[0001] 本发明涉及生物保鲜技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌株KF‑1、生物防菌剂及其制备方法和应用。

[0002] 真菌、细菌、植原体和病毒是导致果蔬发生腐败变质和疾病感染的主要微生物，其中真菌感染是最严重的，真菌病原体的孢子无处不在，它们繁殖迅速，很容易通过气流传播，造成农业的巨大损失。据报道黑曲霉（Aspergillus niger）、链格孢（Alternaria alternata)、内拟盘多毛孢菌（Neopestalotiopsis sp）和灰葡萄孢（Botrytis cinerea）可分别引起蓝莓、青椒、葡萄和草莓的釆后腐烂。近年来，生物防菌剂已成为果蔬采后贮藏生物防治的研究热点，包括细菌、真菌、放线菌、病毒的弱毒株系和噬菌体制成的生物防菌剂。其中以细菌制成生物防菌剂的成本更低，操作简单而在病害防治领域应用广泛。目前生防菌的研究主要集中在筛选和鉴定、防治效果、作用机制以及产品开发应用等方面。

[0003] 生防细菌主要包括芽孢杆菌属（Bacillus spp.）、类芽孢杆菌属（Paenibacillus spp.）、假单胞菌属（Pseudomonas spp.）、土壤杆菌属（Agrobacterium spp.）等。其中芽孢杆菌的来源广，对环境友好，可以形成耐热抗逆的芽孢，生存能力强，是最理想的生物防菌剂。芽孢杆菌菌株可以通过释放多种具有良好抗菌特性的次生代谢产物来抑制植物病原体的生长，如杆菌溶素、表面活性素、风霉素、枯草溶菌素A等。WANG等（WANG XL, ZHU JF, WEI H, et al. Biological control efficacy of Bacillus licheniformis HG03 against soft rot disease of postharvest peach [J]. Food Control, 2023, 145: 109402.）的研究发现地衣芽孢杆菌（Rhizopus stolonifer）可以提高桃果实的抗病性、延长桃的贮藏时间。WANG等（WANG XJ, XIE SY, MU XY, et al. Investigating the resistance responses to Alternaria brassicicola in 'Korla' fragrant pear fruit induced by a biocontrol strain Bacillus subtilis Y2 [J]. Postharvest Bio and Tech, 2023, 199: 112293.）人发现枯草芽孢杆菌可以抑制由真菌病原菌黑斑病菌引起的“库尔勒”香梨果实黑斑病。TIAN等（TIAN Y, JI SH, ZHANG ER, et al. Complete genome analysis of Bacillus subtilis TY‑1 reveals its biocontrol potential against tobacco bacterial wilt [J]. Marine Gen, 2023, 68: 101018.）对枯草芽孢杆菌的基因序列进行了鉴定，发现其基因组中存在大量参与抗菌代谢物生物合成的基因簇，包括脂肽和聚酮化合物，揭示了该菌株抗菌活性的分子机制。脂肽可以通过透化作用破坏生物膜，对病原微生物产生致死作用，可抑制稻瘟病菌、葡萄孢菌、碳曲霉等病原菌。但目前以芽孢杆菌作为生防菌的研究仅局限于拮抗单一菌种，如水稻病原菌（Magnaporthe oryzae）和禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum），尚未有关于一株芽孢杆菌同时拮抗多种病原真菌的报道。

[0024] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0025] 枯草芽孢杆菌株KF‑1的分类命名为：Bacillus subtilis KF‑1，保藏编号为：CCTCC NO：M20241473，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2024年7月3日。

[0026] 实施例1 广谱抗真菌的Bacillus subtilis筛选鉴定及生物学特性1、材料与试剂：由成都挎福科技有限责任公司提供的黑曲霉、链格孢、扩展青霉、灰葡萄孢、禾谷镰刀菌、拟盘多毛孢等16种常见植物病害真菌作指示菌株，编号见表1。

[0027] 表1 病原真菌编号表

[0028] 注：—代表无中文名称。

[0029] 采用五点取样法从龙泉驿龙井村巨峰葡萄采摘园采集健康葡萄根际土壤，共采集了10份土壤样品（每份约30 g），放入无菌样品袋，于4℃冰箱保存备用。葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、琼脂粉、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、尿素、酵母浸粉、营养琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、可溶性淀粉均为生物试剂；蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、乳糖、硝酸钠、亚硝酸钠、氯化钠、盐酸、氢氧化钠均为分析纯。

