技术领域
[0001] 本发明涉及药物提取领域，特别涉及药材的提取工艺。
相关背景技术
[0002] 药材提取，是中药生产过程重要的单元操作，其工艺方法、工艺流程的选择和设备配置都将直接关系到中药的质量和临床效果。传统提取方法包括煎煮法、浸渍法、渗漉法、改良明胶法、回流法、溶剂提取法、水蒸气蒸馏法和升华法等。其中煎煮法是最常用的方法，最常用的溶剂是水和乙醇。
[0003] 煎煮法常见、成本较低，操作方便，是目前最广谱的一种提取方式，但无法保存具有生理活性的热敏成分，易损失挥发物质。
[0004] 近年来，应用于中药提取分离还发展了新技术，有：超临界流体萃取法、膜分离技术、超微粉碎技术、中药絮凝分离技术、半仿生提取法、超声提取法、旋流提取法、加压逆流提取法、酶法、大孔树脂吸附法、超滤法、分子蒸馏法等。这些方法对提取相对传统方法，可以提高提取效率，保存活性成分，产品质量高，但具有成本高、周期长的缺陷。
具体实施方式
[0032] 本发明公开了一种药材的提取工艺，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0033] 本发明提供了一种新的、可以保存热敏性物质的、较简单、成本较低的提取工艺，尤其可以保存具有生理活性的热敏成分，并可以对药材全成分提取的工艺。为此，本申请人锐意创新，进行了大量深入的研究和实验工作，通过对工艺全程的温度控制，得到一种提取率高、工艺路线简单、保存生理活性热敏成分的低温提取方式，完成了本发明。
[0034] 对本发明进行详细阐述。
[0035] 一种药材的提取工艺，包含以下步骤：
[0036] A、药材清洗、去泥沙；
[0037] B、低温冷冻；
[0038] C、使用粉碎设备，对速冻后的鲜药材进行粗粉和/或细粉，过筛；
[0039] D、将冷水加入搅拌机，与粉碎后的鲜药材进行匀浆，得到匀浆液；
[0040] E、匀浆液进行超声浸提；
[0041] F、超声后的匀浆液挤压过滤，滤液离心，留上清液；
[0042] G、上清液进行真空冷冻干燥，得到鲜提物。
[0043] 所述药材可以为鲜药材或干药材，优选鲜药材；可以来源于动物和植物中的一种或多种组合。
[0044] 其中动物药材，优选但不限于鹿茸、鹿胎、海参、海参花、燕窝、牡蛎、林蛙油。
[0045] 其中植物药材，优选但不限于新鲜的人参、三七、西洋参、党参、铁皮石斛、东革阿里、玛咖、西红花、辣木籽、天麻、黑枸杞、枸杞、藿香、马鞭才、车前草、姜、地黄、白芍、黄芩。
[0046] 还可以涉及到鲜果，可以是但不限于欧洲越橘、蔓越莓、巴西黑酶、葡萄、卡姆果、榄仁果。
[0047] 所述超低温冷冻，其温度低于0℃，方式可以选自冰箱冷冻、超低温冰箱冷冻、液氮和/或其他冷媒喷淋或浸入方式中的一种或多种组合。
[0048] 所述滤液离心环节，可以重复多次，并合并上清液。
[0049] 上述工艺全程对温度控制，全程温度不超过60℃，最优选-273℃～40℃。
[0050] 本发明提供的药材的提取工艺中所用原料及试剂均可由市场购得。
[0051] 本发明涉及的含义：
[0052] 提取率：指提取物总质量：原药材总质量*100％；
[0053] 对于热敏成分的保护性：评价是否检出，以及检出量差异。
[0054] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0055] 实施例1：鲜人参的提取工艺
[0056] A、鲜人参清洗、去泥沙，使用纯净水润洗三次；
[0057] B、液氮(-196℃)喷洒低温冷冻；
[0058] C、使用破骨机对冷冻后的鲜人参进行粗粉至粒径1cm以下，后将粗粉使用万能粉碎机进行细粉，过80目筛；
[0059] D、将25℃纯水1.3倍加入搅拌机，与粉碎后的鲜人参细粉进行匀浆，匀浆时间5min，得到匀浆液；
[0060] E、匀浆液进行超声(500Hz)浸提10min；
[0061] F、超声后的匀浆液挤压过滤，滤液5000转离心15min，留上清液；离心残渣再次进行匀浆、超声浸提、离心，留上清液，并合并两次离心后的上清液；
[0062] G、上清液进行真空冷冻干燥(-35℃～30℃，真空度15pa，时间16h)，得到人参鲜提物。
[0063] 上述人参鲜提物：鲜人参药材的提取率为10.98％(鲜人参1005g，产出提取物198.99g)。
[0064] 使用液质联用法检测丙二酸单酰基-人参皂苷Rb1，条件为：
[0065] 液相色谱条件：Agilent 1200高效液相色谱仪，色谱柱Chromolith FastGradient-3反相色谱柱(50×2.0mm)，梯度洗脱，流速0.2mL/min，A相为水溶液(含有2.5×10 mol/L醋酸铵以及1/200000氨水w/w)，B相为90％乙腈水溶液(含2.5×10-3mol/L醋酸铵以及1/
