技术领域
[0001] 本发明涉及一株乳酸菌HWN19菌株及其应用，具体涉及一株具有降低FODMAPs的植物乳酸菌以及应用，属于微生物技术领域。
相关背景技术
[0002] FODMAPs是（Fermentable 发酵、Oligosaccharides 低聚糖、Disaccharides 二糖、Monosaccharides 单糖、Polyols 多元醇）的简称。食品中FODMAPs成分可以避免小肠的吸收作用，从而对小肠内菌群结构造成影响，引起不良的肠道症状现象，其中主要包括以下两种，分别是IBS（肠易激综合征）和IBD（炎性肠病）两种主要与肠道有关的疾病。
[0003] IBS属于无害性疾病，主要可分为以下几种：腹泻IBS-D（渗透活性代谢物以及大量气体），便秘IBS-C（渗透压力导致结肠吸水从而导致便秘）或两者混合IBS-M。IBS尽管属于无害性疾病且没有明显证据证明会影响患者的预期寿命，但是会显著影响患者的生活质量水平。
[0004] 小麦、大麦、黑麦等谷物由于其中含有较多的低聚果糖，因此成为典型的高FODMAPs食品，而富含半乳聚糖的大豆等豆类也是一类重要的高FODMAPs食品。在单糖类体系中，含有高果糖（即果糖含量大于葡萄糖）食品亦属于高FODMAPs食品，同样会引发IBS等肠道疾病，但是当食品中含有大量葡萄糖时，葡萄糖可以使得果糖更有效地吸收，因此不属于高FODMAPs食品体系。
[0005] 高FODMAPs食品对肠道疾病的影响的原因主要是以下三个特点：一、FODMAPs在小肠中吸收不良；二、FODMAPs分子量较小，其高渗透活性使得肠道菌群失衡；三、FODMAPs可迅速被肠道内的细菌迅速发酵。
[0006] 在以普通小麦粉为基质的传统面包中富含FODMAPs，其中包括游离果糖、山梨糖醇、甘露醇以及酸面团中的棉子糖等FODMAPs。但是多少的含量可被成为高FODMAPs含量的食品目前还没有一个明确的数值，原因在于引发IBS的阈值会随着个体改变而改变，在任何一餐中摄入的FODMAPs总量是决定是否诱发症状的主要因素。鉴于高FODMAPs食品对部分IBS患者带来的困扰，针对高FODMAPs食品寻找一种绿色健康的处理方式的必要性则是非常明显。
[0007] 乳酸菌是一种可以将碳水化合物发酵并生成乳酸细菌的总称，广泛存在于水果蔬菜等植物中、发酵植物食品，如泡菜、酸菜、青贮饲料以及人肠道中和发酵乳制品等。多年科学研究结果表明，乳酸菌是人体必不可少的且具有重要生理功能的益生菌，其主要生理功能可防治乳糖不耐症、恢复人体肠道内菌群平衡维护人体健康、保护肝脏并增强肝脏的解毒等功能。
[0008] 因此筛选出一株可利用降解低聚果糖的乳酸菌，并且证明其可以降低高FODMAPs食品中的FODMAPs的含量，同时研制这些乳酸菌实际的用途就显得十分必要。本发明试图进一步地挖掘该乳酸菌的作用，开发具有减轻IBS患者发生症状可能性的食品，为这些IBS患者提供更多可供选择的食品和解决方案。
具体实施方式
[0083] 实施例1（1）植物乳杆菌HWN19菌剂的制备：
所述植物乳杆菌HWN19原始菌种在温度-75℃下以30%重量百分数的甘油悬液形式保存，或者在温度 4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用。
[0084] 本发明植物乳杆菌HWN19培养方法与培养条件：在MRS培养基中在兼性厌氧条件与温度 37℃的条件下培养18-36h即可使用。
[0085] 将含有所述植物乳杆菌HWN19的菌液通过常规冷冻干燥工艺制备或其它方法制备所得到的粉剂，它含有106 CFU/g以上的活性植物乳杆菌HWN19。
[0086] （2）药物组合物的制备：将步骤（1）制备所得植物乳杆菌HWN19菌剂以30%的比例与药学上可接受的载体进行复配，制得药物组合物。
[0087] 其中药学上可接受的载体具体为填充剂淀粉比例为50%，润湿剂乙醇比例为2.0%，粘合剂聚乙烯吡络烷酮4.0%，崩解剂羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素比例为10.0%，润滑剂滑石粉为2.0%，矫味剂蔗糖、橙皮糖浆为2.0%。
[0088] 实施例2HWN19菌剂发酵剂的制备方法如下：
A、培养基的制备：使用以所述培养基总重量计87.7%水，将10%酶水解脱脂乳、0.5%果糖、1.5% 胰蛋白胨与 0.3% 酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，这样得到所述的培养基；
