻摇晃管，将液体混合。在CO2培养箱(37℃，95％CO2)中反应10分钟后，进行离心分离(500×g，10分钟)，去除上清液，利用PBS使细胞悬浮，得到了融合细胞液。

[0155] 然后，分别测定出细胞融合率和细胞生存率。

[0156] 将结果示于表1、表2。能确认到利用所述细胞融合方法和细胞融合装置发生细胞融合。此外，能确认到细胞融合率比作为以往方法的PEG法的情况高。

[0157] [表1]

[0158]

[0159] [表2]

[0160]

[0161]

[0162] 附图标记说明

[0163] 1：注射器；

[0164] 2：外壳；

[0165] 3：注射筒部；

[0166] 4：柱塞；

[0167] 5：活塞；

[0168] 6：注射器主体；

[0169] 7：驱动部；

[0170] 8：按钮；

[0171] 9：电池；

[0172] 10：注射器组装体；

[0173] 31：喷嘴部；

[0174] 31a：射出口；

[0175] 32：容纳部；

[0176] 41：顶盖；

[0177] 42：固定部；

[0178] 43：封闭部；

[0179] 71：点火器；

[0180] 10A：注射器组装体；

[0181] 11：支架；

[0182] 51：锤承接部；

[0183] 61：注射器主体的外周面；

[0184] 62：凸缘；

[0185] 100：落锤试验器；

[0186] 110：床身；

[0187] 110A：床身的上表面；

[0188] 111：脚部；

[0189] 120：支承板；

[0190] 120A：支承板的上表面；

[0191] 120B：支承板的下表面；

[0192] 121：保持孔；

[0193] 121A：保持凹部；

[0194] 121B：小径孔部；

[0195] 130：支柱；

[0196] 140：框架；

[0197] 141：背面框架；

[0198] 142：侧面框架；

[0199] 143：插入孔；

[0200] 150：引导杆；

[0201] 160：锤；

[0202] 160A：锤的上表面；

[0203] 160B：锤的下表面。