[0004] 本发明提供一株芘降解菌及其应用。所用菌株经鉴定为无色杆菌Achromobacter sp.，2010年3月1日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，该中心位于北京市朝阳区 北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC3637。该菌株16S rDNA的 Genbank登录号为EU220009. 1，将该菌株制成含菌量为1. 25X 108CFU/ml的菌悬液，可用于 环境中芘的降解。

[0005] 从污染土壤中分离纯化所述芘降解菌的步骤如下：

[0006] (1)选取受石油污染的土壤，将其通过直径为2mm的网筛后立即放置于4°C冰箱中 保存备用。

[0007] (2)向体积为IOOOmL的开口玻璃瓶中加入25〜30mL浓度为lg/L的芘的丙酮混 合溶液，为除去丙酮将玻璃瓶开口放置2天。3[0008] (3)向步骤（2)中开口玻璃瓶中加入500〜600mL基础培养基，在转速为100r/min 的条件下搅拌40〜50min后加入步骤（1)中的土壤250g ；然后置于温度为25〜30°C的 环境中在转速为lOOr/min的条件下搅拌富集驯化培养30d，在培养期间定期向玻璃瓶中加 入基础培养基以维持玻璃瓶中泥浆系统的水土比例保持不变；其中基础培养基的组成为： NH4Cl :1· 5g · ΙΛ KH2PO4 :1· 5g · ΐΛ MgCl2 :0· 25g · ΐΛ CaCl2 · 2Η20 :0· IOg · Γ1。

[0009] (4)向体积为100〜200mL的锥形瓶中加入IOmL浓度为lg/L的芘的丙酮混合溶 液，为除去丙酮将锥形瓶开口放置2天。

[0010] (5)向步骤（4)中的锥形瓶中入50mL基础培养基、0. 5mL微量金属液和0. ImL维 生素 c 溶液；其中微量金属液的组成为=CoCl2 · 6H20 :35mg · L-1，CuCl2 :0· 20mg · L-1，H3BO3 ： 6. Omg · ΙΛ MnCl2 · 4Η20 :25mg · ΐΛ Na2MoO4 · 2Η20 :3· Omg · ΐΛ NiCl2 · 2Η20 :2· Omg · ΐΛ ZnCl2 :2. 5mg · L-1。

[0011] (6)向步骤（5)中的锥形瓶内接入步骤（3)驯化的土壤0.25g，然后置于温度为 25〜30°C转速为lOOr/min的振荡器中培养5〜7天，每天打开瓶口一次以恢复锥形瓶内 的溶解氧；按接种体积比为200〜250 ： 1的比例转入另一按步骤（4)至（5)处理后的锥 形瓶内，当转接次数大于8之后即可获得高效去除芘的好氧降解菌群。

[0012] (7)向体积为500mL的锥形瓶内加入400mL基础培养基、1. OmL微量金属液、0. ImL 维生素c溶液，摇勻后作为液体培养基备用。

[0013] (8)向体积为150mL的锥形瓶内加入50mL按步骤（7)配制的液体培养基和0. 60g 琼脂，然后在温度为121°C的高压锅中灭菌20分钟，在室温下冷却至65〜70°C时，在超净 工作台中将其倒入体积为160mL的培养皿中，为除去培养基表面多余的水分将该培养皿在 超净工作台中放置2天。

[0014] (9)在超净工作台中向步骤⑶中的培养皿中加入0. 5mL浓度为lg/L的芘丙酮溶 液，来回倾斜转动培养皿使芘的丙酮溶液均勻分布，为除去培养基表面的丙酮将该培养皿 在超净工作台中放置2天。

[0015] (10)向体积为25mL的锥形瓶内加入IOmL按步骤（7)配制的液体培养基和0. 25g 琼脂，在温度为121°C的高压锅中灭菌20分钟，在超净工作台中冷却至38〜40°C。

[0016] (11)在超净工作台中向步骤（10)的锥形瓶中加入ImL步骤（6)得到的芘好氧降 解菌群溶液，摇勻后吸取ImL慢慢加入步骤（9)中的培养皿中，来回倾斜转动培养皿使接种 有混合菌群的培养基溶液均勻分布。将培养皿放入温度为25°C的培养箱中培养观察，10〜 15天后便可发现有明显的菌落出现。

[0017] (12)在超净工作台中挑取步骤（11)培养皿中的菌落，进行重复分离，分离纯化8 个周期以上即可得到能够高效降解芘的纯菌种。

[0018] 本发明的有益效果是所述的方法能够分离纯化到对芘降解性能好的微生物菌种。 具体实施方式

[0019] 向加入芘和基础培养基的开口玻璃瓶内加入受石油污染的土壤进行芘降解微生 物的富集与驯化，30d后向加入芘、基础培养基、微量金属液、维生素c溶液及吸附剂的锥形 瓶内接入富集驯化的土壤。在温度为25〜30°C、转速为lOOr/min的振荡器中培养5〜7 天后，进行循环转接，在循环次数大于8次后即可得到高效去除芘的降解菌群。在超净工作台中制作以芘为唯一碳源和能源的琼脂固体培养基底层平板，在底层平板上制作含有芘降 解菌群的琼脂固体培养基顶层平板，将制作好的培养基平板在培养箱中培养10〜15天。 在超净工作台中向加入芘、基础培养基、微量金属液、维生素c溶液及吸附剂的锥形瓶内接 入培养基平板中的菌落，在温度为25〜30°C、转速为lOOr/min的振荡器中培养5〜7天。 然后进行循环转接，在循环次数大于8次后即可得到能够降解芘的纯菌种。 [0020] 运用分离纯化得到的降解芘的菌种Achromobacter sp.制成菌悬液，含菌量为 1.25X 108CFU/ml，进行降解芘的降解试验。结果表明菌株Achromobacter sp.能够对芘进 行有效的降解，当芘的初始浓度为0. Ilmg/L、0. 26mg/L、0. 52mg/L、l. 14mg/L时，7天后的降 解去除率分别为：92. 65%,91. 46%,88. 29%.89. 67%。