[0030] 2、试验方法：（1）拮抗细菌的分离：采用梯度稀释法分离细菌，称取10 g土壤样品加入90 mL无
4 5 6
菌水于三角瓶中，190 r/min震荡24 h，静置。将其稀释至10 、10和10 ，分别取200 μL均匀涂布至牛肉膏蛋白胨培养基上，置于37℃培养箱中培养1‑2 d，挑取单菌落进行平板划线直至获得纯培养物，将其接入斜面保存备用。

[0031] （2）拮抗菌16S rDNA序列分析：将拮抗细菌菌株送至北京擎科生物科技有限公司成都分公司进行DNA序列鉴定。将测序结果在NCBI通过BLAST进行序列比对分析，用MEGA7.0软件中Neighbor‑Joining方法构建系统发育树进行序列相似性和同源性分析。

[0032] （3）广谱抗真菌的拮抗细菌筛选：将待测细菌在营养琼脂培养基上进行活化，病原真菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上进行活化。采用平板对峙法，在平板中间接入直径5 mm的病原真菌菌饼，试验组在马铃薯葡萄糖琼脂培养基四周接入直径5 mm的细菌菌饼，对照组则不接细菌菌饼，每个处理重复4次。将培养基置于28℃培养箱内培养5 d后观察病原菌和细菌菌落的生长情况，测量病原菌的菌落直径，根据如下公式（1）计算抑菌率（r/%），r（%）=（Dck‑Db）/Dck×100 （1）式中: Dck为对照组的菌落直径（mm）；Db为试验组的菌落直径（mm），每株病原菌的权重为1/16，即0.0625。以综合抑菌率（R/%）最高的细菌为目标菌株。综合抑制率的公式为公式2:
R（%）=     （2）
3、数据处理：利用EXCEL 2016软件进行数据统计和绘图，处理结果以平均值±标准偏差表示。用SPSS 22.0进行显著性差异分析。采用MEGA 7.0构建进化树分析16S rDNA序列的同源性。

[0033] 4、结果与分析（1）细菌的形态特征分析：采用梯度稀释法，从龙泉驿龙井村巨峰葡萄采摘园中的健康葡萄根际土壤中筛选得到3株细菌，菌株的菌落形态和镜检结果如图1所示，将菌株名称命名为菌株KF‑1, 菌株KF‑2, 菌株KF‑3。菌株KF‑1的菌落形态在营养琼脂培养基上呈现菌落大，颜色为白色不透明，干燥，隆起有褶皱。菌株KF‑2的菌落形态在营养琼脂培养基上呈现菌落大，颜色为白色不透明，表面粗糙，干燥，边缘有隆起，质地黏稠易被挑起。KF‑3的菌落形态在营养琼脂培养基上呈现菌落大，颜色为白色不透明，干燥。菌株KF‑1和菌株KF‑2均为杆状，革兰氏阳性菌，产椭圆形芽孢；菌株KF‑3为杆状，革兰氏阳性菌，芽孢为卵圆形，中生。

[0034] （2）细菌的生理生化特性分析：3株菌株的生理生化特性鉴定结果如表2所示。结合细菌的菌落形态特征，初步判断菌株KF‑1为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），菌株KF‑2为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），菌株KF‑3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。

[0035] 表2 3株细菌的生理生化特性

[0036] 注: +表示阳性；‑表示阴性。

[0037] （3）菌株的分子生物学鉴定分析：根据3株菌株的基因测序结果在NCBI通过BLAST进行序列比对分析， 采用 MEGA 7.0.14 软件，构建菌株的系统发育树。如图2所示，菌株KF‑1与Bacillus subtilis strain ID‑A05（CP066380.1）聚为一类，同源性为99%；菌株KF‑2与Bacillus velezensis strain SQ‑5（KY427069.1）聚为一类，同源性为64%；菌株KF‑3与Bacillus amyloliquefaciens DSM （NR118950.1）聚为一类，同源性为99% 。因此说明菌株KF‑1为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），菌株KF‑2为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）， 菌株KF‑3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。3株菌株的分子鉴定结果与形态学、生理生化特征的鉴定结果一致。

