[0001] 本公开涉及一种表面增强拉曼散射剂、和使用所述表面增强拉曼散射剂进行基于拉曼光谱的定量的方法、以及用于实施所述定量的试剂盒。本公开主张2020年9月14日在日本申请的日本特愿2020‑153721号的优先权，将其内容援引于此。

[0002] 拉曼光谱法是通过对物质照射光时产生的散射光的光谱来对物质进行鉴定的分析法。但是，拉曼光谱法的问题是灵敏度低。

[0003] 因此，近年来，盛行着关于如下表面增强拉曼散射法的研究，所述表面增强拉曼散射法通过激发Au、Ag等贵金属成分的局部电浆子(plasmon)时产生的局部电场的增强效果来放大拉曼散射，由此提高灵敏度。

[0004] 此外，在专利文献1中记载了在玻璃基板的表面上层叠经金属涂敷的二氧化硅而成的表面增强拉曼散射基板，记载了若在所述基板上载置检体，进行基于拉曼光谱法的分析，则能够得到增强拉曼散射的效果，能够以高灵敏度进行测定。

[0005] 此外，在非专利文献1中记载了在可挠性片上具有通过动态倾斜蒸镀法构筑的微小柱状体的表面增强拉曼散射剂。而且，在非专利文献2中记载了纳米纤维素担载贵金属纳米结构体而成的表面增强拉曼散射剂。

[0006] 现有技术文献

[0007] 专利文献

[0008] 专利文献1：日本特开2004‑170334号公报

[0009] 非专利文献

[0010] 非专利文献1：K.Xu,R.Zhou,K.Takei,and M.Hong,Adv.Sci.,2019,1900925.[0011] 非专利文献2：J.Chen,M.Huang,L.Kong,and M.Lin,Carbonhydr.Polymn.,205,516(2019).

[0037] [表面增强拉曼散射剂]

[0038] 本公开的表面增强拉曼散射剂包含：粘稠液体和分散在所述粘稠液体中的含贵金属的小薄片。而且，所述粘稠液体是25℃、剪切速度10(1/s)下的粘度为50mPa·s以上的粘稠液体。

[0039] 所述表面增强拉曼散射剂具有含贵金属的小薄片分散在所述粘稠液体中的构成。

[0040] 所述表面增强拉曼散射剂至少包含含贵金属的小薄片和所述粘稠液体，还可以含有一种或两种以上其他成分。作为其他成分，例如可列举出：增粘剂、表面活性剂、分散稳定剂(例如柠檬酸)、pH调节剂(例如甲苯、二甲苯、盐酸)、保存剂(例如中性福尔马林、叠氮化钠、百里酚、异噻唑啉酮化合物)、除臭剂、芳香剂等。

[0041] 作为所述表面增强拉曼散射剂，从能够使含贵金属的小薄片以高浓度与被检物质接触，并且能够通过保持所述接触状体来提高表面增强拉曼散射效果的方面考虑，特别优选为凝胶状分散液。

[0042] 所述表面增强拉曼散射剂的25℃、剪切速度为10(1/s)下的粘度例如为50～100000mPa·s，优选为100～50000mPa·s，特别优选为200～30000mPa·s。

[0043] 需要说明的是，所述粘度可以使用粘度/粘弹性测定装置(流变仪，商品名“RheoStress600”、HAAKE公司制)进行测定。

[0044] 根据所述表面增强拉曼散射剂，通过拉曼散射光与贵金属结构体表面的电磁波相互作用，所述拉曼散射光的强度得到方法。因此，即使检体中所含的被检物质浓度极少，也能够精度良好地进行定量。

[0045] 通常，能够通过拉曼光谱法测定的4,4’‑联吡啶浓度的极限充其量为10mmol/L左右。但是，若使用本公开的表面增强拉曼散射剂，则即使检测体中的4,4’‑联吡啶含量极少，也能够精度良好地进行定量。若使用本公开的表面增强拉曼散射剂，则例如能对1mmol/L的4,4’‑联吡啶进行测定。

[0046] 根据所述表面增强拉曼散射剂，也能够对雌马酚进行高灵敏度测定。已知在成人被测者具有雌马酚产生能力的情况下，尿中的雌马酚浓度通常为1～75μmol/L。因此，若使用所述表面增强拉曼散射剂对被测者的尿中所含的雌马酚进行定量，则能够容易地判断被测者是否具有雌马酚产生能力。

