技术领域
[0001] 本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种适于工业生产的帕立骨化醇的纯化方法。
相关背景技术
[0002] 帕立骨化醇(Paricalcitol，化学名：19-去甲(nor)-1α，3β，25-三羟基-9，10-secoergosta-5(Z)，7(Z)，22(E)-三烯，又称为19-去甲-1，25-二羟基维生素D2)是一种合成的、生物活性的骨化三醇的维生素D类似物，其侧链(D2)和A(19-去甲)环进行了修饰。帕立骨化醇通过结合维生素D受体来抑制甲状旁腺激素(PTH)的分泌(D.M.Robinson，L.J.Scott，Drugs，2005，65(4)，559-576)，是用于预防和治疗继发性甲状旁腺功能亢进症(SHPT)的药物，它对接受透析和移植手术前的III及IV期慢性肾脏疾病(CKD)患者的SHPT显示出预防及治疗疗效，已成为透析患者最广泛使用的SHPT预防及治疗药物。
[0003] 帕立骨化醇的分子式为C27H44O3，相应的分子量为416.65。其为一种白色、晶体粉末，并且具有下列结构式：
[0004]
[0005] 帕立骨化醇的首次合成在WO9010620中披露，其以25-二羟基维生素D2为原料，首先转化成1α，25-二羟基-3，5-环维生素D2，再经过多步反应制得帕立骨化醇。
[0006] US5281731，US5086191采用了汇聚的策略对帕立骨化醇进行合成，该方法利用奎尼酸作为原料制备片段一，将VD2经过氧化制得片段二，最后将片段一与片段二的链接产物和侧链进行反应，从而制得帕立骨化醇，具体路线如下：
[0007]
[0008] 根据US5281731，US5086191提供的方法制备帕立骨化醇具有多个缺点：
[0009] (1)帕立骨化醇含有多种构型的异构体存在，其合成中间体片段一和中间体3都会产生差向异构化，而产生大量杂质，US5281731、US5086191和现有文献均未对此做出研究。
[0010] (2)US5281731，US5086191两篇专利中采用HPLC法来分离异构体和纯化最终化合物，但帕立骨化醇极性大，且反应产物中的异构体杂质的结构与帕立骨化醇的结构高度相似，因此难以使用HPLC进行纯化，并且HPLC作为制备型方法通常不适用在工业规模上应用。
[0011] (3)US5086191中没有公开制备帕立骨化醇的产率。
[0012] 出于人用药安全考虑，在药物活性成分的产品商业化之前，国内和国际药品监管机构都会建立很低的未知杂质质控限度。通常已知杂质的质控限度为0.15％，但未知杂质的质控限度通常会小于0.10％.因此在原料药的制备过程中产品的纯度非常重要。
[0013] 众所周知，原料药中的杂质可能来自于原料药的制备过程和原料药的自身降解，因此控制原料药的制备工艺，使杂质尽可能少的引入，是控制杂质含量的重要方面。另外，我们还可以通过合适的纯化手段来去除原料药中的杂质。例如，ICH Q7A指南要求原料药生产企业在原料药的制备过程中可通过采用高纯度的的原材料，控制工艺参数，如温度，压力，时间、化学计量比等，以及采用纯化步骤，如结晶，蒸馏和液-液萃取，来使原料药中的杂质含量低于质控限度。
[0014] 中国专利申请CN200680026018.2中公开了在不同的溶剂中对帕立骨化醇进行超声溶解，对所得帕立骨化醇溶液进行蒸发浓缩，然后加入晶种或直接进行冷却析晶，以达到纯化的目的，并给出了最优选溶剂为丙酮。但该方法溶解后要经过蒸发浓缩步骤，有的技术方案中还需要加入晶种，操作繁琐；且该方法使用的有机溶剂量大，环境不友好，成本高，不适合工业化大生产。
具体实施方式
[0062] 下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但本发明绝不局限于这些实施例。
[0063] HPLC方法
[0064] 柱：Hypersyl Gold(250×4.6 5μm)
[0065] 流动相：(A)水(95％)
[0066] (B)乙腈(5％)
[0067] 梯度：0-10min(A)等梯度
[0068] 10-30min(B)从0增加到55％
[0069] 30-40min(A)等梯度
[0070] 30-40min(B)从55％增加到100％
[0071] 检测：252nm
[0072] 流速：2mL/min
[0073] 检测极限：0.02％
[0074] 化合物2的制备
[0075]
[0076] 实施例1
[0077] 取化合物1(420mg，0.69mmol)溶于10ml甲醇，加入氢氧化锂(33mg，1.38mmol)，室温搅拌5h。加入饱和氯化铵溶液5ml淬灭反应，二氯甲烷(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物2(352mg)，收率90.6％。
[0078] 实施例2
[0079] 取化合物1(420mg，0.69mmol)溶于10ml乙醇，加入氢氧化钠(110.4mg，2.76mmol)，室温搅拌2h。加入饱和氯化铵溶液5ml淬灭反应，二氯甲烷(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物2(373.7mg)，收率96.2％。
[0080] 实施例3
[0081] 取化合物1(420mg，0.69mmol)溶于10ml乙醇，加入氢氧化锂(132mg，5.52mmol)，室温搅拌2h。加入饱和氯化铵溶液5ml淬灭反应，二氯甲烷(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物2(372.2mg)，收率95.8％。
[0082] 实施例4
[0083] 取化合物1(420mg，0.69mmol)溶于10ml甲醇，加入甲醇钠(223.7mg，4.14mmol)，室温搅拌2h。加入饱和氯化铵溶液5ml淬灭反应，二氯甲烷(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物2(365.2mg)，收率94.0％。
[0084] 化合物3的制备
[0085]
[0086] 实施例5
