技术领域
[0001] 本发明涉及一种磷的测定方法，尤其涉及一种土壤中总磷的测定方法。
相关背景技术
[0002] 磷在生物圈内的分布很广泛，地壳含量丰富列前10位，在海水中浓度属第2类。广泛存在于动植物组织中，也是人体含量较多的元素之一，稍次于钙排列为第六位。约占人体重的1％，成人体内约含有600-900g的磷。体内磷的85.7％集中于骨和牙，其余散在分布于全身各组织及体液中，其中一半存在于肌肉组织。它不但构成人体成分，且参与生命活动中非常重要的代谢过程，是机体很重要的一种元素。
[0003] 近年来长江口生态系统处于亚健康状态。水体富营养化严重，氮磷比严重失衡，春季和夏季，大部分水域无机氮和活性磷酸盐含量超第四类海水水质标准。
[0004] 因此，对土壤中总磷的测定，就显得非常重要。
具体实施方式
[0016] 下面结合实施例对本发明作进一步描述。
[0017] 1、主要仪器
[0018] 721型分光光度计；LNK-872型红外消化炉。
[0019] 2、试剂
[0020] (1).浓硫酸(H2SO4，ρ≈1.84g·cm-3，分析纯)；
[0021] (2).70～72％高氯酸(HClO4，ρ≈1.60g·cm-3，分析纯)；
[0022] (3).2，6-二硝基酚或2，4-二硝基酚指示剂溶液：溶解二硝基酚0.2g于100mL水中。此指示剂的变色点约为pH＝3，pH＜3时无色，pH＞3时呈黄色。
[0023] (4).4mol·L-1氢氧化钠溶液：溶解NaOH 16g于100mL水中。
[0024] 2.16mol·L-1NaCO3溶液：114.48g无水碳酸钠，定容至1000ml.
[0025] (5)2mol·L-1(1/2H2SO4)溶液(即1mol·L-1H2SO4溶液)：吸取浓硫酸5.43mL，缓缓加入80mL水中，边加边搅动，冷却后加水至100mL。
[0026] (6)钼锑抗试剂：《土壤农化分析》
[0027] A、5g·L-1酒石酸氧锑钾溶液：取酒石酸氧锑钾〔K(SbO)C4H4O6〕0.5g，溶解于100mL水中。
[0028] B、钼酸铵一硫酸溶液：称取钼酸铵[(NH4)6MO7O24·4H2O]10g，溶于450mL水中(PS：湖泊营养化调查规范--溶解于约60℃的300ml水中，冷却)，缓慢地加入153mL浓H2SO4，边加边搅。
[0029] 再将上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分摇匀，贮于棕色瓶中，此为钼锑混合液。在约4℃可稳定六个月。
[0030] 临用前(当天)，称取左旋抗坏血酸(C6H8O5，化学纯)1.5g，溶于100mL钼锑混合液中，混匀，此即钼锑抗试剂。有效期24小时，如藏于冰箱中则有效期较长。此试剂中H2SO4-1 + -1 -1 -1为5.5mol·L (H)，钼酸铵为10g·L ，酒石酸氧锑钾为5g·L ，抗坏血酸为15g·L 。
[0031] (7)磷标准贮存溶液：准确称取在105℃烘箱中烘干的KH2PO4(分析纯)0.2195g，溶解在400mL水中，加浓H2SO45mL(加H2SO4防长霉菌，可使溶液长期保存)，转入1L容量瓶-1中，加水至刻度。此溶液为50μg·mL P标准溶液。
[0032] 磷标准溶液：吸取上述磷标准溶液25mL，稀释至250mL，即为5μg·mL-1P标准溶液(此溶液不宜久存)。
[0033] 操作步骤：
[0034] 1、待测液的制备：