[0047] (含贵金属的小薄片)

[0048] 所述含贵金属的小薄片是具有如下构成的结构体：在小薄片的表面附着有贵金属成分。

[0049] 所述小薄片的平均厚度例如为10～50μm。所述小薄片的平均厚度通过将小薄片的重量除以密度求出体积，该体积除以小薄片的面积来求出。

[0050] 所述小薄片的当量圆直径(基于据图像解析法)的平均值例如为10～500μm，优选为20～50μm。

[0051] 所述小薄片的表面也可以是平坦的，也可以进行机械性或化学性表面处理。

[0052] 所述小薄片优选的是由具有羟基的无机氧化物构成的小薄片，例如可列举出：二氧化硅、滑石、云母、氧化钛、玻璃等的小薄片等。作为所述小薄片，其中，优选云母的小薄片。其原因在于，云母容易破碎而制成小薄片，并且具有作为表面增强拉曼散射的内部标准的功能。

[0053] 作为所述贵金属，优选选自金、银以及铜中的至少一种。

[0054] 所述含贵金属的小薄片优选的是如下结构体：在小薄片的表面具有贵金属层；或者在或小薄片的表面具有贵金属粒子；或者在小薄片的表面具有贵金属层并且具有贵金属粒子。

[0055] 作为所述含贵金属的小薄片，其中，从拉曼散射光的增强效果特别优异的方面考虑，优选的是如下结构体：在小薄片的表面林立有微小柱状体，所述微小柱状体的至少一部分由贵金属层或贵金属粒子形成，更优选的是具有在小薄片的表面如下构成的结构体：林立有具有贵金属层的微小柱状体，尤其优选的是具有如下构成的结构体：在小薄片的表面上具有贵金属层，并且在所述贵金属层的表面林立有具有贵金属层的微小柱状体。

[0056] 所述微小柱状体可以是由贵金属粒子构成的微小柱状体，即杆状的贵金属粒子，也可以是在由贵金属以外的物质构成的微小柱状层上层叠贵金属层而成的微小柱状体。

[0057] 作为所述含贵金属的小薄片，优选的是如下结构体：在小薄片的表面林立有由贵金属以外的物质构成的层与贵金属层层叠而成的微小柱状体。

[0058] 从利用从光源照射的光而产生等离子体共振的方面考虑，所述贵金属以外的其他物质优选为透明物质。作为所述透明物质，例如可列举出：SiO2、Ta2O5、TiO2、LiF等。

[0059] 作为设置贵金属层的部位，只要是微小柱状体的至少一部分即可，也可以是微小柱状体的顶端部、末端部，中央部中的任意处。此外，所述部位中，可以仅设置在一个部位，也可以设置在两个以上部位。

[0060] 微小柱状体优选相对于所述小薄片的表面垂直立起，但也可以稍微倾斜。此外，相邻的微小柱状体的间隔优选小至从光源照射的光的散射不成为问题的程度。相邻的微小柱状态也可以彼此接触。

[0061] 此外，从拉曼散射光的增强效果特别优异的方面考虑，所述微小柱状体优选呈各向异形状。作为所述各向异形状，从通过入射光相对于光轴向的透射特性产生差异，能够得到拉曼散射光的显著增强效果的方面考虑，优选将微小柱状体以与小薄片大致平行的面切断的情况下的、切断面的长尺寸方向长度与短尺寸方向长度之比(纵横比)为2以上。

[0062] 而且，在所述小薄片的表面上呈各向异形状的微小柱状体优选一边向一个方向取向一边形成。

[0063] 具有如下构成的结构体(1)例如可以经过如下工序制造：在薄板(优选由具有羟基的无机氧化物构成的薄板)上制造微小柱状的透明层的工序和制造贵金属层的工序、以及将薄板粉碎的工序，所述构成为在小薄片的表面，林立有透明层与贵金属层的层叠结构的各向异形状的微小柱状体的构成。而且，可以根据所希望的微小柱状体的结构来适当选择微小柱状的透明层的制造工序和贵金属层的制造工序的实施顺序。