[0087] 取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(391.7mg，0.93mmol)，室温搅拌2小时后，TLC点板检测，反应16h后，有部分原料仍未反应完全，停止反应进程。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(271.3mg)，收率78％，经过HPLC检测，化合物3的含量为98.9％，差向异构体
3b含量为0.4％。
[0088] 实施例6
[0089] 取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(391.7mg，0.93mmol)、Et3N(125.5mg，1.24mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌6小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(295.6mg)，收率85％，经过HPLC检测，化合物3的含量为98.1％，差向异构体
3b含量为1.2％。
[0090] 实施例7
[0091] 取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(391.7mg，0.93mmol)、NaHCO3(104.2，1.24mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌6小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(306.1mg)，收率88％，经过HPLC检测，化合物3的含量为99.4％，差向异构体
3b含量为0.3％。
[0092] 实施例8
[0093] 取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(1.04g，2.48mmol)、Na2CO3(788.6mg，7.44mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌2小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(313.0mg)，收率90％，经过HPLC检测，化合物3的含量为99.1％，差向异构体
3b含量为0.4％。
[0094] 实施例9
[0095] 取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(1.04g，2.48mmol)、KHCO3(496.5mg，4.96mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌2小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(320.0mg)，收率92％，经过HPLC检测，化合物3的含量为99.6％，差向异构体
3b含量为0.2％。
[0096] 实施例10
[0097] 取化合物2(0.35g，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入DMP(2.09g，4.96mmol)、K2CO3(1.37g，9.92mmol)，TLC点板检测反应进程，室温搅拌2小时后，反应基本结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(316.5mg)，收率91％，经过HPLC检测，化合物3的含量为99.1％，差向异构体3b含量为0.3％。
[0098] 化合物5的制备
[0099]
[0100] 实施例11
[0101] 取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌18小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(89.6mg)，收率20％，经过HPLC检测，化合物5的含量为99.5％，差向异构体5b含量为0.3％。
[0102] 实施例12
[0103] 取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温至-50℃，-50℃搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(179.2mg)，收率40％，经过HPLC检测，化合物5的含量为99.6％，差向异构体5b含量为0.3％。
[0104] 实施例13
[0105] 取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温至-20℃，-20℃搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(313.7mg)，收率70％，经过HPLC检测，化合物5的含量为99.3％，差向异构体5b含量为0.4％。
[0106] 实施例14
[0107] 取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温至-10℃，-10℃搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(322.6mg)，收率72％，经过HPLC检测，化合物5的含量为99.0％，差向异构体5b含量为0.8％。
[0108] 实施例15
[0109] 取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温至0℃，0℃搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(331.6mg)，收率74％，经过HPLC检测，化合物5的含量为98.1％，差向异构体5b含量为1.5％。
[0110] 帕立骨化醇粗品的制备
[0111]
[0112] 实施例16