[0035] 取出预处理过的样品，在50℃左右的条件下再烘3小时左右，准确称取烘干后的样品0.3-1g，置于50mL开氏瓶中，以少量水湿润后，加浓H2SO4 5mL，摇匀后，再加70-72％HClO4 10滴摇匀，瓶口上加一个小漏斗，置于电炉上加热消煮(至溶液开始转白后继续消煮)20min。全部消煮时间约为40-60min。在样品分解的同时做一个空白试验，即所用试剂同上，但不加土壤，同样消煮得空白消煮液。
[0036] 将冷却后的消煮液倒入100mL容量瓶中(容量瓶中事先盛水30-40mL)，用水冲洗开氏瓶(用水应根据少量多次的原则)，轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，加水定容。静置过夜，次日小心地吸取上层澄清液进行磷的测定；或者用干的定量滤纸过滤，将滤液接收在100mL干燥的三角瓶中待测定。
[0037] 步骤流程：
[0038] 称取土壤0.3～1g于50mL消化管中
[0039] →加少量水润湿后加浓硫酸8mL，摇匀
[0040] →加70～72％高氯酸10滴，摇匀，管口加一个小漏斗
[0041] →加热消煮，至溶液开始转白后继续消煮20min
[0042] →冷却后用水洗入100mL容量瓶中
[0043] →定容摇匀
[0044] →静置过夜取上清液或用干燥的无磷滤纸过滤。(同时做空白试验)[0045] 2.溶液中磷的比色测定：
[0046] 吸取澄清液或滤液5mL[(对含P，0.56g·kg-1以下的样品可吸取10mL)，以含磷(P)在20-30μg为最好]注入50mL容量瓶中，用水冲稀至30mL，加二硝基酚指示剂2滴，-1滴加4mol·L-1NaOH溶液直至溶液变为黄色，再加2mol·L (1/2H2SO4)1滴，使溶液的黄色刚刚褪去(这里不用NH4OH调节酸度，因消煮液酸浓度较大，需要较多碱去中和，而NH4OH浓-1
度如超过10g·L 就会使钼蓝色迅速消退)。然后加钼锑抗试剂5mL，再加水定容50mL，摇匀。30min后，用880nm或700nm波长进行比色，以空白液的透光率为100(或吸光度为0)，读出测定液的透光度或吸收值。
[0047] 步骤流程：
[0048] 移取澄清液或滤液2～10mL于50ml容量瓶中
[0049] →加水至约30mL
[0050] →加二硝基酚指示剂2滴
[0051] →用4mol·L-1NaOH调节pH至溶液刚呈黄色
[0052] →加钼锑抗显色剂5mL
[0053] →定容，摇匀
[0054] →半小时后(高于15℃)于700nm处比色测定
[0055] 3.标准曲线：
[0056] 准确吸取5μg·mL-1P标准溶液0、1、2、4、6、8、10mL，分别放入50mL容量瓶中，加水至约30mL，再加空白试验定容后的消煮液5mL，调节溶液pH为3，然后加钼锑抗试剂5mL，最后用水定容至50mL。30min后进行比色。各瓶比色液磷的浓度分别为0、0.1、0.2、0.4、-10.6、0.8、1.0μg·mL P。
[0057] 4.结果计算
[0058] 从标准曲线上查得待测液的磷含量后，可按下式进行计算：
[0059] 土壤全磷(P)量(g·kg-1)＝ρ×V/m×V2/V1×10-3
[0060] 式中：ρ—待测液中磷的质量浓度，μg·mL-1；
[0061] V——样品制备溶液的mL数；
[0062] m——烘干土质量(g)；
[0063] V1——吸取滤液mL数；
[0064] V2——显色的溶液体积(mL)；
[0065] 10-3——将μg数换算成每kg土壤中含磷的g数的乘数。
[0066] 本发明采用用高氯酸分解样品，因为它既是一种强酸，又是一种强氧化剂，能氧化3+
有机质，分解矿物质，而且高氯酸的脱水作用很强，有助于胶状硅的脱水，并能与Fe 络合，在磷的比色测定中抑制了硅和铁的干扰。硫酸的存在提高消化液的温度，同时防止消化过