[0064] 此外，在交替层叠透明层和贵金属层的情况下，只要交替重复微小柱状的透明层的制造工序和贵金属层的制造工序即可。

[0065] <微小柱状的透明层的制造工序>

[0066] 本工序是形成微小柱状的透明层的工序。例如，在薄板上直接形成微小柱状的透明层的情况下，预先使薄板相对于透明微小柱状体材料的蒸镀流的入射方向倾斜45°～88°左右，当形成厚度5～100nm的膜时，使薄板的面内方位反转180°。由此，能够得到在面上形成有在垂直方向上较长地延伸的各向异形状的透明层的薄板。

[0067] 需要说明的是，所述薄板是若将其粉碎时则能够制成小薄片的薄板，是由与小薄片相同的原材料形成的薄的板状物。

[0068] <贵金属层的制造工序>

[0069] 本工序是层叠贵金属层的工序。例如，在微小柱状的透明层上层叠贵金属层的情况下，在形成有经过上述工序得到的微小柱状的透明层的薄板的形成了透明层的面上，从与立起的所述透明层正交的方向，以蒸镀角45°～88°蒸镀贵金属，由此能够在在微小柱状层的顶端部蒸镀贵金属。由此，能够形成透明层与贵金属层层叠而成的微小柱状体。

[0070] 贵金属的蒸镀与制造透明微小柱状层的情况同样地，可以一边使薄板在面内反转一边进行，也可以不进行面内反转，仅从一个方向进行倾斜蒸镀。

[0071] 贵金属层的厚度可以根据使用的光源来适当选择，例如为50nm以下。

[0072] 经过以上的工序，能得到具有如下构成的结构体(2)：在薄板的表面林立有具有透明层/贵金属层层叠结构的各向异形状的微小柱状体。

[0073] <粉碎工序>

[0074] 为对于经过上述工序得到的结构体(2)，将其薄板部分粉碎的工序。在本工序中，从能够保持形成于薄板的表面的微小柱状体的结构并且将薄板粉碎的方面考虑，优选在粘稠液体中将所述结构体粉碎。

[0075] 作为在粉碎工序中使用的粘稠液体，优选使用任选地包含表面增强拉曼散射剂的粘稠液体，特别优选使用25℃、剪切速度10(1/s)下的粘度为50～100000mPa·s的粘稠液体(尤其优选凝胶状分散液)。由此，能够缓和粉碎的冲击，能够提高微小柱状体的结构的保持性。

[0076] 粉碎时间根据粉碎方法而不同，例如在使直径1.0mm的不锈钢球(SUS球)以转速为公转2000rpm、自转800rpm旋转而粉碎的情况下，粉碎时间为1～10分钟左右，其中，从能够提高表面增强拉曼散射效果的方面考虑，优选为4～9分钟，尤其优选为超过4分钟且小于6分钟。

[0077] (粘稠液体)

[0078] 所述粘稠液体是25℃、剪切速度10(1/s)下的粘度为50mPa·s以上的液体。作为所述粘稠液体，从提高被检物质的定量精度的观点考虑，优选使用拉曼活性低的液体。

[0079] 其中，从能够使含贵金属的小薄片以高浓度与被检物质接触，并且能够通过保持所述接触状体来提高表面增强拉曼散射效果这一方面考虑，所述粘稠液体优选为凝胶状分散液。

[0080] 所述粘稠液体中包括水溶性溶剂和油性溶剂。所述粘稠液体中具体而言包括水、醇、油剂等溶剂。它们可以单独使用一种，或组合使用两种以上。

[0081] 作为所述醇，例如可列举出：甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇类；乙二醇、丙二醇、丁二醇、丙三醇等多元醇等。

[0082] 作为所述油剂，例如可列举出：矿物油、液体石蜡等烃油；向日葵油、澳洲坚果油、鳄梨油、杏仁油、小麦胚芽油、大米胚芽油、橄榄油、大豆油、玉米油、蓖麻油、牛油、霍霍巴油、月见草油、椰子油、山茶花油、玫瑰果油、角鲨烷、海龟油、貂油、蛋黄油、羊毛脂、鲸蜡、小烛树蜡、褐煤蜡、米糠蜡、羊毛脂蜡、虫胶等动植物油；己烷、环己烷、异十二烷、苯、甲苯、聚α烯烃、液体石蜡等烃油；四氢呋喃等醚类；四氯化碳、氯苯等卤代烃；煤油、汽油、轻油、重油等石油成分；二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷等硅油；辛基十二醇油酸酯、鲸蜡醇乙基己酸酯、三异辛酸甘油酯、新戊二醇二异辛酸酯等酯油；十六烷醇、油醇等高级醇；月桂酸、异硬脂酸、油酸等高级脂肪酸；芳香族羧酸、吡啶等。