[0038] （4）优拮抗细菌的筛选：如表3所示，菌株KF‑1（枯草芽孢杆菌）、菌株KF‑2（贝莱斯芽孢杆菌）和菌株KF‑3（解淀粉芽孢杆菌株）3株菌株对16种病原真菌均有不同的抑制效果。3株细菌对真菌KFPD25（Cladosporium xylophilum）的抑制效果最明显，抑制率均达到
100%。3株细菌对KFPD20 （Fusarium graminearum）的抑制效果最差，抑制率在5%左右。根据综合抑制率，菌株KF‑1对16种病原真菌的综合抑制效果最好，综合抑制率达到53.77%，显著高于其他两种细菌（P<0.05），具有广谱性。

[0039] 表3 三株细菌的抑菌率

[0040] 注: 同行不同小写字母表示经Duncan氏极差法检验差异显著（P <0.05）。

[0041] 5、结论从葡萄根际土壤中共分离得到3株菌，菌株KF‑1（Bacillus subtilis）和菌株KF‑2（Bacillus velezensis）为革兰氏阳性菌，菌株KF‑3 （Bacillus amyloliquefaciens）为革兰氏阴性菌。菌株KF‑1和菌株KF‑2对16种不同病原真菌的综合抑制效果显著优于菌株KF‑
3，其中以菌株KF‑1的综合抑菌效果最好。菌株KF‑1的最适培养基需要在牛肉膏蛋白胨培养基中添加可溶性淀粉作为碳源，调节pH至中性，并将其置于28℃环境下培养24 h，此时KF‑1的生长最好。

[0042] 实施例1

[0043] 本实施例提供一种生物防菌剂的制备方法，包括以下步骤：S1. 枯草芽孢杆菌株KF‑1菌种的活化；将枯草芽孢杆菌株KF‑1的冻干粉用无菌水溶解后涂布在平板上进行活化，然后将平板放入恒温培养箱中，在28 ℃培养48 h。接着用接种环挑取菌落接种在斜面培养基上培养48 h，再从斜面上取一环接种在LB液体培养基中，培养48h后可得到活化后的枯草芽孢杆菌株KF‑1种子液。

[0044] S2. 将活化后的枯草芽孢杆菌株KF‑1转接到LB培养基中，27℃，70rpm，发酵培养20h，得芽孢发酵液，离心，得到上清液；
S3. 向上清液中加入NaCl和低酰基结冷胶，NaCl的添加量为0.3wt%，低酰基结冷胶的添加量为2.55g/L，搅拌混合30min，旋转蒸发浓缩，制得生物防菌剂。

[0045] 实施例2

[0046] 本实施例提供一种生物防菌剂的制备方法，包括以下步骤：S1. 枯草芽孢杆菌株KF‑1菌种的活化；将枯草芽孢杆菌株KF‑1的冻干粉用无菌水溶解后涂布在平板上进行活化，然后将平板放入恒温培养箱中，在28 ℃培养48 h。接着用接种环挑取菌落接种在斜面培养基上培养48 h，再从斜面上取一环接种在LB液体培养基中，培养48h后可得到活化后的枯草芽孢杆菌株KF‑1种子液。

[0047] S2. 将活化后的枯草芽孢杆菌株KF‑1转接到LB培养基中，29℃，120rpm，发酵培养28h，得芽孢发酵液，离心，得到上清液；
S3. 向上清液中加入NaCl和低酰基结冷胶，NaCl的添加量为0.5wt%，低酰基结冷胶的添加量为3.5g/L，搅拌混合30min，旋转蒸发浓缩，制得生物防菌剂。

[0048] 实施例3

[0049] 本实施例提供一种生物防菌剂的制备方法，包括以下步骤：S1. 枯草芽孢杆菌株KF‑1菌种的活化；将枯草芽孢杆菌株KF‑1的冻干粉用无菌水溶解后涂布在平板上进行活化，然后将平板放入恒温培养箱中，在28 ℃培养48 h。接着用接种环挑取菌落接种在斜面培养基上培养48 h，再从斜面上取一环接种在LB液体培养基中，培养48h后可得到活化后的枯草芽孢杆菌株KF‑1种子液。