B、保护剂的制备：使用水与保护剂原料制备得到含有100g/L脱脂奶粉、30mL/L甘油、
100g/L 麦芽糊精、150g/L 海藻糖、10g/L L-谷氨酸钠的保护剂；
C、植物乳杆菌HWN19按照以所述培养基的重量计2-4%接种量接种到在温度110-120℃下灭菌8-12min的所述培养基中，然后在温度37℃下培养18 h，用 pH 7.2磷酸盐缓冲液清洗2-4 次，用所述保护剂重悬达到浓度1010 CFU/mL，接着，让该悬浮液在温度 37℃下预培养60min，再采用冻干法制成所述的发酵剂。
[0089] 谷物基质食品的制备：谷物基质食品面包分为以下两步：1、小麦酸面团的制作：将发酵剂放入等量的小麦粉和水中进行搅拌，放入30℃的环境下，培养24h。
[0090] 2、面包面团制作：配方如下：高筋小麦粉（80g）、小麦酸面团（20g）、 水（55g）、酵母（1.5g）、盐（1g）、白砂糖（6.5g）、黄油（4g）；80%高筋粉和20%的小麦酸面团混合。根据上述配方，将除黄油外的所有原料加入搅拌机搅拌成团，然后加入黄油，慢搅1.5 min，快搅2.3 min。取出面团，室温下覆膜静置10 min，分割成型（90 g/个），然后在醒发箱（34℃，相对湿度85%）内醒发60 min 后，放入烤箱（上火 170℃，下火210℃）烘烤20 min得到面包成品。
[0091] 应用实施例1：比较植物乳杆菌HWN19在含有果糖FYP培养基和含有葡萄糖的GYP培养基上的生长情况实验在无菌的条件下，将本发明植物乳杆菌HWN19进行活化培养，在其进入稳定期的乳杆菌HWN19接种在FYP培养基上，接种于19mL的含有果糖的FYP培养基中，在温度 37℃下培养
24h。
[0092] FYP培养基由1％D-果糖，0.5％多聚蛋白胨，0.2％乙酸钠，1％酵母提取物，0.05％吐温80，0.02％七水合硫酸镁，0.001％七水合硫酸铁，0.001％四水合硫酸锰，0.001％氯化钠组成。
[0093] 在无菌的条件下，将本发明植物乳杆菌HWN19进行活化培养，在其进入稳定期的乳杆菌HWN19接种在GYP培养基上，接种于19mL的含有果糖GYP培养基中，在温度37℃下培养 24h。
[0094] GYP培养基由1％D-葡萄糖，0.5％多聚蛋白胨，0.2％乙酸钠，1％酵母提取物，0.05％吐温80，0.02％七水合硫酸镁，0.001％七水合硫酸铁，0.001％四水合硫酸锰，
0.001％氯化钠组成。将在温度37℃下培养24h，再经MRS培养液传代培养2次后，取1mL植物乳杆菌HWN19培养液，分别接种于19mL相同pH值MRS液体培养基中，在温度37℃下培养24h。
[0095] 比较植物乳杆菌HWN19的在两种培养基中的生长情况，生长情况根据测定初始和培养结束后的OD620值，利用这个值测量在细菌培养液中的细胞浓度，从而估计细菌的生长情况。OD620值是采用分光光度法在波长620 nm处测定的细菌培养液的吸光值，它通常用于表示在细菌培养液中细胞浓度，以确定液体培养物中细菌的生长情况。
[0096] 结果表明，植物乳杆菌HWN19在两种不同的培养基环境下均能较好生长，在FYP培养基上OD620值增加的速度较快，在8小时后进入对数期，而在GYP培养基上则需要经过12小时候进入对数期，说明植物乳杆菌HWN19在含有果糖的培养基中生长较好。
[0097] 应用实施例2：比较植物乳杆菌HWN19对发酵小麦酸面团中的FODMAPs成分含量的影响在无菌的条件下，将本发明植物乳杆菌HWN19进行活化培养，在其进入稳定期的乳杆菌HWN19对小麦面团进行酸化处理。高效液相色谱结果表明，同时大豆酸面团中的甘露醇含量出现明显下降。
[0098] 应用实施例3：比较植物乳杆菌HWN19对发酵大豆酸面团中的FODMAPs成分含量的影响在无菌的条件下，将本发明植物乳杆菌HWN19进行活化培养，在其进入稳定期的乳杆菌HWN19对大豆面团进行酸化处理。高效液相色谱结果表明，同时其中的大豆酸面团中棉子糖含量出现明显下降。
[0099] 应用实施例4：比较植物乳杆菌HWN19对发酵全麦酸面团中的FODMAPs成分含量的影响在无菌的条件下，将本发明植物乳杆菌HWN19进行活化培养，在其进入稳定期的乳杆菌HWN19对全麦面团进行酸化处理，酸面团pH在18 h后趋于稳定，pH为3.8-4.0。高效液相色谱结果表明，低聚果糖含量和果糖含量出现明显下降。
