[0001] 本发明涉及一种新的端粒检测技术--唾液端粒检测技术及其配套的唾液采集试剂盒。

[0002] 目前常用的端粒长度检测技术主要有端粒限制性片段法、流式原位杂交法和定量PCR法，但每种方法都有严重的局限性，严重制约了端粒相关研究的开展。端粒限制性片段法(TRF)是目前科研实验室最为流行的检测端粒平均长度的金标准。TRF是端粒检测的金标准，它技术重复性高、变异系数在2％以下。但是这种技术消耗大量的人力、价格昂贵，不适合于大规模的研究或者是常规个人端粒检测。最重要的是，它不适于检测非常短的端粒。另一个应用最为广泛的方法是MMQPCR，这种方法操作相对简单价格廉价，但是也有一些局限性，如：动态范围窄，PCR检测效率在预测范围外，检测重复性较差。因此，寻找一种较TRF法简单廉价、较MMQPCR重复性更好的技术将极大地促进端粒检测领域的发展。与现有的血液端粒检测技术相比，我们发明的唾液端粒检测试剂盒，无论在样本的采集，还是在技术的重复性、特异性和检测结果方面都具有明显的优势。我们的技术还经过特殊的改进，无需进行样本DNA纯化可直接检测；在分析结果方面，已有端粒技术提供的是端粒长度平均值，而不是与最短端粒值，我们提供两种级别的测试：一个是提供平均端粒长度的测试，另一个是提供端粒长度分布，专用于最短的端粒检测。

[0014] 现在结合附图对本发明作进一步详细的说明。这些附图均为简化的示意图，仅以示意方式说明本发明的技术原理，因此其仅显示与本发明有关的构成。

[0015] 如图1所示的本发明的技术原理，本发明是基于qPCR技术，计算某一个qPCR体系中端粒信号与某单拷贝基因信号的比值(T/S)，T/S值反映端粒的长度分值，将比值与参考标准值进行对比即可获得所测端粒的绝对长度。

[0016] 在本实施例中，为了避免传统PCR实验时引物二聚体的产生，我们采用相邻DNA寡核苷酸与三元复合物同一条链结合，促进一个寡核苷酸聚合酶延伸，而另一个作为模板。延伸后产生的一个扩增子由中央端粒序列和末端合成序列构成。

[0017] 在本实施例中，我们的技术在发展早期阶段不需要低温退火，因此可避免常规PCR初始循环低温退火导致的配对错误。

[0018] 在本实施例中，我们还设计并测试了一种新型水解探针，这种探针可桥接寡核苷酸连接处。这种桥接探针设计保证只有全扩增子可被水解探针检测到。目前结果显示，这种方法比小于2个数量级MMQPCR方法要好的多。

[0019] 本发明样本收集方便，无侵入性，随时随地，不局限于门诊；收集的唾液样品无需冷藏便能稳定存储和运送，客户在短时间内获取自己的端粒检测结果。

[0020] 以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用说明书及附图内容所作的等效结构，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。