骨复合材料以及用于制备骨复合材料的组合物 发明领域 [0001] 本发明涉及组织制造。特别地，本文公开了用于骨复合材料(bone composite)的 3D打印的组合物。这些组合物允许骨复合材料从设计图中在具有准确度和保真度的情况下被打印出来。本发明还涉及3D打印骨复合材料的方法，以及从本文公开的组合物可获得的骨复合材料。 [0002] 背景 [0003] 骨组织移植物被广泛用于整形外科手术、神经外科手术、颌面外科手术和牙科手术。虽然有效，但自体骨移植物和同种异体骨移植物的使用具有许多限制。 [0004] 自体骨移植物从患者获取，并且因此它们需要另外的手术并且存在与其获取相关的增加的风险，诸如感染、失血和在供体部位处结构完整性受损的风险。 [0005] 可选择地，承重的同种异体移植物骨可以用作自体骨的替代品。主要地，它们从尸体中提取并且避免了与从活体供体中获取自体骨相关的复杂性和患者暴露。然而，围绕无菌性、适用性和长期供应的问题仍然存在。 [0006] 在使用之前，同种异体移植物骨组织和自体移植物骨组织两者需要针对由外科医生指定的具体应用进行成形。自然地，关于成形的骨移植物的无菌性的考虑是最重要的。在一些情况下，可行的骨移植物替代品的植入受到从活体供体或已故供体中提取的可用的形状和尺寸的限制。 [0007] 合成骨替代材料和骨碎片提供了更柔韧的原材料，并且可以容易地被重塑和再成形，然而它们不立即为患者提供机械支撑。这样的材料通常用于填充形状奇怪的骨缺损，然而，它们不良好地适合于将骨包裹或表面重修。 [0008] 人同种异体移植物骨组织的使用在整形外科手术中是非常常见的。不变地，同种异体移植物组织充当用于包含具有骨传导性质、骨诱导性质和/或成骨性质的材料的组合物的支架。合适的材料包括蛋白质和/或干细胞。 [0009] 国际专利公布第WO2012118843号通过提供任选地涂覆有尤其是骨形态发生蛋白的生物相容性模块化支架来解决上文提及的同种异体骨移植物和自体骨移植物的缺点。 [0010] 在现有技术中还已经提出利用3D打印技术和生物油墨作为改善传统的同种异体骨移植物和自体骨移植物在骨置换疗法中的缺陷的替代方案。例如，国际专利公布第WO2018078130公开了包括纤维素纳米纤丝、含钙颗粒和活细胞诸如间充质干细胞、成骨细胞或诱导的多能干细胞的可打印的生物油墨。纤维素纳米纤丝对于骨构建体(bone construct)的结构完整性是至关重要的。 [0011] 尽管现有技术状态如此，对于在骨置换疗法中使用传统的同种异体骨移植物和自体骨移植物的另外的替代品仍然存在需求。这样的替代品应该能够在受控的、无菌的制造条件下被制造。对此至关重要的是材料按照外科医生或其他健康专业人员的规范以精确且准确的方式成形的能力。自然地，所有这样的替代品都应该呈现出机械完整性，并且在移植后能够提供结构支撑和承重支撑。理想地，材料应该是生物相容性的，并且能够对于具有骨传导性质、骨诱导性质和/或成骨性质的生物活性材料无毒。 [0012] 发明概述 [0013] 当在本文中参考本发明使用时，词语“包括(comprises)/包括(comprising)”和词语“具有/包括(including)”用于指定所陈述的特征、整数、步骤或组分的存在，但不排除一种或更多种其他特征、整数、步骤、组分或其组的存在或添加。 [0014] 本领域技术人员应当理解，本文公开的具体实施方案不应当被孤立地阅读，并且本说明书意图所公开的实施方案被彼此组合地阅读，而不是单独地阅读。因此，每种实施方案可以用作用于修改或限制本文公开的其他实施方案的基础。 [0015] 浓度、量和其他数值数据可以在本文中以范围格式表述或呈现。应当理解，这样的范围格式仅为了方便和简洁起见而被使用，并且因此应灵活地被解释为不仅包括作为范围的限值明确叙述的数值，而且还包括该范围内涵盖的所有单独的数值或子范围，如同每个数值和子范围被明确地叙述。作为说明，“10至100”的数值范围应被解释为不仅包括10至 100的明确叙述的值，而且还包括在所指示的范围内的单独的值和子范围。因此，包括在该数值范围内的是诸如10、11、12、13、...、97、98、99、100的单独的值以及诸如从10至40、从25至40和50至60的子范围，等等。此相同的原则适用于仅叙述一个数值的范围，诸如“至少 10”。此外，无论范围的广度或描述的特性如何，都应适用这样的解释。 [0016] 本发明的组合物 [0017] 在第一方面中，本发明提供了一种用于骨复合材料的三维打印的多部分组合物，该多部分组合物包括： [0018] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的载体中的纤维蛋白原； [0019] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶；以及[0020] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源，[0021] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0022] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0023] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s， [0024] 并且另外其中第三部分是独立的组合物，或者第三部分与多部分组合物的第一部分或第二部分混合，使得多部分组合物的至少第一部分和第二部分在通过三维打印设备打印之前不混合。 [0025] 如本文使用的，术语旋转粘度计指的是基于测量当转子在液体中以恒定角速度(旋转速度)旋转时作用在转子上的力(扭矩)的原理工作的设备。旋转粘度计用于测量牛顿液体(剪切无关粘度)或非牛顿液体(剪切相关粘度或表观粘度)的粘度。本发明的多部分组合物的第三部分是剪切稀化的，即它们具有剪切相关粘度；因此，有必要指定在测量粘度时的剪切速率。对于另外的信息，技术人员参考ASTM D2196‑18e1:Standard Test Methods for Rheological Properties of Non‑Newtonian Materials by Rotational Viscometer，其内容通过引用并入本文。 [0026] 在一种实施方案中，本发明提供了两部分组合物，其中： [0027] 第一部分(纤维蛋白原)与第三部分混合，或 [0028] 第二部分(凝血酶)与第三部分混合， [0029] 并且其余的未混合的部分是独立的。 [0030] 在一种实施方案中，本发明的两部分组合物包括： [0031] 与第三部分混合的第一部分(纤维蛋白原)，并且 [0032] 第二部分(凝血酶)是独立的。 [0033] 在另外的实施方案中，本发明提供了三部分组合物，其中第一部分、第二部分和第三部分是独立的。 [0034] 有利地，本发明的组合物允许具有限定的、复杂的且通常不规则的形状的骨结构的准确且精确的打印。因此，本发明的组合物解决了围绕骨移植物形状和尺寸的重要的未满足的需求，对于尸体和自体骨移植物，骨移植物形状和尺寸可能是存在问题的。 [0035] 本发明的组分都是天然材料或生物相容性材料，并且因此存在低毒性风险。此外，本发明的组合物的单独的部分可以被灭菌，因此在骨构建体被打印并移植到患者体内后降低任何相关感染的风险。合适的、非限制性的灭菌方法包括无菌过滤和辐射。此外，本发明的组合物可以在无菌环境中打印，以产生无菌骨构建体。 [0036] 进一步有利地，本发明的组合物提供具有能够提供承重支撑的合意的结构性质和机械性质的骨构建体。在一种实施方案中，本发明的组合物不存在任何另外的增强材料。例如，本发明的多部分组合物可以不存在任何聚合物材料或纤维材料，所述聚合物材料或纤维材料在打印后向骨构建体增加另外的强度和机械支撑。增加强度和机械支撑的聚合物材料的非限制性实例可以包括聚(环氧乙烷)‑聚(环氧丙烷)共聚物。纤维材料可以是植物或动物来源的。例如，纤维材料可以来源于棉花、亚麻、大麻、黄麻、竹子、再循环木材、废纸、纤维素。特别地，本发明的组合物可以缺少纤维素纤维。 [0037] 可选择地，在另外的实施方案中，如果有必要，本发明的组合物可以包含另外的增强材料。例如，本发明的多部分组合物可以包含聚合物材料或纤维材料，所述聚合物材料或纤维材料在打印后向骨构建体增加另外的强度和机械支撑。合意地，聚合物材料和纤维材料是生物相容的。例如，纤维材料可以是天然植物或动物来源的。例如，纤维材料可以选自由以下组成的组：棉花、亚麻、大麻、黄麻、竹子、再循环木材、废纸和纤维素。增加强度和机械支撑的聚合物材料的非限制性实例可以包括聚(环氧乙烷)‑聚(环氧丙烷)共聚物。 [0038] 进一步有利地，本发明的多部分组合物能够为生物活性材料诸如细胞、蛋白质和生长因子提供可行的、无毒的环境。合意地，生物活性材料诸如细胞和蛋白质具有骨传导性质、骨诱导性质和/或成骨性质。例如，生物活性材料可以是能够分化成任何细胞类型的未成熟的细胞、骨形态发生蛋白及其组合。例如，生物活性材料可以包括人间充质干细胞(hMSC)、骨形态发生蛋白及其组合。 [0039] 如本文使用的，术语骨传导、骨诱导和成骨是相互关联的。特别地，成骨是骨形成的过程。骨诱导是诱导成骨的过程，并且通常表现为刺激未分化的未成熟的细胞以变成活性的成骨细胞。骨传导是用于描述用作用于新骨生长的支架并有利于新骨生长的移植物材料的术语。 [0040] 在一种实施方案中，本发明的多部分组合物包含hMSC。hMSC可以存在于本发明的 3 多部分组合物的第三部分内。合适地，hMSC可以以每mL的药学上可接受的水凝胶约1*10 个 10 hMSC至约5*10 个hMSC之间的浓度存在。例如，hMSC可以以每mL的药学上可接受的水凝胶约 4 9 5 8 5 1*10 个hMSC至约5*10个hMSC之间，诸如约1*10 个hMSC至约5*10 个hMSC，例如约1*10 个 7 hMSC至约5*10个hMSC的浓度存在。在一种实施方案中，hMSC可以以每mL的药学上可接受的 6 6 水凝胶约1*10个hMSC至约9*10个hMSC之间的浓度存在。 [0041] 在另外的实施方案中，本发明的多部分组合物可以包含药理学活性剂，并且可以用作其储库(depot)或储器(reservoir)。例如，本发明的组合物可以包含化学治疗剂、抗肿瘤剂、抗炎剂、抗感染剂及其组合。 [0042] 纤维蛋白原和凝血酶 [0043] 本发明内使用的纤维蛋白原可以从人血浆中获得和纯化。可选择地，本发明内使用的纤维蛋白原可以是重组的，并且从重组工艺中获得和纯化。在一种实施方案中，本发明的多部分组合物的第一部分可以包含处于在约5mg/mL至约200mg/mL之间，例如从约25mg/mL至约175mg/mL，诸如约50mg/mL至约150mg/mL，合适地从约75mg/mL至约125mg/mL的浓度的纤维蛋白原。在一种实施方案中，本发明的多部分组合物的第一部分可以包含从约75mg/mL至约100mg/mL的纤维蛋白原。本发明的多部分组合物的第一部分可以包含约80mg/mL的纤维蛋白原。 [0044] 类似地，本发明内使用的凝血酶可以从人血浆中获得和纯化。可选择地，本发明内使用的凝血酶可以是重组的，并且从重组工艺中获得和纯化。在一种实施方案中，本发明的多部分组合物的第二部分可以包含处于在约25IU/mL和1500IU/mL之间，例如从约50IU/mL至约1250IU/mL，诸如约75IU/mL至约1000IU/mL，合适地从约100IU/mL至约750IU/mL，例如从约250IU/mL至约750IU/mL，诸如从约400IU/mL至约600IU/mL的浓度的凝血酶。在一种实施方案中，本发明的多部分组合物的第二部分可以包含从约450IU/mL至约550IU/mL的凝血酶。本发明的多部分组合物的第二部分可以包含约500IU/mL的凝血酶。 [0045] 技术人员将理解，纤维蛋白原和凝血酶是人凝血级联中的组分。凝血酶作用于纤维蛋白原以产生聚合物纤维蛋白，当本发明的多部分组合物被混合时，该聚合物纤维蛋白导致胶凝类型转变。通过凝血酶(在第二部分中)的作用将纤维蛋白原(在第一部分中)转化为纤维蛋白不需要是100％定量的。本发明还预期非定量转化，其中最终的骨构建体可以包含纤维蛋白原、纤维蛋白和凝血酶的混合物。此外，在使用术语纤维蛋白原和凝血酶时，本说明书在其范围内包括纤维蛋白原和凝血酶的衍生物，所述纤维蛋白原和凝血酶的衍生物： [0046] 1.不实质性地改变两种蛋白质之间的相互作用；或 [0047] 2.不实质性地改变所获得的最终纤维蛋白产物。 [0048] 合意地，本发明的多部分组合物的第一部分包括在包含至少一种氨基酸的药学上可接受的媒介物中配制的纤维蛋白原。氨基酸可以选自由以下组成的组：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合。例如，氨基酸可以选自由以下组成的组：精氨酸、谷氨酸、异亮氨酸及其组合。在一种实施方案中，本发明的多部分组合物的第一部分包括在包含至少一种氨基酸和柠檬酸盐缓冲液的药学上可接受的媒介物中配制的纤维蛋白原。在另外的实施方案中，多部分组合物的第一部分可以另外包含钠盐，诸如氯化钠。 [0049] 在又另外的实施方案中，本发明的多部分组合物的第一部分包括在包含至少一种氨基酸、柠檬酸盐缓冲液和钠盐诸如氯化钠的药学上可接受的媒介物中配制的纤维蛋白原。在该实施方案中，氨基酸可以选自由以下组成的组：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合。例如，氨基酸可以选自由以下组成的组：精氨酸、谷氨酸、异亮氨酸及其组合。 [0050] 优选地，本发明的多部分组合物的第二部分包括在包含溶解的钙的药学上可接受的媒介物中配制的凝血酶。药学上可接受的媒介物可以包含可溶性钙盐。例如，钙盐可以是氯化钙。在另外的实施方案中，本发明的多部分组合物的第二部分还可以包含白蛋白和/或至少一种氨基酸。例如，本发明的多部分组合物的第二部分可以包含钙盐和白蛋白(除了凝血酶之外)。例如，本发明的多部分组合物的第二部分可以包含钙盐和至少一种氨基酸(除了凝血酶之外)。在一种实施方案中，本发明的多部分组合物的第二部分可以包含钙盐、白蛋白和至少一种具有不带电荷的侧链的氨基酸(除了凝血酶之外)。在一种实施方案中，氨基酸选自由以下组成的组：甘氨酸、丙氨酸及其组合。钙盐可以以每IU的凝血酶约0.01mM至约2.0mM，例如每IU的凝血酶约0.01mM至约1.0mM，诸如每IU的凝血酶约0.01mM至约0.1mM的浓度存在。 [0051] 水凝胶 [0052] 关于本发明的多部分组合物的第三部分，药学上可接受的水凝胶可以选自由以下组成的组：亲水性多糖、明胶水凝胶及其组合。在本说明书内，提及水凝胶的组成亲水性聚合物例如海藻酸盐、明胶等将被解释为提及使用该亲水性聚合物制备的水凝胶。 [0053] 如本文使用的，术语水凝胶应被解释为具有亲水性聚合物的三维(3D)网络的材料，该材料可以在水中溶胀并保持大量水，同时由于单独的聚合物链的化学或物理交联而维持结构。