[0113] 取化合物5(0.18g，0.23mmol)溶于1ml四氢呋喃，加入四丁基氟化铵三水合物(0.105g，0.35mmol)，回流反应6小时。加入纯化水5ml，乙酸乙酯(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml×2)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状帕立骨化醇粗品(76.6mg)，收率79.9％。
[0114] 实施例17
[0115] 取化合物5(0.18g，0.23mmol)溶于1ml四氢呋喃，加入四丁基氟化铵三水合物(0.483g，1.61mmol)，回流反应6小时。加入纯化水5ml，乙酸乙酯(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml×2)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状帕立骨化醇粗品(74.8mg)，收率78.1％。
[0116] 实施例18
[0117] 取化合物5(0.18g，0.23mmol)溶于1ml四氢呋喃，加入四丁基氟化铵三水合物(0.330g，1.1mmol)，回流反应6小时。加入纯化水5ml，乙酸乙酯(5ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml×2)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状帕立骨化醇粗品(80.0mg)，收率83.5％。
[0118] 帕立骨化醇粗品的重结晶
[0119] 实施例19
[0120] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入10ml丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝10：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，趁热过滤，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇444.5mg，收率为88.9％，纯度为99.75％，异构体杂质B含量为0.12％。
[0121] 实施例20
[0122] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入15ml丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝9：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇421.0mg，收率为84.2％，纯度为99.82％，异构体杂质B含量0.10％。
[0123] 实施例21
[0124] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入20ml(1：40)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝10：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇416.0mg，收率为83.2％，纯度为99.95％，异构体杂质B含量0.03％。
[0125] 实施例22
[0126] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入25ml(1：50)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝9：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇412.5mg，收率为82.5％，纯度为99.97％，异构体杂质B含量0.01％。
[0127] 实施例23
[0128] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入30ml(1：60)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝10：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇411.5mg，收率为82.3％，纯度为99.99％，异构体杂质B含量0.009％。
[0129] 实施例24
[0130] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入20ml丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝8：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇417.5mg，收率为83.5％，纯度为99.92％，异构体杂质B含量0.08％。
[0131] 实施例25
[0132] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入25ml丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝7：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇146.2mg，收率为81.2％，纯度为99.93％，异构体杂质B含量0.05％。
[0133] 实施例26
[0134] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入30ml(1：60)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝6：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇402.5mg，收率为80.5％，纯度为99.92％，异构体杂质B含量0.06％。
[0135] 实施例27
