技术领域
[0001] 本发明涉及纳米凝胶材料领域，尤其涉及一种具有生物活性的纳米微球的制备方法。
相关背景技术
[0002] 海藻酸钠是褐藻中提取的一种天然聚阴离子多糖海藻酸的钠盐，是由M单元(甘露糖醛酸)和G单元(古洛糖醛酸)以1,4一糖苷键的形式连接，并由一定比例的MM、GM、GG片段构成的无规嵌段共聚物。聚古罗糖醛酸是褐藻胶的低聚产物，具有激活巨噬细胞的作用，配合聚古罗糖醛酸，在钙离子和交联剂的作用下制备肿瘤靶向的纳米球，不仅可以载化疗药物，基质本身在肿瘤部位分解成低聚古罗糖醛酸也有激活肿瘤微环境免疫系统的功能。
[0003] 因为海藻酸钠骨架链上存在大量的羧基，该羧基极易与二价的阳离子发生离子间的相互作用，因此可通过加入二价阳离子形成乳白色的水凝胶。Ca2+易与枸橼酸、磷酸、乳酸、EDC等螯合而从凝胶网络脱离，或在高浓度的Na+或M92+溶液中与周围离子发生交换而使2+
凝胶的网络结构解体，导致此类凝胶的性能不稳定。所以，Ca 引导交联的水凝胶在生理介质中易于逐渐溶解而失去凝胶特性。要解决Ca2+引导交联水凝胶存在的问题，除了可采用化学交联法制备外，还可以应用聚阳离子电解质与海藻酸钠作用形成强电解质的结构来解决。
[0004] 中国专利局于2013年2月6日公开了一种原位交联海藻酸钠水凝胶及其制备方法的发明专利授权，授权公开号为CN102408496B，其采用活化海藻酸钠后配合含氨基的有机物形成酰胺键，进而在氧化条件下进行自交联的方式对水凝胶进行制备。但是，该方案制备凝胶需要模具配合，无法直接实现纳米微球的制备。
具体实施方式
[0022] 以下结合具体实施例对本发明作出进一步清楚详细的描述说明。本领域普通技术人员在基于这些说明的情况下将能够实现本发明。此外，下述说明中涉及到的本发明的实施例通常仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。因此，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
[0023] 如无特殊说明，本发明实施例所用原料均为市售或本领域技术人员可获得的原料；如无特殊说明，本发明实施例所用方法均为本领域技术人员所掌握的方法。
[0024] 实施例1一种具有生物活性的纳米微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
将摩尔比为1：0.1的海藻酸钠和聚古罗糖醛酸溶于去离子水，加入活化剂进行活化得到活化液，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：1.75，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：1的比例组成，活化液中海藻酸钠浓度为6wt％，将活化液与1.0wt％氯化钙溶液以体积比1：2.5的比例混合，再加入氨基巯醇，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：
1，置于空气气氛中进行自交联，即得到具有生物活性的纳米微球。
[0025] 实施例2一种具有生物活性的纳米微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
将摩尔比为1：0.15的海藻酸钠和聚古罗糖醛酸溶于去离子水，加入活化剂进行活化得到活化液，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：1，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：1.5的比例组成，活化液中海藻酸钠浓度为5wt％，将活化液与1.0wt％氯化钙溶液以体积比1：2的比例混合，再加入氨基巯醇，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：1，置于空气气氛中进行自交联，即得到具有生物活性的纳米微球。
[0026] 实施例3一种具有生物活性的纳米微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
将摩尔比为1：0.15的海藻酸钠和聚古罗糖醛酸溶于去离子水，加入活化剂进行活化得到活化液，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：1.5，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：1.5的比例组成，活化液中海藻酸钠浓度为5wt％，将活化液与1.0wt％氯化钙溶液以体积比1：2.5的比例混合，再加入氨基巯醇，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：
1，置于空气气氛中进行自交联，即得到具有生物活性的纳米微球。
[0027] 实施例4一种具有生物活性的纳米微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
将摩尔比为1：0.05的海藻酸钠和聚古罗糖醛酸溶于去离子水，加入活化剂进行活化得到活化液，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：0.8，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：0.5的比例组成，活化液中海藻酸钠浓度为2wt％，将活化液与0.5wt％氯化钙溶液以体积比1：3的比例混合，再加入氨基巯醇，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：
0.8，置于空气气氛中进行自交联，即得到具有生物活性的纳米微球。
[0028] 实施例5一种具有生物活性的纳米微球的制备方法，所述方法包括以下步骤：
将摩尔比为1：0.2的海藻酸钠和聚古罗糖醛酸溶于去离子水，加入活化剂进行活化得到活化液，海藻酸钠与活化剂的摩尔比为1：2.2，活化剂由碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺以摩尔比为1：2的比例组成，活化液中海藻酸钠浓度为8wt％，将活化液与1.0wt％氯化钙溶液以体积比1：2的比例混合，再加入氨基巯醇，海藻酸钠与氨基巯醇的摩尔比为1：1.1，置于空气气氛中进行自交联，即得到具有生物活性的纳米微球。
[0029] 实施例6具体制备步骤与实施例1相同，所不同的是：将溶剂由去离子水替换为20wt％牛血清白蛋白溶液作为模拟药液。
[0030] 对本实施例所得具有生物活性的纳米微球的载药量和包封率进行检测，经检测本实施例所得具有生物活性的纳米微球载药量约为19.67wt％、包封率为86.21％。
[0031] 实施例7具体制备步骤与实施例1相同，所不同的是：将溶剂由去离子水替换为20wt％牛血清白蛋白溶液作为模拟药液。
[0032] 对本实施例所得具有生物活性的纳米微球的载药量和包封率进行检测，经检测本实施例所得具有生物活性的纳米微球载药量约为19.89wt％、包封率为86.33％。
[0033] 实施例8具体制备步骤与实施例1相同，所不同的是：将溶剂由去离子水替换为20wt％牛血清白蛋白溶液作为模拟药液。
[0034] 对本实施例所得具有生物活性的纳米微球的载药量和包封率进行检测，经检测本实施例所得具有生物活性的纳米微球载药量约为19.72wt％、包封率为85.98％。