本发明的范围内的水凝胶可以包含至少10％w/w的水，例如至少20％w/w的水，诸如至少30％w/w的水。水凝胶可以包含大于40％w/w的水；在一些实施方案中，水凝胶可以包含大于50％w/w的水。 [0054] 例如，药学上可接受的水凝胶可以选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合。在一种实施方案中，药学上可接受的水凝胶可以选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸及其组合。在一种实施方案中，药学上可接受的水凝胶是海藻酸盐。 [0055] 如本文使用的，术语海藻酸盐指的是通常从天然来源诸如海藻或细菌中获得的天然存在的阴离子聚合物。该材料是生物相容的，具有低毒性，并且可以通过添加二价阳离子 2+ 诸如Ca 而经历轻度胶凝。海藻酸盐是包含(1,4)‑连接的β‑D‑甘露糖醛酸(M)残基和α‑L‑古罗糖醛酸(G)残基的嵌段的嵌段共聚物。嵌段包括连续的G残基(例如，GGGGGG)、连续的M残基(例如，MMMMMM)和交替的M残基和G残基(例如，GMGMGM)。从不同来源提取的海藻酸盐在M含量和G含量以及每个嵌段的长度方面不同。在不意图通过理论限制本发明的情况下，据信海藻酸盐的G‑嵌段被认为参与分子间交联以形成水凝胶。 [0056] 本发明的范围内的海藻酸盐包括(1,4)‑连接的β‑D‑甘露糖醛酸(M)单元和α‑L‑古罗糖醛酸(G)单元的简单化学衍生物，例如但不限于醚衍生物、酯衍生物、碳酸酯衍生物和氨基甲酸乙酯衍生物。 [0057] 本发明的范围内的海藻酸盐可以具有在约10,000g/mol和约500,000g/mol之间的分子量。例如，本发明的范围内的海藻酸盐可以具有从约40,000g/mol至约400,000g/mol，诸如约50,000g/mol至约300,000g/mol，合适地从约60,000g/mol至约250,000g/mol的分子量。在一种实施方案中，用于本发明的海藻酸盐可以具有约75,000g/mol至约200,000g/mol的分子量。 [0058] 可用于本发明的海藻酸盐可以具有在约10kDa和约500kDa之间的分子量。例如，本发明的范围内的海藻酸盐可以具有从约40kDa至约400kDa，诸如约50kDa至约300kDa，合适地从约60kDa至约250kDa的分子量。在一种实施方案中，用于本发明的海藻酸盐可以具有约 75kDa至约200kDa的分子量。 [0059] 在本发明的组合物内有用的海藻酸盐可以具有≤2.5，诸如≤2，例如≤1.5，诸如≤1.0，合适地≤0.5的G/M比率。在一种实施方案中，在本发明的组合物内有用的海藻酸盐可以具有≤1的G/M比率。 [0060] 适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有按照通过旋转粘度计在25‑1 ℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约100Pa·s，诸如约1Pa·s至约80Pa·s，例如约1Pa·s至约60Pa·s，合适地约3Pa·s至约40Pa·s，诸如约3Pa·s至约30Pa·s，例如约4Pa·s至约30Pa·s，合适地约4Pa·s至约25Pa·s的表观粘度。 [0061] 适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在50,000g/mol至约300, 000g/mol之间的分子量，以及≤2的G/M比率。适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在50,000g/mol至约300,000g/mol之间的分子量，以及按照通过旋转粘度计在25‑1 ℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。 [0062] 在另一种实施方案中，适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在 75,000g/mol至约200,000g/mol之间的分子量，以及≤1的G/M比率。可选择地，适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在75,000g/mol至约200,000g/mol之间的分子‑1 量，以及按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约 1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。 [0063] 适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在50,000g/mol至约300, 000g/mol之间的分子量，≤2的G/M比率，以及按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压‑1 力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。 [0064] 在另一种实施方案中，适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在 75,000g/mol至约200,000g/mol之间的分子量，≤1的G/M比率，以及按照通过旋转粘度计在‑1 25℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。 [0065] 如本文使用的，术语透明质酸指的是包括β4‑葡萄糖醛酸‑β3‑N‑乙酰葡糖胺的重复二糖的糖胺聚糖多糖。透明质酸聚合物通过从动物组织中提取材料或通过在合适的生物体诸如细菌中重组表达在商业上大量生产。 [0066] 用于制备本发明的水凝胶的透明质酸可以具有约5kDa至约10,000kDa，例如约 50kDa至约9000kDa，诸如约100kDa至约8000kDa，合适地约500kDa至约7000kDa，例如约 1000kDa至约5000kDa，诸如约1000kDa至约4000kDa，合适地约1000kDa至约3000kDa，例如约 1000kDa至约2500kDa，诸如约1500kDa至约2500kDa的分子量。 [0067] 适合于在本发明的组合物内使用的透明质酸可以具有按照通过旋转粘度计在25‑1 ℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约100Pa·s，诸如约1Pa·s至约80Pa·s，例如约1Pa·s至约60Pa·s，合适地约3Pa·s至约40Pa·s，诸如约3Pa·s至约30Pa·s，例如约4Pa·s至约30Pa·s，合适地约4Pa·s至约25Pa·s的表观粘度。 [0068] 适合于在本发明的组合物中使用的透明质酸可以具有约1000kDa至约4000kDa的‑1 分子量，以及按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。例如，适合于在本发明的组合物中使用的透明质酸可以具有约1000kDa至约2500kDa的分子量，以及按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的约1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。 [0069] 如本文使用的，术语明胶指的是通过热水解从动物诸如家养的牛、鸡、猪、鱼以及甚至一些昆虫的皮肤、骨、肌腱和白色结缔组织中提取的胶原蛋白而产生的肽和蛋白质的混合物。来自动物的明胶的来源是皮和骨，并且来自植物的明胶的来源是淀粉、海藻酸盐、果胶、琼脂和角叉菜胶。明胶是高分子量多肽的异质性混合物，其可以溶胀并且吸附5倍‑10倍于它们的重量的水以形成水凝胶。明胶是可生物降解的，并且无毒的。 [0070] 适合于在本发明的组合物内使用的明胶可以具有按照通过旋转粘度计在25℃和1‑1 个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约100Pa·s，诸如约1Pa·s至约 80Pa·s，例如约1Pa·s至约60Pa·s，合适地约3Pa·s至约40Pa·s，诸如约3Pa·s至约 30Pa·s，例如约4Pa·s至约30Pa·s，合适地约4Pa·s至约25Pa·s的表观粘度。 [0071] 生物相容性无机材料 [0072] 关于本发明的多部分组合物的第三部分，生物相容性无机材料可以提供钙原子和磷原子两者的来源。例如，生物相容性无机材料可以选自由以下组成的组：生物玻璃、磷酸三钙、单相羟基磷灰石、双相羟基磷灰石‑磷酸三钙、天然骨粉及其组合。 [0073] 如本文使用的，术语生物玻璃指的是磷硅酸钠钙物质。 [0074] 在又另外的实施方案中，生物相容性无机材料可以选自由以下组成的组：磷酸三钙、单相羟基磷灰石、双相羟基磷灰石‑磷酸三钙及其组合。本发明的组合物中使用的磷酸三钙可以是β‑磷酸三钙。 [0075] 为了与3D打印工艺和设备相容，优选地，生物相容性无机材料具有小于约200μm的平均粒度。例如，生物相容性无机材料可以具有小于约150μm的平均粒度。合适地，生物相容性无机材料可以具有小于约100μm的平均粒度。例如，生物相容性无机材料可以具有在约50μm和约200μm之间的平均粒度。 [0076] 生物相容性无机材料可以以每1mL的水凝胶在约1g至约10g之间的生物相容性无机材料的浓度并入到本发明的多部分组合物的第三部分中。例如，每1mL的水凝胶约2g至约 8g，诸如约2g至约6g的生物相容性无机材料。在一种实施方案中，生物相容性无机材料可以以每1mL的水凝胶在约3g至约6g之间的生物相容性无机材料的浓度并入到本发明的多部分组合物的第三部分中。 [0077] 在一些实施方案中，本发明的生物相容性无机材料可以在与药学上可接受的水凝胶混合之前用白蛋白溶液水合。白蛋白可以来自任何合适的来源诸如人、牛，或者在来源上是重组的。优选地，白蛋白是人白蛋白。白蛋白溶液可以是基于盐水的。在某些实施方案中，白蛋白溶液可以包含在约0.01％w/v至约10％w/v之间的白蛋白。例如，在约0.1％w/v至约 5％w/v之间的白蛋白，诸如在约1％w/v至约3％w/v之间的白蛋白。 [0078] 在一种实施方案中，本发明的组合物中使用的优选的生物相容性无机材料是β‑磷酸三钙(β‑TCP)。β‑TCP可以具有带有R‑3c空间群的菱面体晶格。β‑TCP可以通过X射线粉末衍射图来表征，所述X射线粉末衍射图包括当使用具有K‑α辐射的Cu管阳极获得时，在以下° 2θ(d值 )处的独特峰：17.0(5.2)、21.9(4.1)、25.8(3.45)、27.8(3.2)、29.65(3.0)、31.0(2.9)、32.45(2.75)、34.4(2.6)、46.9(1.9)、48.0(1.9)、48.4(1.9)和53.0(1.7)的角度。 [0079] β‑TCP可以具有按照通过氦测比重术确定的在约2.9g/cm3和约3.2g/cm3之间的密 3 3 度。例如，β‑TCP可以具有按照通过氦测比重术确定的在约2.9g/cm 和约3.15g/cm之间的密 3 3 度。例如，β‑TCP可以具有按照通过氦测比重术确定的在约2.9g/cm 和约3.1g/cm之间的密 3 度。在一种实施方案中，β‑TCP可以具有按照通过氦测比重术确定的在约2.95g/cm 和约 3 3.15g/cm 之间的密度。在一种实施方案中，β‑TCP可以具有按照通过氦测比重术确定的在 3 3 约2.95g/cm和约3.1g/cm之间的密度。在一种实施方案中，β‑TCP可以具有按照通过氦测比 3 3 重术确定的在约3.0g/cm和约3.1g/cm之间的密度。 [0080] β‑TCP颗粒可以具有不大于约180μm的d90粒度分布。在一种实施方案中，β‑TCP颗粒可以具有不大于约160μm的d90粒度分布。在另一种实施方案中，β‑TCP颗粒可以具有不大于约140μm的d90粒度分布。 [0081] 在一种实施方案中，用于本发明的组合物中的β‑TCP可以通过以下来表征： [0082] 不大于约180μm的d90粒度分布，以及 [0083] 按照通过氦测比重术确定的在约2.9g/cm3和约3.15g/cm3之间的密度。 [0084] 在一种实施方案中，用于本发明的组合物中的β‑TCP可以通过以下来表征： [0085] 不大于约160μm的d90粒度分布，以及 [0086] 按照通过氦测比重术确定的在约2.95g/cm3和约3.15g/cm3之间的密度。 [0087] 在一种实施方案中，用于本发明的组合物中的β‑TCP可以通过以下来表征： [0088] 不大于约160μm的d90粒度分布，以及 [0089] 按照通过氦测比重术确定的在约2.95g/cm3和约3.1g/cm3之间的密度。 [0090] 在一种实施方案中，用于本发明的组合物中的β‑TCP可以通过以下来表征： [0091] 包括当使用具有K‑α辐射的Cu管阳极获得时，在以下°2θ(d值 )处的独特峰的X射线粉末衍射图：17.0(5.2)、21.9(4.1)、25.8(3.45)、27.8(3.2)、29.65(3.0)、31.0(2.9)、 32.45(2.75)、34.4(2.6)、46.9(1.9)、48.0(1.9)、48.4(1.9)和53.0(1.7)的角度。 [0092] 按照通过氦测比重术确定的在约2.95g/cm3和约3.15g/cm3之间的密度，以及[0093] 不大于约180μm的d90粒度分布。 [0094] 在一种实施方案中，用于本发明的组合物中的β‑TCP可以通过以下来表征： [0095] 包括当使用具有K‑α辐射的Cu管阳极获得时，在以下°2θ(d值 )处的独特峰的X射线粉末衍射图：17.0(5.2)、21.9(4.1)、25.8(3.45)、27.8(3.2)、29.65(3.0)、31.0(2.9)、 32.45(2.75)、34.4(2.6)、46.9(1.9)、48.0(1.9)、48.4(1.9)和53.0(1.7)的角度。 [0096] 按照通过氦测比重术确定的在约2.95g/cm3和约3.1g/cm3之间的密度，以及[0097] 不大于约160μm的d90粒度分布。 [0098] 第三部分组合物 [0099] 关于本发明的组合物的第三部分，即包含药学上可接受的水凝胶和生物相容性无机材料的混合物，在一些实施方案中，第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0100] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约30Pa·s至约300Pa·s，以及 [0101] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约75Pa·s。 [0102] 在另外的实施方案中，本发明的多部分组合物的第三部分可以具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0103] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约30Pa·s至约250Pa·s，以及 [0104] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 5Pa·s至约75Pa·s。 [0105] 例如，本发明的多部分组合物的第三部分可以具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0106] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约30Pa·s至约200Pa·s，以及 [0107] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 5Pa·s至约50Pa·s。 [0108] 合适地，本发明的多部分组合物的第三部分可以具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0109] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约50Pa·s至约200Pa·s，以及 [0110] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 10Pa·s至约45Pa·s。 [0111] 在一种实施方案中，本发明的多部分组合物的第三部分可以具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0112] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约100Pa·s至约300Pa·s，以及 [0113] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约50Pa·s。 [0114] 非限制性实施方案 [0115] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0116] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0117] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶；以及[0118] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源，[0119] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0120] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0121] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0122] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0123] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0124] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶；以及[0125] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的海藻酸盐水凝胶，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源， [0126] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0127] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约50Pa·s至约250Pa·s，以及 [0128] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 2Pa·s至约50Pa·s。 [0129] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0130] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0131] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶；以及[0132] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源， [0133] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0134] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0135] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0136] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0137] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0138] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶；以及[0139] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，该生物相容性无机材料选自由以下组成的组：生物玻璃、磷酸三钙、单相羟基磷灰石、双相羟基磷灰石‑磷酸三钙、天然骨粉及其组合， [0140] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0141] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0142] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0143] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0144] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0145] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0146] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该生物相容性无机材料选自由以下组成的组：生物玻璃、磷酸三钙、单相羟基磷灰石、双相羟基磷灰石‑磷酸三钙、天然骨粉及其组合， [0147] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0148] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0149] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0150] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