[0083] 作为拉曼活性高的溶剂，例如可列举出：N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺(DMAA)、N‑甲基吡咯烷酮(NMP)、四氢呋喃(THF)、环己酮、内酰胺、内酯、N,N,N,N‑四甲基脲等。在使用这些溶剂的情况下，其使用量(在组合使用两种以上的情况下为它们的合计量)为所述表面增强拉曼散射剂所含的粘稠液体总量的例如优选为30重量％以下，更优选为20重量％以下，特别优选为10重量％以下，最优选为5重量％以下，尤其优选为1重量％以下。

[0084] (增粘剂)

[0085] 在所述溶剂的粘度低的情况下，可以添加增粘剂进行增粘。而且，增粘剂可以根据溶剂的种类来适当选择。

[0086] 在所述溶剂为水溶性溶剂的情况下，作为增粘剂，例如可列举出：羟乙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素等纤维素系高分子化合物；卡拉胶、瓜尔胶等植物系天然高分子化合物；黄原胶等微生物系天然高分子化合物；酪蛋白、明胶等动物系天然高分子化合物；羧甲基淀粉等淀粉系高分子化合物；聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、羧基乙烯基聚合物等乙烯基系高分子化合物；聚乙二醇、聚丙二醇、聚丙三醇等聚醚系高分子化合物；甲基葡萄糖苷聚氧乙烯、甲基葡萄糖苷聚氧丙烯等聚氧化烯改性糖类等。

[0087] 在所述溶剂为油性溶剂的情况下，作为增粘剂，例如可列举出：糖脂肪酸酯、12‑羟基硬脂酸、1,3；2,4‑二亚苄基‑D‑山梨糖醇、N‑月桂酰基‑L‑谷氨酸‑α,γ‑双正丁酰胺、苯脂肪酸酰胺、环己烷脂肪酸酰胺等。此外，在所述糖脂肪酸酯中，例如也包括：棕榈酸糊精、肉豆蔻酸糊精等糊精脂肪酸酯；硬脂酸菊粉等菊粉脂肪酸酯等。

[0088] [表面增强拉曼散射测定方法]

[0089] 本公开的表面增强拉曼散射测定方法是使用上述表面增强拉曼散射剂，基于表面增强拉曼散射分光法进行的测定方法。更详细而言，是如下方法：将使上述表面增强拉曼散射剂与检体接触而成的物质作为试验体，对通过对所述试验体照射激发光而显现的散射光进行分析，由此对所述试验体所含的物质进行鉴定、定量。

[0090] 作为使表面增强拉曼散射剂与检体接触方法，只要是能够使所述检体与所述表面增强拉曼散射剂中的含贵金属的小薄片的表面接触的方法，就没有特别限制，例如可列举出：在基材的表面固定所述表面增强拉曼散射剂，向其滴加液态的检体(在检体不是液态的情况下，制成液态)；在试样台等上将所述表面增强拉曼散射剂与液态的检体混合的方法等。

[0091] [雌马酚的测定方法]

[0092] 所述雌马酚的测定方法是利用上述表面增强拉曼散射测定方法，对检体所含的雌马酚进行测定(鉴定和/或定量)的方法。更详细而言，是如下方法：将使所述表面增强拉曼散射剂与检体接触的物质作为试验体，对当对所述试验体照射激发光时显现的散射光进行分析，由此对所述试验体所含的雌马酚进行定量。

[0093] 在所述雌马酚的测定方法中，通过对雌马酚中特征性地出现的峰，即在雌马酚中出现但在雌马酚类似物质中不出现的峰进行解析，能够选择性地对雌马酚和雌马酚类似物质混合存在的检体中的雌马酚进行定量。