[0050] S2. 将活化后的枯草芽孢杆菌株KF‑1种子液转接到LB培养基中，28℃，100rpm，发酵培养24h，得芽孢发酵液，离心，得到上清液；S3. 向上清液中加入NaCl和低酰基结冷胶，NaCl的添加量为0.4wt%，低酰基结冷胶的添加量为3g/L，搅拌混合30min，旋转蒸发浓缩，制得生物防菌剂。

[0051] 实施例4 生防菌剂KF‑1制备关键工艺单因素试验分别考察NaCl浓度、低酰基结冷胶浓度、浓缩温度和浓缩时间对生防菌剂KF‑1活菌数的影响，如下表所示：
表4

[0052] 结果如下：NaCl浓度对生防菌剂KF‑1活菌数的影响：由图3可知，生防菌剂KF‑1的活菌数随着NaCl浓度的升高呈先增后减的趋势，且NaCl浓度与活菌数有显著性差异（p<.05）。适当的NaCl浓度可以促进其生长和活性，而过高的NaCl浓度则可能抑制其活性。在适当的盐浓度下，NaCl胁迫可以通过改变根际微生物群落结构和功能多样性，间接促进枯草芽孢杆菌的生长和活性。然而，在高浓度的盐胁迫下，其正面效应可能会减弱或消失。因此，合理控制NaCl的浓度对于最大化枯草芽孢杆菌的应用效果至关重要。当NaCl浓度为0.5 %时，生防菌剂KF‑1的活菌数达到最多为10.723 lgCFU/mL。

[0053] 低酰基结冷胶浓度对生防菌剂KF‑1活菌数的影响：由图4可知，生防菌剂KF‑1的活菌数随着低酰基结冷胶浓度的升高呈先增后减的趋势，低酰基结冷胶浓度对生防菌剂KF‑1活菌数具有极显著性（p<.05）。低酰基结冷胶不会直接破坏枯草芽孢杆菌的细胞壁，而是通过改变周围环境（如pH值或离子强度）的方式，间接影响细胞的代谢活动，从而影响细胞存活的情况。当低酰基结冷胶浓度为2.5 g/L时，生防菌剂KF‑1的活菌数达到最多为10.029 lgCFU/mL。

[0054] 浓缩温度对生防菌剂KF‑1活菌数的影响：由图5可知，生防菌剂KF‑1中的活菌数随着浓缩温度的升高而呈先增多后减少的趋势，浓缩温度对生防菌剂KF‑1活菌数有显著性差异（p<.05）。在浓缩温度为70 ℃时有最多的活菌数，此时生防菌剂KF‑1中的活菌数可达9.568 lgCFU/mL。

[0055] 浓缩时间对生防菌剂KF‑1活菌数的影响：由图6可知，生防菌剂KF‑1中的活菌数随着浓缩时间的升高而呈先增多后减少的趋势。在浓缩时间为9 min时有最多的活菌数，此时生防菌剂KF‑1中的活菌数可达9.628 lgCFU/mL。浓缩时间对生防菌剂的活菌数也具有显著性差异（p<.05）。

[0056] 测试例1 生防菌剂KF‑1体外抑菌试验将实施例4制得的生防菌剂KF‑1的体外抑菌试验进行四种处理，即A组为无菌水、B
9 9
组为添加0.4% NaCl和3.0g/L的溶液、C组为孢子数10菌悬液、D组是活菌数为10的生防菌剂KF‑1。分别取四个处理的液体1 mL，均匀倾注在PDA培养基上，取直径5 mm的病原菌菌饼置于培养皿中央。将培养皿置于28 ℃恒温培养箱中培养48 h后测其抑菌区。

[0057] 由图7可知，实施例4制得的枯草芽孢杆菌/结冷胶生防菌剂KF‑1对扩展青霉具有显著抑菌效果，且抑菌率达到了94.6 %，显著优于和活菌数相同的菌悬液。生防菌在与化学试剂联合使用时，可以发挥更好的抑菌效果，同时减缓病菌抗药性的产生。