0151] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原； [0152] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0153] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源，[0154] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0155] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0156] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0157] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0158] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原； [0159] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0160] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源， [0161] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0162] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0163] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0164] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0165] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原； [0166] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0167] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，该生物相容性无机材料选自由以下组成的组：生物玻璃、磷酸三钙、单相羟基磷灰石、双相羟基磷灰石‑磷酸三钙、天然骨粉及其组合， [0168] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0169] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0170] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0171] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0172] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原； [0173] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0174] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源，[0175] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0176] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约50Pa·s至约250Pa·s，以及 [0177] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 2Pa·s至约50Pa·s。 [0178] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0179] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0180] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0181] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源，[0182] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0183] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0184] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0185] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0186] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0187] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0188] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源，[0189] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0190] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约50Pa·s至约250Pa·s，以及 [0191] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 2Pa·s至约50Pa·s。 [0192] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0193] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0194] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0195] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源， [0196] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0197] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0198] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0199] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0200] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0201] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0202] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，该生物相容性无机材料选自由以下组成的组：生物玻璃、磷酸三钙、单相羟基磷灰石、双相羟基磷灰石‑磷酸三钙、天然骨粉及其组合， [0203] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0204] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约1Pa·s至约300Pa·s，以及 [0205] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 1Pa·s至约100Pa·s。 [0206] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0207] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0208] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0209] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源， [0210] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0211] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约50Pa·s至约250Pa·s，以及 [0212] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 2Pa·s至约50Pa·s。 [0213] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0214] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原，该药学上可接受的媒介物包含至少一种选自由以下组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及其组合； [0215] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶，该药学上可接受的载体包含溶解的钙，以及选自由白蛋白、氨基酸及其组合组成的组的另外的赋形剂；以及 [0216] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，该生物相容性无机材料选自由以下组成的组：生物玻璃、磷酸三钙、单相羟基磷灰石、双相羟基磷灰石‑磷酸三钙、天然骨粉及其组合， [0217] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0218] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约50Pa·s至约250Pa·s，以及 [0219] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 2Pa·s至约50Pa·s。 [0220] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0221] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原； [0222] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶；以及[0223] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，至少一种无机材料提供钙原子和磷原子中的至少一种的来源， [0224] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0225] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约50Pa·s至约250Pa·s，以及 [0226] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 2Pa·s至约50Pa·s。 [0227] 在某些实施方案中，本发明的多部分组合物可以包括以下或基本上由以下组成： [0228] i)第一部分，该第一部分包括在药学上可接受的媒介物中的纤维蛋白原； [0229] ii)第二部分，该第二部分包括在药学上可接受的载体中的凝血酶；以及[0230] iii)第三部分，该第三部分包括与至少一种生物相容性无机材料混合的药学上可接受的水凝胶，该药学上可接受的水凝胶选自由以下组成的组：海藻酸盐、透明质酸、明胶及其组合，该生物相容性无机材料选自由以下组成的组：生物玻璃、磷酸三钙、单相羟基磷灰石、双相羟基磷灰石‑磷酸三钙、天然骨粉及其组合， [0231] 其中第三部分具有选自由以下组成的组的表观粘度： [0232] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在0.1s‑1的剪切速率的从约50Pa·s至约250Pa·s，以及 [0233] 按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在1s‑1的剪切速率的从约 2Pa·s至约50Pa·s。 [0234] 在所有前述实施方案中，适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有按‑1 照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约 100Pa·s，诸如约1Pa·s至约80Pa·s，例如约1Pa·s至约60Pa·s，合适地约3Pa·s至约 40Pa·s，诸如约3Pa·s至约30Pa·s，例如约4Pa·s至约30Pa·s，合适地约4Pa·s至约 25Pa·s的表观粘度。适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在50,000g/mol至约300,000g/mol之间的分子量，以及≤2的G/M比率。适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在50,000g/mol至约300,000g/mol之间的分子量，以及按照通过旋转粘‑1 度计在25℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。 [0235] 在所有前述实施方案中，适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在 75,000g/mol至约200,000g/mol之间的分子量，以及≤1的G/M比率。可选择地，适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在75,000g/mol至约200,000g/mol之间的分子‑1 量，以及按照通过旋转粘度计在25℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约 1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在 50,000g/mol至约300,000g/mol之间的分子量，≤2的G/M比率，以及按照通过旋转粘度计在‑1 25℃和1个大气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。