[0094] 作为所述雌马酚中特征性地出现的峰，根据使用的测定设备等实验条件而会产生‑1 ‑1 ‑1一些偏差，例如可列举出：在选自1530～1630cm 、1230～1330cm 、1140～1240cm 、以及‑1 ‑1
535～635cm 的组中的至少一个波数区域出现，优选在选自1570～1590cm 、1270～1290cm‑1 ‑1 ‑1
、1180～1200cm 、以及570～590cm 的组的至少一个波数区域出现的峰(＝在所述波数区域具有峰位置的峰)。

[0095] 根据所述雌马酚的测定方法，使用所述表面增强拉曼散射剂来放大检体中所含的雌马酚的拉曼散射，因此能够进行雌马酚的选择性且高灵敏度的测定。

[0096] [雌马酚产生能力的检查方法]

[0097] 所述雌马酚产生能力的检查方法是检查被测者是否具有雌马酚产生能力的方法，所述雌马酚产生能力的检查方法包括：通过上述雌马酚的测定方法对从被测者采集的检体中的雌马酚进行测定。

[0098] 在被测者具有雌马酚产生能力的情况下，被测者在肠内具有雌马酚产生菌，当被测者摄取作为异黄酮的一种的大豆苷元时，雌马酚产生菌将大豆苷元代谢而生成雌马酚。然后，生成的雌马酚由肠道吸收而进入血中，其一部分向尿中排出。因此，若将尿、血液或肠内容物、对它们实施离心分离而得到的上清液用作检体，对所述检体所含的雌马酚进行定量，则能够容易地判断被测者是否具有雌马酚产生能力(或被测者是否具有雌马酚产生菌)。

[0099] 作为所述雌马酚产生菌，例如可列举出：属于乳球菌(Lactococcus)属、斯莱克氏菌(Slackia)属、安德克氏菌(Adlercreutzia)属、非消化糖杆菌(Asaccharobacter)属以及伊格尔兹氏菌(Eggerthella)属的微生物。更具体而言，例如可列举出：格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)、Adlercreutzia equolifaciens、Asaccharobacter celatus以及伊格尔兹氏菌Eggerthella sp.YY7918。

[0100] 在所述雌马酚产生能力的检查方法中，通过上述雌马酚的测定方法，以雌马酚选择性地且高灵敏度地对雌马酚进行测定，因此能够精度良好地判定有无雌马酚产生能力或是否具有雌马酚产生菌。

[0101] [表面增强拉曼散射测定试剂盒]

[0102] 本公开的表面增强拉曼散射测定试剂盒是用于通过表面增强拉曼散射分光法进行测定的试剂盒，至少包含上述表面增强拉曼散射剂。

[0103] 所述试剂盒中，除了具备上述表面增强拉曼散射剂以外，还可以具备其他构成，优选包括能够识别拉曼峰的装置。作为所述装置，优选拉曼光谱测定装置(例如，光源、去除瑞利散射光的滤光器、将拉曼散射光分解为光谱的分光器、检测器等)。

[0104] 作为所述光源，例如优选发射激光(优选近红外激光)的光源。

[0105] 作为所述测定试剂盒的使用方法，例如可列举出以下的方法。

[0106] 1.通过使所述表面增强拉曼散射剂与检体接触，形成试验体。

[0107] 2.对试验体照射来自光源的照射光，显现曼散射光和瑞利散射光。

[0108] 3.使所述散射光通过滤光器，去除瑞利散射光。

[0109] 4.将去除了瑞利散射光后的散射光导入至分光器，将导入后的散射光在分光器中分解为光谱。

[0110] 5.用检测器检测光谱。

[0111] 作为所述光源，例如优选发射激光(优选近红外激光)的光源。

[0112] 若使用所述测定试剂盒，则能够利用所述表面增强拉曼散射剂来放大被检物质的拉曼散射。因此，能够进行被检物质的微量定量。

[0113] 此外，若使用所述测定试剂盒，则能够选择性且高灵敏度地对雌马酚进行鉴定和/或定量，因此所述测定试剂盒例如也可以是雌马酚测定试剂盒。

[0114] 而且，若使用所述测定试剂盒，将被测者的尿、血液或肠内容物、或它们的上清液用作检体来进行雌马酚的鉴定和/或定量，则能够容易地判定被测者是否具有雌马酚产生能力。因此，所述测定试剂盒也可以是雌马酚产生能力的检查用试剂盒。

[0115] 以上，本公开的各构成和各构成的组合等是一个例子，可以在不脱离本公开的主旨的范围内适当地进行构成的附加、省略、置换以及变更。此外，本公开不由实施方式限定，仅由专利权利要求书的记载限定。