[0058] 测试例2 生防菌剂KF‑1成膜结构表征观察使用激光粒度仪测量室温下生防菌剂KF‑1在纯水中的粒度和Zata电位。将生防菌剂KF‑1滴在氮化硅TEM网格（SimPore Inc.），通过TEM观察是否形成以NaCl和低酰基结冷胶
9
为复合壁材的芽孢包合物。将生防菌剂KF‑1活菌数稀释至10 CFU/mL，然后将稀释后的生防菌剂KF‑1配成浓度为8 %、9 %、10 %、11 %、12 %的液体分别倾注25 mL在空平板内，将其置于70 ℃恒温烘箱中烘干。然后将膜揭下放置在载玻片上，用光学显微镜的10倍以及40倍分别进行结构观察。最后采用傅里叶红外光谱仪对生防菌剂KF‑1的频率范围为4000‑500 ‑1 ‑1
cm 的有机官能团进行分析，扫描的分辨率为4 cm 。

[0059] 生防菌剂KF‑1的粒径和Zeta电位：由下表5可知，在纯水中生防菌剂KF‑1的粒径为579.3±24.8 nm，Zeta电位为‑9.57±1.05 mV。结果表明，生防菌剂KF‑1符合保鲜剂用途型微胶囊的粒径和电位需要，能够在果蔬表面实现有效的渗透、粘附和铺展。

[0060] 表5 生防菌剂KF‑1的粒径和Zeta电位

[0061] 生防菌剂KF‑1成膜结构表征观察：由图8可知，随着生防菌剂KF‑1浓度的增加成膜的致密性越来越好。菌膜的致密性越好，其保鲜效果越好。在一定范围内增加NaCl浓度可以改善细菌的生长环境，从而可能促进生物膜的形成。浓度过大NaCl通过增加细胞膜外的渗透压，可能会导致细胞膜的破裂或损伤，从而影响微生物的存活。结冷胶能够与微生物抗菌肽形成稳定的酰胺化产物，这种结合不仅增强了抗菌肽的抗菌活性，还提高了其在不同pH值和温度条件下的稳定性。孢子量通过改变细菌的生长速率、细胞壁的组成或表面附着行为影响细菌涂膜的结构表征。

[0062] 生防菌剂KF‑1的TEM观察：通过对图9分析可知，当生防菌剂KF‑1在水中完全均匀分散后，会形成表面附着芽孢的较均匀球形颗粒。进一步观察可以发现，球体内腔充实，外壁完整且具有良好的连续性，无明显的裂缝或裂纹。生防菌剂KF‑1显示为明确的离散颗粒，具有相对规则的三维结构，且颗粒相对较小、表面均匀无明显空隙。颗粒表面均匀分布芽孢，在颗粒缝隙也分布着游离的芽孢，说明低酰基结冷胶和NaCl能给枯草芽孢杆菌提供良好的载体让芽孢附着，从而提高菌剂芽孢的存活率。

[0063] 生防菌剂KF‑1的傅里叶红外光谱：由图10可以发现，与NaCl和低酰基结冷胶相比较，生防菌剂KF‑1的红外光谱与菌悬液的红外光谱更加相似。在生防菌剂KF‑1中，NaCl的‑1 + ‑ ‑1Na‑Cl键伸缩振动在849 cm 的特征峰以及Na 和Cl的水合作用在2950 cm 的特征峰完全‑1 ‑1 ‑1 ‑1
消失。低酰基结冷胶的特征峰主要在851 cm 、1524 cm 、1926 cm 和2291 cm 处，其中羧‑1
基的特征峰在1524 cm ，但这些特征峰均在生防菌剂KF‑1中完全消失。这表明NaCl和低酰基结冷胶能与菌悬液完美结合并且形成包含物，芽孢附着提供良好载体。

[0064] 测试例3 生防菌剂KF‑1对白肉枇杷常温货架期保鲜试验采用喷洒的方式，用喷壶装适量浓度为8 %、9 %、10 %、11 %、12 %的生防菌剂KF‑1喷洒在枇杷表皮上，对照组喷洒蒸馏水在枇杷表皮上，以外表皮见湿为准，接种好的枇杷放在室温下贮藏1、2、3、4、5天（拟定腐败率为10 %为货架期终点），分别对枇杷进行感官评价、可溶性固形物、质构、色差、腐败率和失重率的统计。