[0136] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入35ml(1：70)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝3：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇391.0mg，收率为78.2％，纯度为99.93％，异构体杂质B含量0.04％。
[0137] 实施例28
[0138] 将500mg帕立骨化醇粗品溶入40ml(1：80)丙酮与水的混合溶剂(丙酮：水＝10：1)中，加热回流使帕立骨化醇粗品完全溶解，室温下缓慢冷却析晶，过滤，冷丙酮(0℃)洗涤，真空干燥，得到帕立骨化醇360.5mg，收率为72.1％，纯度为99.96％，异构体杂质B含量0.02％。
[0139] 对比实施例
[0140] 化合物3的制备
[0141]
[0142] 对比实施例1
[0143] 取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，降温至-78℃，氩气氛围下加入草酰氯(118.04mg，0.93mmol)，和DMSO(363.3mg，4.65mmol)的混合物，搅拌30min后，加入三乙胺(94.1mg，0.93mmol)，室温搅拌2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(306.1mg)，收率88％，经过HPLC检测，差向异构体3b含量为28.5％。
[0144] 对比实施例2
[0145] 取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，降温至-78℃，氩气氛围下加入草酰氯(157.4mg，1.24mmol)，和DMSO(193.7g，2.48mmol)的混合物，搅拌30min后，加入三乙胺(1.25g，12.4mmol)，室温搅拌2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(316.5mg)，收率91％，经过HPLC检测，差向异构体3b含量为30.8％。
[0146] 对比实施例3
[0147] 取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入PCC(200.5mg，0.93mmol)，室温搅拌，TLC点板检测反应进程至原料反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(175.3mg)，收率
50.4％。
[0148] 对比实施例4
[0149] 取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入PCC(267.3mg，1.24mmol)，室温搅拌，TLC点板检测反应进程至原料反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(194.4mg)，收率
55.9％。
[0150] 对比实施例5
[0151] 取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入PCC(401mg，1.86mmol)，室温搅拌，TLC点板检测反应进程至原料反应完全。加入饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和饱和亚硫酸钠溶液(5ml)，分层，水相用二氯甲烷(5ml×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得无色油状物3(134.3mg)，收率
38.6％。
[0152] 对比实施例6
[0153] 取化合物2(350mg，0.62mmol)溶于3ml二氯甲烷中，氩气氛围下加入TEMPO(15.6mg，0.1mmol)，NaClO4(90.6mg，0.74mmol)，NaBr(0.39g，0.12mmol)室温搅拌2小时后，TLC点板检测，反应未发生，延长反应时间，16小时后，反应仍未发生。
[0154] 化合物5的制备
[0155]
[0156] 对比实施例7
[0157] 取化合物3(673.2mg，1.2mmol)溶于5ml无水四氢呋喃，氩气氛围下冷至-78℃后，向其中缓慢滴入丁基锂的正己烷溶液(2.5M，0.47ml)，维持该温度搅拌30分钟后，向其中加入化合物4(0.33g，0.59mmol)的四氢呋喃溶液(3ml)，继续搅拌2小时。自然升温，室温搅拌16小时。加入饱和氯化铵溶液10ml淬灭反应，乙酸乙酯(10ml×3)萃取反应液，合并有机相，饱和氯化钠溶液(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得无色油状物5(313.7mg)，收率70％，经过HPLC检测，化合物5的含量为76.8％，差向异构体5b含量为23％。
[0158] 帕立骨化醇粗品的重结晶
[0159] 对比实施例8
[0160] 在超声波发生器中在28℃下经15分钟的时间将540mg帕立骨化醇溶解于81ml丙酮中，经玻璃棉将澄清溶液过滤到另一烧瓶中，且加入8ml水。随后通过蒸发将溶液浓缩到丙酮体积为54ml(根据重量控制)。将溶液冷却到-18℃且维持所述温度16小时，将晶体过滤且用20ml冷(-18℃)丙酮洗涤，随后在烘箱中在28℃下真空干燥6小时，得到300mg帕立骨化醇，收率为55.6％，纯度为99.78％，异构体杂质B含量0.14％(CN200680026018.2实施例2)。
[0161] 对比实施例9
[0162] 在超声波发生器中在28℃下经15分钟的时间将500mg帕立骨化醇溶解于75ml丙酮中，经玻璃棉将澄清溶液过滤到另一烧瓶中，随后通过蒸发浓缩溶液，直到丙酮体积为57.5ml(根据重量控制)。将溶液冷却到-18℃，且维持温度在-18℃下20小时，将晶体过滤且用20ml冷(-18℃)丙酮洗涤，随后在烘箱中在28℃下真空干燥22小时，得到390mg帕立骨化醇，收率为78.0％，纯度为98.54％，异构体杂质B含量1.26％(CN200680026018.2实施例1)。