200000氨水w/w)。流动相梯度0-3min 90％A和10％B，7min 15％B,40min 40％B，45min
65％B。进样体积2μl；
[0066] 质谱条件：Agilent 6310离子阱质谱，电喷雾离子源，负离子模式；导入洗脱液，流速0.1mL/min。
[0067] 在鲜人参和鲜提物中，检出丙二酸单酰基-人参皂苷Rb1。
[0068] 比较例1：采用常规煎煮法对鲜人参进行提取
[0069] A、加10倍水煎煮，加热回流提取；
[0070] B、将水提液趁热抽滤，收集滤液；
[0071] C、按照上述方法进行二次提取，合并滤液，减压浓缩得人参浸膏；
[0072] D、浸膏喷干为提取物。
[0073] 上述人参提取物，提取率为6.54％(鲜人参1010g，产出提取物66.054g)。
[0074] 使用液质联用法检测检测丙二酸单酰基-人参皂苷Rb1，在鲜人参中有检出，在人参提取物中未检出。
[0075] 效果例1：
[0076] 原始数据见表1。
[0077] 表1
[0078]
[0079]
[0080] 注：*示与对比例1相比具有显著差异(P＜0.05)；#示与对比例1相比具有极显著差异(P＜0.01)。
[0081] 图谱如图1～图6所示。可见常规煎煮法，无论是水提还是醇提，都既不能保留热敏成分丙二酸单酰基-人参皂苷Rb1，其提取率也没有优势。实验组与对照组相比，提取率和有效成分的保留率均具有极显著差异(P＜0.01)。
[0082] 实施例2欧洲越橘鲜果的提取工艺
[0083] A、鲜果清洗、去泥沙，使用纯净水润洗三次；
[0084] B、超低温冰箱-40℃低温冷冻8h；
[0085] C、使用破骨机对冷冻后的鲜欧洲越橘进行粗粉至粒径3mm，后将粗粉使用万能粉碎机进行细粉，过100目筛；
[0086] D、将10℃、1倍纯水加入搅拌机，与粉碎后的鲜欧洲越橘细粉进行匀浆，得到匀浆液；
[0087] E、匀浆液进行超声(1Hz)浸提30min；
[0088] F、超声后的匀浆液挤压过滤，滤液3000转离心5min，留上清液；离心残渣再次进行匀浆、超声浸提、离心，留上清液，并合并两次离心后的上清液；
[0089] G、上清液进行真空冷冻干燥(-35℃～30℃，真空度10pa，时间15h)，得到欧洲越橘鲜提物。
[0090] 飞燕草素测试方法：
[0091] 精密称取欧洲越橘鲜果、欧洲越橘鲜提提取物及欧洲越橘煮提提取物分别为500、24、24mg(精确至0.01mg)放入烧瓶中，加入60mL 2％盐酸-甲醇溶液(m/V)，在80℃水浴中回流水解0.5小时后冷却至室温，用2％盐酸-甲醇溶液(m/V)转移完全并定容至100mL，摇匀，得试液A。然后精密吸取5mL到50mL容量瓶中，用2％盐酸-甲醇溶液(m/V)定容至刻度，摇匀，得待测试液B；溶液应澄清透明。若混浊，则用滤纸过滤，开始的滤液约10mL弃去，之后的滤液用作检测。
[0092] 以2％盐酸-甲醇溶液(m/V)作空白，在540nm吸收波长、1cm比色杯条件下测吸光度A。
[0093] 以飞燕草素的质量分数w3计，数值以％表示，按下式计算：
[0094]
[0095] 式中：
[0096] A——供试品溶液B在吸收波长540nm下的吸光度；
[0097] f——供试品溶液A至试液B的稀释倍数；
[0098] m——供试品质量，单位为克(g)；
[0099] 1020——飞燕草素的百分吸光系数，既在540nm吸收波长下，飞燕草素的溶液浓度为
[0100] 1g/100mL、比色杯厚度为1cm时，溶液的吸光度；
[0101] 1——百分吸光系数定义规定的，在100mL溶液中溶解溶质(飞燕草素)的质量，单位为克(g)。
[0102] 上述鲜提物，提取率为4.8％(300.4g鲜果，得到14.42g提取物)，工艺全程呈现鲜果的紫红色，紫外法检测飞燕草素含量为鲜果中的83.25％，说明提取工艺对功效花色苷成分没有破坏。
[0103] 对比例2
[0104] 采用常规煎煮法对鲜欧洲越橘进行提取
[0105] A、加10倍水煎煮，加热回流提取(欧洲越橘变色为棕色)；
[0106] B、将水提液趁热抽滤，收集滤液；
[0107] C、按照上述方法进行二次提取，合并滤液，减压浓缩得浸膏；
[0108] D、浸膏喷干为提取物。
[0109] 上述人参提取物，提取率为4％(301.1g鲜果，得到12.04g提取物)，工艺中呈现为棕色；