[0065] 生防菌剂KF‑1对白肉枇杷腐烂率的影响：由图11可知，随着贮藏时间的增加白肉枇杷的腐烂率增加，在第3天之前，对照组与浓度分别为8 %、9 %、10 %、11 %的处理组有明显差别，但在第3天之后，对照组的腐烂率远高于所有的处理组，其中10 %处理组的效果最佳。到贮藏第五天时，对照组的腐烂率为50 %，而10 %处理组的腐烂率为5.72 %。这可能是由于枯草芽孢杆菌抑制了腐烂菌的生长，致使处理组的腐烂率整体增长缓慢。

[0066] 生防菌剂KF‑1对白肉枇杷失重率的影响：由图12可知，白肉枇杷在贮藏期的第3天后，枯草芽孢杆菌/结冷胶生防菌剂KF‑1明显抑制了失重率的增加（p<.05）。其中浓度为10 %生防菌剂KF‑1对失重率的抑制效果较为明显，在贮藏期第5天时，白肉枇杷空白组的失重率与浓度10 %处理组的失重率分别10.6 %、4.4 %。

[0067] 生防菌剂KF‑1对白肉枇杷感官品质的影响：如图13和图14所示，随着常温贮藏时间的增加，白肉枇杷的感官评分呈下降趋势，这是由于贮藏时间的增加白肉枇杷会陆续出现腐烂或者脱水的情况，导致其色泽、香味、滋味以及组织状态劣化。

[0068] 生防菌剂KF‑1对白肉枇杷可溶性固形物的影响：由图15可知，白肉枇杷的可溶性固形物随着贮藏时间的增长而呈先减后增的趋势，且对照组的下降速率以及程度都高于处理组。可能是因为随着贮藏时间的增加，果实逐渐成熟且代谢和呼吸都增强，可溶性含量增加。

[0069] 生防菌剂KF‑1对白肉枇杷色差的影响：由图16可知，生防菌剂KF‑1处理后白肉枇杷的对照组与处理组之间L值以及C值都具有显著性差异（p<.05）。在第1d后，白肉枇杷的L值与C值均显著高于对照组（p<.05）。白肉枇杷的L值与C值在贮藏第1天时迅速降低，这可能是由于白肉枇杷的细胞结构受损，导致酚类物质与氧气反应，从而致使L值下降。在贮藏结束时，白肉枇杷不同浓度处理组的L值和C值分别是对照组的1倍以上，说明枯草芽孢杆菌/结冷胶生防菌剂KF‑1抑制白肉枇杷褐变有明显效果。

[0070] 生防菌剂KF‑1对白肉枇杷硬度的影响：如图17所示，对照组的白肉枇杷的硬度随着贮藏时间呈逐步降低的趋势，经过枯草芽孢杆菌/结冷胶生防菌剂KF‑1处理的白肉枇杷的硬度随着贮藏时间的增加呈先增后减的趋势。未处理的枇杷硬度呈下降趋势是因为随着时间增加开始腐烂而导致硬度降低，而处理后的枇杷硬度变大是因为枇杷未腐烂但是水果脱水了，枇杷果肉木质化从而测得的硬度就更大。

[0071] 本实施例制备的生防菌剂针对水果采后软腐病防控，并应用在白肉枇杷贮藏过程中的防病、保鲜中，除了应用在白肉枇杷外，还可以应用在其他水果当中，比如黄蟠桃，其原理均相同。制备的生防菌剂通过TEM观察可知，枯草芽孢杆菌的芽孢被很好的包裹在低酰基结冷胶和NaCl中，颗粒小且均匀，表面附着枯草芽孢杆菌的芽孢，提高芽孢存活率。在傅里叶红外光谱中发现，生防菌剂KF‑1与菌悬液非常相似，这表明枯草芽孢杆菌的芽孢很好的存活在生防菌剂KF‑1中，并且NaCl和低酰基结冷胶的特征峰几乎完全消失。

[0072] 该生防菌剂对白肉枇杷防病保鲜效果明显。将生防菌剂KF‑1用于新鲜的白肉枇杷保鲜，在室温（25 ℃‑30 ℃）贮藏条件下，发现与对照组相比较，生防菌剂KF‑1能更好的保持白肉枇杷感官品质减缓白肉枇杷的失重，降低白肉枇杷的腐烂，减少硬度、色差、TSS的下降，在白肉枇杷的保鲜上有潜在应用价值。

[0073] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。