[0001] 本发明涉及一种梯度稀释补料酶膜耦合反应的方法及用于鱼鳞胶原蛋白抗氧化 多肽的制备，属于生物技术领域。

[0002] 目前生物大分子物质的酶解反应与分离操作广泛采用间歇式的方法，即在普通的 反应器中进行分批酶解反应，当反应结束后，通过加热或者调节溶液PH值使蛋白酶变性失 活，再经过离心、膜分离等操作，制得目标产品。这种传统工艺存在如下问题：酶解产物无 法从反应体系中分离出去，容易造成产物对反应过程的抑制效应，导致反应速度下降；产物 不及时分离出去，还会引起产物过度降解，导致其活性下降；随着底物的消耗，反应后期出 现底物不足现象，产生酶催化活性过剩的问题；一个批次反应完后灭酶，进入下一批次的反 应，酶无法反复使用，引起生产成本升高。

[0003] 而近年大量的研究证明，酶解-膜分离耦合技术可以克服传统酶解技术存在的酶 利用率低、反应后期底物不足、产物对反应的抑制效应和产物过度降解等缺陷，显著提高酶 解反应效率和产物的活性。现有的酶解-膜分离耦合技术制备多肽，主要是在不补料或者 在等浓度补料的情况下进行酶解和膜分离耦合反应。不补料酶解和膜分离耦合反应指配置 一定底物浓度的原料溶液，装入反应器，调节反应液PH和反应温度，然后加入蛋白酶，再在 恒速循环下进行连续酶解_膜分离耦合反应，收集透过液即得多肽溶液。不补料酶解和膜 分离耦合反应克服了产物对反应的抑制效应和产物过度降解的不足，但没有解决酶利用率 低和反应后期底物不足的问题。等浓度补料酶解和膜分离耦合反应指随着酶解的进行，不 断补充一个恒定浓度的底物溶液进入反应器，这种方法解决了酶利用率低和反应后期底物 不足的问题，但存在的不足是：随着反应的进行，反应器中沉积的残渣愈来愈多，浓度也愈 来愈大，因为水分不足，反应效率受到影响；靠近反应结束前一段时间补充进去的底物，由 于时间不足引起反应不完全。

[0004] 在酶解-膜分离耦合反应或者膜生物反应器应用于其它生物反应中也存在类似 问题。