[0116] 实施例

[0117] 以下，通过实施例对本公开更具体地进行说明，但本公开不由这些实施例限定。

[0118] 制备例1(具有如下构成的结构体的制作：林立有具有透明层/贵金属层层叠结构的微小柱状体)

[0119] 具有如下构成的结构体的表面增强拉曼散射基板通过日本专利第4783907号所记载的态倾斜蒸镀法制作出，所述构成为林立有具有透明层/贵金属层层叠结构的各向异形状的微小柱状体的构成。详细而言，用下述方法制作。

[0120] 将切成50×50mm2的大小的云母基板劈开至能够保持其形状的15～30μm的厚度，进行紫外线清洗，得到了云母薄板。

[0121] 然后，将云母薄板安装于动态倾斜蒸镀装置，排气至成为3×10‑4Pa以下，按照Ag镜面层、SiO2微小柱状层、Ag层的顺序进行了成膜。

[0122] 首先，将银以蒸镀角0°、平均蒸镀速率约0.20nm/s蒸镀至膜厚200nm，制作出Ag镜面层。

[0123] 接着，从Ag镜面层的上方将纯度99.99％的二氧化硅(SiO2)的粒子以蒸镀角为0°、平均蒸镀速率0.2～0.3nm/s以105nm的膜厚蒸镀后，使用作为动态倾斜蒸镀法的一种的连续双向倾斜蒸镀法，构筑出SiO2微小柱状层。在连续双向倾斜蒸镀法中，每次以约82°的蒸镀角蒸镀为膜厚20nm，使该云母薄板快速旋转180°，进而蒸镀至20nm的膜厚，反复进行了30次该云母薄板的反转。

[0124] 最后，从SiO2微小柱状层的上方，对银以70°的蒸镀角、平均蒸镀速率0.20nm/s进行电子束蒸镀，构筑出平均膜厚约8nm的Ag层。

[0125] 如此，得到了如下结构体：在设有Ag镜面层的云母薄板表面，林立有SiO2层与贵金属层层叠而成的构成的微小柱状体。

[0126] 实施例1(分散在粘稠液体中的含贵金属的小薄片的制作)

[0127] 向30mm的带盖容器中加入超纯水和羟乙基纤维素(HEC)粉末(SE400，Daicel FineChem Ltd.)，用搅拌机搅拌2分钟。搅拌时的转速设为公转2000rpm、自转800rpm。HEC浓度设为10重量％。由此，能够得到粘稠液体。需要说明的是，使用流变仪(商品名“Physica MCR301”、Anton Paar公司制)，在温度25℃、剪切速度10(1/s)的条件下对粘稠液体的粘度进行了测定，其结果为约104Pa·s。

[0128] 向底面的直径30mm、容量为12mL的带盖容器中加入将所得到的粘稠液体1.0g。接2
着，将制备例1中得到的结构体9.0cm 切成约5mm见方，以云母薄板侧与粘稠液体相接的方式放入。而且，加入直径1.0mm的不锈钢球(SUS球)搅拌，制作出分散液。需要说明的是，所述搅拌以如下方式进行：转速固定为公转2000rpm、自转800rpm，使搅拌时间按每1分钟进行变化直至变为10分钟。

[0129] 可知在本条件下，搅拌时间为4～6分钟时，能够得到所述结构体的小薄片分散在粘稠液体中而成的凝胶状分散液。

[0130] 实施例2(表面增强拉曼散射的测定)

[0131] 在实施例1中，对以搅拌时间5分钟得到的凝胶状分散液1进行下述表面增强拉曼散射的测定。

[0132] 在厚度1.5mm的硅橡胶设置5×5mm2的孔，制作加入凝胶状分散液1的池(cell)，向凝胶状分散液1的上表面滴加1mM的4,4’‑联吡啶水溶液的30μL后，盖上盖玻片。经过60分钟后，将所述池放置在(株)Lambda Vision制的拉曼分光器RAM200的测定部位，照射785nm(100mW)的激光1秒，将两次平均，获取到拉曼散射光谱(图1)。将4,4’‑联吡啶的典型的表面增强拉曼散射光谱示于图1。