[0110] 紫外法检测飞燕草素含量为鲜果中的0.5％，说明提取工艺对功效花色苷成分被破坏。
[0111] 效果例2
[0112] 原始数据见表2。
[0113] 表2
[0114]
[0115] 注：*示与对比例2相比具有显著差异(P＜0.05)；#示与对比例2相比具有极显著差异(P＜0.01)。
[0116] 可见常规煎煮法不适合于欧洲越橘鲜果，热敏色素成分因高温而破坏。实验组与对照组相比，有效成分的保留率极显著提高(P＜0.01)，显著(P＜0.05)降低了生产成本。
[0117] 实施例3黑枸杞鲜果的提取工艺
[0118] A、鲜果清洗、去泥沙，使用纯净水润洗三次；
[0119] B、超低温冰箱-273℃低温冷冻8h；
[0120] C、使用破骨机对冷冻后的黑枸杞进行粗粉至粒径3mm，后将粗粉使用万能粉碎机进行细粉，过100目筛；
[0121] D、将10℃、10倍纯水加入搅拌机，与粉碎后的黑枸杞细粉进行匀浆，得到匀浆液；
[0122] E、匀浆液进行超声(100Hz)浸提60min；
[0123] F、超声后的匀浆液挤压过滤，滤液8000转离心30min，留上清液；离心残渣再次进行匀浆、超声浸提、离心，留上清液，并合并两次离心后的上清液；
[0124] G、上清液进行真空冷冻干燥(-35℃～30℃，真空度50pa，时间15h)，得到黑枸杞鲜提物。
[0125] 有效成分测定方法：
[0126] 取提取物0.2g溶于100ml纯水中，4000rpm离心10min，取上清液。35℃恒温真空旋蒸30min。称量浓缩液，用纯化水定容至100ml。精密量取1ml浓缩液，置于10ml容量瓶中(样液稀释10倍)，分别加入pH1.0、pH4.5的缓冲液，暗处平衡15min。
[0127] 紫外分光光度计在250～600nm范围扫描，分别测定黑果枸杞花色苷在pH 4.5和pH 1.0缓冲液中的最大吸收波长及其最大吸收波长处的吸光度值Aλmax。总花色苷含量(以矢车菊素-3-葡萄糖苷计)的计算公式：
[0128] A＝AλmaxpH1.0－AλmaxpH4.5
[0129] C＝(A×103×MW×DF)/(ε×l)
[0130] 总花色苷含量(mg/100g)＝(C×V)/M/10
[0131] 式中，Aλmax：最大吸收波长处的吸光度值；MW：矢车菊－3－葡萄糖的分子质量(449.2g/mol)；DF：待测液稀释倍数；ε：消光系数(29600L/mol·cm)；l：光路长度(cm)；C：花色苷质量浓度(mg/L)；V：待测液的体积(mL)；M：样品质量(g)。
[0132] 数据记录如下：
[0133] 表3
[0134]
[0135] 根据算式，结果为：
[0136] 表4
[0137]
[0138] 上述鲜提物，提取率为4.8％，工艺全程呈现鲜果的紫红色，紫外法检测鲜果中花色苷含量为19.02％，提取物中花色苷含量为17.75％，花色苷保存率93.3％，说明提取工艺对功效花色苷成分没有破坏。
[0139] 比较例3
[0140] 将黑枸杞采用常规煎煮法提取物，如下：
[0141] A、对黑枸杞进行粉碎，加水；
[0142] B、加热至50℃时，果粉液体完全变色，紫外法检测花色苷含量0％，花色苷被完全破坏。
[0143] 比较例4
[0144] 将黑枸杞采用溶剂浸提法，如下：
[0145] A、对黑枸杞粉碎至80目，取4g，加入200ml0.5％TFH-MeOH浸渍；
[0146] B、均匀浆2min，低温超声30min，置于7℃冰箱，避光6天，得到浸提物。
[0147] 取浸提物，4000rpm离心10min，取上清液。35℃恒温真空旋蒸30min。称量浓缩液，用纯化水定容至100ml。精密量取1ml浓缩液，置于10ml容量瓶中(样液稀释10倍)，分别加入pH1.0、pH4.5的缓冲液，暗处平衡15min。同上，紫外法检测花色苷含量，数据记录如下：
[0148] 表5
[0149]
[0150] 根据算式，浸提物结果为：
[0151] 表6
[0152]
[0153] 上述提取物提取率同样为4.8％，提取物有少量变色，紫外法检测花色苷含量为12.17％，检测花色苷成分有一定损失。
[0154] 表7
[0155]
[0156] 注：*示与对比例3、4相比具有显著差异(P＜0.05)；#示与对比例3、4相比具有极显著差异(P＜0.01)。
[0157] 本发明提供的提取工艺与常规煎煮法、浸提法相比，极显著(P＜0.01)提高了热敏色素成分的保留率，极显著(P＜0.01)降低了生产成本。
[0158] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
