本发明提供了一种基于磁分离‑CRISPR信号放大的非核酸靶标快速检测方法、试剂盒及应用，属于检测技术领域。本发明所述方法具体为：S1.制备抗体修饰的磁性纳米颗粒溶液；S2.将所述抗原/抗原类似物和单链DNA修饰至金纳米颗粒表面，获得金纳米颗粒复合物溶液；S3.将所述磁性纳米颗粒溶液、金纳米颗粒复合物溶液、待检测的非核酸靶标样品溶液制备为MNPs‑Ab复合物溶液；S4.将Cas12a蛋白溶液、新英格兰缓冲液、crRNA溶液、RNA酶抑制剂溶液和荧光探针溶液混合，获得系统复合液；S5.将所述MNPs‑Ab复合物溶液与系统复合液进行混合反应，最后进行荧光检测。本发明灵敏度高、检测时间短、具备定量检测非核酸靶标的能力，因此拥有良好的发展前景。