[0133] 根据以上，能够确认到实施例1中得到的凝胶状分散液1的表面增强拉曼散射效果优异。

[0134] 实施例3

[0135] 使用将搅拌时间在1分钟～10分钟的范围内变更而得到的分散液，除此以外，与实施例2同样地进行表面增强拉曼散射的测定，获取到拉曼散射光谱。然后，按每个分散液的‑1搅拌时间对1600cm 周边的峰高进行标示(图2)。

[0136] 根据图2，在使用了搅拌时间为5分钟的分散液的情况下，得到了最强的表面增强拉曼散射效果。

[0137] 比较例1

[0138] 向金胶体中加入盐使其凝聚后，立即分散在HEC的10重量％粘稠液体中。需要说明的是，分散方法通过以与实施例1相同的顺序搅拌来进行。由此，得到了凝胶状分散液3。

[0139] 使用凝胶状分散液3来代替凝胶状分散液1，除此以外，与实施例2同样地获取到4,4’‑联吡啶的拉曼散射光谱(图3)。

[0140] 根据图3，即使使用了包含金胶体的凝胶状分散液，也未确认到4,4’‑联吡啶的特征性的峰。

[0141] 作为以上的总结，以下附记本公开的构成及其变形。

[0142] [1]一种表面增强拉曼散射剂，其具有含贵金属的小薄片分散在粘稠液体中的构成，所述粘稠液体是25℃、剪切速度10(1/s)下的粘度为50mPa·s以上的粘稠液体。

[0143] [2]一种表面增强拉曼散射剂，其具有含贵金属的小薄片分散在凝胶状分散液中的构成。

[0144] [3]根据[1]或[2]所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述贵金属为金、银或铜。

[0145] [4]根据[1]～[3]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述含贵金属的小薄片是如下结构体：在小薄片的表面上林立有微小柱状体，所述微小柱状体的至少一部分由贵金属层或贵金属粒子形成。

[0146] [5]根据[1]～[4]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述含贵金属的小薄片是具有如下构成的结构体：在小薄片的表面上林立有具有贵金属层的微小柱状体。

[0147] [6]根据[1]～[5]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述含贵金属的小薄片是具有如下构成的结构体：在小薄片的表面具有贵金属层，并且在所述贵金属层的表面林立有具有贵金属层的微小柱状体。

[0148] [7]根据[1]～[6]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述含贵金属的小薄片是具有如下构成的结构体：在小薄片的表面，呈各向异形状的微小柱状体一边向一个方向取向一边林立。

[0149] [8]根据[1]～[7]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述含贵金属的小薄片是具有如下构成的结构体：在小薄片的表面上林立有具有由贵金属以外的物质构成的透明层和贵金属层的微小柱状体。

[0150] [9]根据[1]～[8]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述含贵金属的小薄片是具有如下构成的结构体：在小薄片的表面林立有具有由选自SiO2、Ta2O5、TiO2以及LiF中的至少一种构成的层和贵金属层的微小柱状体。

[0151] [10]根据[1]～[9]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，根据权利要求1～3中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述小薄片是由具有羟基的无机氧化物构成的小薄片。

[0152] [11]根据[1]～[10]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述小薄片是玻璃、二氧化硅、滑石、云母或氧化钛的小薄片。

[0153] [12]根据[1]～[11]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述小薄片是平均厚度为10～50μm的小薄片。

[0154] [13]根据[1]～[12]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂，其中，所述小薄片是基于图像解析法的当量圆直径的平均值为10～500μm的小薄片。

[0155] [14]一种表面增强拉曼散射测定试剂盒，其包括如[1]～[13]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂。

[0156] [15]一种表面增强拉曼散射测定方法，其使用如[1]～[13]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂来进行表面增强拉曼散射测定。

[0157] [16]一种表面增强拉曼散射剂的制造方法，其是如[1]～[13]中任一项所述的表面增强拉曼散射剂的制造方法，所述制造方法包括：将含贵金属的薄板在25℃、剪切速度10(1/s)下的粘度为50mPa·s以上的粘稠液体中粉碎的工序。

[0158] 工业上的可利用性

[0159] 当使用本公开的表面增强拉曼散射剂时，能够高灵敏度地识别雌马酚中特征性的拉曼峰。因此，所述表面增强拉曼散射剂优选用作雌马酚定量用表面增强拉曼散射剂。