[0002] P53基因作为一种重要的肿瘤抑制基因，近三十多年以来，被各国学者广泛研究，据报道，人类癌症中约有一半是由于该基因发生突变失活而导致的。P53基因是因编码一种分子量为53kDa的蛋白质而得名。其表达产物为基因调节蛋白（P53蛋白），当DNA受到损伤时表达产物急剧增加，可抑制细胞周期进一步运转。一旦P53基因发生突变，则会导致P53蛋白失活，细胞分裂失去节制，机体便发生癌变。因此p53能使癌细胞自杀，防止癌变；还具有帮助细胞基因修复缺陷的功能。P53的其他功能还在被陆续的发现中。

[0003] 2003年，国产的重组人p53腺病毒注射液上市，商品名"今又生"，是世界上第一个获准上市的肿瘤基因治疗药，它是由正常人P53肿瘤抑制基因和改构的5型腺病毒基因重组而成。前者是"今又生"发挥肿瘤治疗作用的主体结构，后者主要起载体作用，携带治疗基因P53进入肿瘤细胞内发挥作用。重组人p53腺病毒（rAd-p53)是一种广谱的抗肿瘤药物，目前已有多篇"今又生"治疗全身各主要系统恶性实体瘤的研究论文在国内外发表。P53已经作为治疗肿瘤的基因药物被广泛应用，充分证明了其具有良好的安全性。

[0004] 糖尿病（diabetes)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状。目前有研究已经明确表明：糖尿病的发病确与体内有易感基因或有缺陷基因存在有关。

[0005] 糖尿病（Diabetes)分一型糖尿病和二型糖尿病。在糖尿病患者中，二型糖尿病所占的比例约为95%。其中一型糖尿病人，因胰岛素分泌缺乏，依赖外源性胰岛素补充以维持生命。二型糖尿病人，体内产生胰岛素的能力并非完全丧失，有的患者体内胰岛素甚至产生过多，但胰岛素的作用效果差，因此患者体内的胰岛素可能处于一种相对缺乏的状态。可以通过某些口服药物刺激体内胰岛素的分泌。

[0018] 下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

[0019] 实施例I

[0020] 一、材料[0021] I、受试物：重组人P53腺病毒注射液，国药准字S20040004，主要成分：重组腺病毒-P53基因颗粒；辅料：三羟基氨基甲烷，丙三醇。规格：1X1012VP/支。购自市售的重组人P53腺病毒注射液，由深圳市赛百诺基因技术有限公司生产，批号：20070901。

[0022] 2、动物：

[0023] db/db鼠：二型糖尿病小鼠模型，购自南京鹏晟生物科技发展有限公司，研究p53基因的降血糖作用。

[0024] db/m小鼠：购自南京鹏晟生物科技发展有限公司，为正常小鼠对照组。

[0025] 二、方法 [0026] 取6周龄db/db鼠50只，体重45. 8 ±3. 3g,随机分成五组，每组10只，分别为p53基因低剂量组，P53基因高剂量组，吡格列酮组，腺病毒组，模型组。另取db/m小鼠10只，体重26. 55±2. 32g，为正常组。

[0027] 具体的分组情况如下：

[0028] ①p53基因低剂量组，腹腔注射重组人p53腺病毒注射液，计量为2. 5 X 1010VP/kgbw ；

[0029] ②p53基因高剂量组，腹腔注射重组人p53腺病毒注射液，计量为5X 101C)VP/kgbw ；

[0030] ③腺病毒组：腹腔注射作为p53基因载体的单纯腺病毒（由深圳市赛百诺基因技术有限公司无偿提供），计量为5X101(lVP/kg bw ；

[0031] ④吡格列酮组，灌胃给药盐酸吡格列酮片（市购，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，国药准字H20040631)计量为4mg/kg bw ；

[0032] ⑤模型组和正常组，腹腔注射生理盐水，计量为10ml/kg. bw。

[0033] 各组均按照O天、2天、4天、6天给药。于28天后检测空腹血糖，数据应用SPSS10. O统计软件分析，检验水准为p〈0. 05时，差异有统计学意义。

[0034] 三、结果

[0035] p53基因对db/db鼠空腹血糖的影响结果见表1，从表中统计的数据可知：与正常组相比，模型组空腹血糖明显升高（p〈0. 05)。P53基因组和吡格列酮组与模型组比较，空腹血糖明显下降（p〈0. 05)。

[0036] 表1ρ53基因对db/db鼠空腹血糖的影响组别 n 试验前(mmol/L) 试验后(mmol/L)
正常组 10 9.17士0.45 9.15±0.65
模型组 10 20.32±1.05 21.02±1.12

[0037] 腺病毒组 10 21.18 士 1.02 21.53士 1.12 吡格列酮组 10 21.37士 1.25 16.48士 0.83P53 基因低剂量组 10 21.28±1.33 15.61±1.01
P53 基因高剂量组 10 21.08±0.77 13.37士0.87[0038] 四、结果分析

[0039] 本发明均以db/db鼠为研究对象，结果分析如下：

[0040] I、正常组、模型组和腺病毒组中，无论是腹腔注射生理盐水还是单纯腺病毒制剂均无降低空腹血糖作用。

[0041] 2、吡格列酮组给药后具有降低血糖作用，说明本研究对象一db/db鼠对降糖治 疗药物具有良好反应性。

[0042] 3、无论是P53基因低剂量组还是高剂量组，腹腔注射P53基因后，db/db鼠空腹血糖均显著下降（P < O. 05)，表明P53基因经腹腔注射方法治疗二型糖尿病动物模型是有效的。但最佳的P53基因给药浓度还需要进一步研究。

[0043] 本发明结果结果显示，重组人p53腺病毒注射液中只具有载体作用的腺病毒单独应用并无治疗二型糖尿病作用。但重组人P53腺病毒注射液经腹腔注射具有确切的降低db/db鼠的空腹血糖水平作用。上述结果可以证实，重组人p53腺病毒注射液中P53基因对二型糖尿病具有治疗作用，而且，重组人P53腺病毒注射液中P53基因是治疗的关键因素。本发明为扩大重组人P53腺病毒注射液治疗疾病的适应症，即重组人p53腺病毒注射液具有治疗二型糖尿病作用提供可靠的实验依据。

[0044] 实施例2

[0045] 一、材料

[0046] I、受试物：重组人P53腺病毒注射液，国药准字S20040004，主要成分：重组腺病毒-P53基因颗粒；辅料：三羟基氨基甲烷，丙三醇。规格：1X1012VP/支。购自市售的重组人P53腺病毒注射液，由深圳市赛百诺基因技术有限公司生产，批号：20070901。

[0047] 2、治疗人群

[0048] 二型糖尿病病人6例，均为男性，年龄43〜76岁，平均56. 7岁。空腹血糖8. 9〜12. 3umol/L，平均10. 6umol/L，均使用胰岛素治疗，应用胰岛素时间为I〜5年，平均2.6年，胰岛素用量12u〜48u，平均每天用量为26u。

[0049] 治疗前病人签署特殊用药使用同意书。

[0050] 治疗方法：重组人P53腺病毒注射液2〜4X IO12VP,加入IOOml生理盐水中，按照O天、2天、4天、6天，静点。治疗中并发热，最高至39. 7，经常规支持、对症治疗。I个月后复查空腹血糖，经自身对照，均有不同程度下降，随访3个月，病情稳定，停止应用胰岛素。统计结果见表2 ：

[0051] 表2 二型糖尿病病人的应用效果统计数据

[0052]