在另一种实施方案中，适合于在本发明的组合物内使用的海藻酸盐可以具有在75,000g/mol至约200,000g/mol之间的分子量，≤1的G/M比率，以及按照通过旋转粘度计在25℃和1个大‑1 气压的压力测量的在10s 的剪切速率的约1Pa·s至约60Pa·s的表观粘度。 [0236] 本发明的骨复合材料 [0237] 在另外的方面中，本发明提供了一种从本发明的多部分组合物可获得的骨复合材料。 [0238] 在某些实施方案中，所述生物相容性无机材料处于在本发明的骨复合材料的约 5％w/w至约60％w/w之间的浓度。例如，处于在约15％w/w至约60％w/w之间的浓度，诸如处于在约25％w/w至约60％w/w之间的浓度，合适地处于在约35％w/w至约60％w/w之间的浓度。在其他实施方案中，生物相容性无机材料处于选自由约5％w/w至约50％w/w、约5％w/w至约40％w/w、约5％w/w至约30％w/w和约10％w/w至约25％w/w组成的组的浓度。 [0239] 本发明的方法 [0240] 在又另外的方面中，本发明提供了一种制备骨复合材料的方法，该方法包括以下步骤： [0241] 提供具有本发明的多部分组合物的三维打印设备； [0242] 根据所确定的设计打印骨复合材料；以及 [0243] 任选地孵育(incubating)合成骨复合材料。 [0244] 自然地，由于本发明的组合物的多部分性质，打印不同部分的顺序的多种不同排列是可能的并且在本发明的方法的范围内。例如，本发明的用于制备骨复合材料的方法可以包括三维打印设备打印； [0245] i)包括纤维蛋白原或凝血酶的第一层； [0246] ii)包括纤维蛋白原或凝血酶的第二层； [0247] 其中如果第一层包括纤维蛋白原，则第二层包括凝血酶，并且反之亦然，[0248] iii)依次重复步骤i)和步骤ii)n次，其中n≥1，以产生交替的层状结构； [0249] iv)在步骤iii)的交替的层状结构的顶部上打印包括水凝胶和生物相容性无机材料的第三部分；以及 [0250] v)根据需要任选地重复步骤i)‑步骤iv)以提供骨复合材料。 [0251] 参考本发明的方法，在一种实施方案中，纤维蛋白原首先被打印，并且凝血酶其次被打印作为纤维蛋白原的顶部上的层。 [0252] 例如，参考先前概述的本发明的方法的实施方案， [0253] 第一层可以具有X的限定体积， [0254] 第二层可以具有Y的限定体积， [0255] 步骤i)和步骤ii)可以被重复n次，其中n≥1，以产生具有体积nX+nY的交替的层状结构；以及 [0256] 其中包括水凝胶和生物相容性无机材料的第三部分被打印在交替的层状结构的顶部上，第三部分具有体积Z。 [0257] 在某些实施方案中，体积X和体积Y相同，使得体积nX＝nY。 [0258] 例如，在某些实施方案中，Z与nX与nY的比(Z:nX:nY)为约0.60‑1.0:1:1。合适地，Z与nX与nY的比(Z:nX:nY)为约0.80‑1.0:1:1。在一些实施方案中，Z与nX与nY的比(Z:nX:nY)为约0.90‑0.99:1:1。例如，Z与nX与nY的比(Z:nX:nY)可以为约0.95:1:1。在又另外的实施方案中，三维打印机可以打印等体积的多部分组合物的第一部分、第二部分和第三部分，使得Z与nX与nY的比(Z:nX:nY)为约1:1:1。 [0259] 在其他实施方案中，Z与nX与nY的比(Z:nX:nY)为约1‑5:1:1。合适地，Z与nX与nY的比(Z:nX:nY)为约2‑4:1:1。在一些实施方案中，Z与nX与nY的比(Z:nX:nY)为约3‑4:1:1。例如，Z与nX与nY的比(Z:nX:nY)可以为约4:1:1。 [0260] 在一些实施方案中，2≤n≤10。 [0261] 在本发明的用于制备骨复合材料的方法的其他实施方案中，三维打印设备可以打印； [0262] i)包括本发明的多部分组合物的第三部分(即，水凝胶和生物相容性无机材料)的第一层； [0263] ii)包括纤维蛋白原或凝血酶的第二层； [0264] iii)包括纤维蛋白原或凝血酶的第三层； [0265] 其中如果第二层包括纤维蛋白原，则第三层包括凝血酶，并且反之亦然，和[0266] iv)依次重复步骤ii)和步骤iii)n次，其中n≥1，以产生具有纤维蛋白原和凝血酶的交替的层状结构；以及 [0267] v)根据需要任选地重复步骤i)‑步骤iv)以提供骨复合材料。 [0268] 例如，参考先前概述的本发明的方法的实施方案， [0269] 第一层可以具有A的限定体积， [0270] 第二层可以具有B的限定体积， [0271] 第三层可以具有C的限定体积， [0272] 其中步骤ii)和步骤iii)可以被重复n次，其中n≥1，以产生具有体积A+nB+nC的层状结构。 [0273] 在某些实施方案中，体积B和体积C相同，使得体积nB＝nC。 [0274] 例如，在某些实施方案中，A与nB与nC的比(A:nB:nC)为约1‑5:1:1。合适地，A与nB与nC的比(A:nB:nC)为约2‑4:1:1。在一些实施方案中，A与nB与nC的比(A:nB:nC)为约3‑4: 1:1。例如，A与nB与nC的比(A:nB:nC)可以为约4:1:1。 [0275] 例如，在某些实施方案中，A与nB与nC的比(A:nB:nC)为约0.60‑1.0:1:1。合适地，A与nB与nC的比(A:nB:nC)为约0.80‑1.0:1:1。在一些实施方案中，A与nB与nC的比(A:nB:nC)为约0.90‑0.99:1:1。例如，A与nB与nC的比(A:nB:nC)可以为约0.95:1:1。在另外的实施方案中，三维打印机可以打印等体积的多部分组合物的第一部分、第二部分和第三部分，使得A与nB与nC的比(A:nB:nC)为约1:1:1。 [0276] 在一些实施方案中，2≤n≤10。 [0277] 对于本发明的两部分组合物，本发明的方法可以包括三维打印设备： [0278] i)打印组合物的包括纤维蛋白原或凝血酶的第一部分； [0279] ii)重复步骤i)n次，其中n≥1，以产生仅包括纤维蛋白原或凝血酶中的一种的层状结构； [0280] iii)在步骤ii)中产生的层状结构的顶部上打印第二部分，该第二部分包括与药学上可接受的水凝胶和生物相容性无机材料混合的纤维蛋白原或凝血酶中的另一种； [0281] iv)根据需要任选地重复步骤i)‑步骤iii)以提供骨复合材料。 [0282] 可选择地，对于本发明的两部分组合物，本发明的方法可以包括三维打印设备： [0283] i)打印第二部分，该第二部分包括与药学上可接受的水凝胶和生物相容性无机材料混合的纤维蛋白原或凝血酶中的一种； [0284] ii)在步骤i)中打印的部分的顶部上打印包括纤维蛋白原或凝血酶中的另一种的第一部分； [0285] iii)重复步骤ii)n次，其中n≥1，以产生层状结构； [0286] iv)根据需要任选地重复步骤i)‑步骤iii)以提供骨复合材料。 [0287] 关于涉及打印本发明的两部分组合物的实施方案，打印的第一部分的体积与打印的第二部分的体积的比(第1部分：第2部分)可以为约1:1‑8，例如约1:6，诸如约1:4，合适地约1:2，例如约1:1。在某些实施方案中，打印的第一部分的体积与打印的第二部分的体积的比为1:2。 [0288] 在另外的方面中，本发明提供了一种从本发明的方法可获得的骨复合材料。 [0289] 本发明的其他方面 [0290] 在又另外的方面中，本发明提供了一种治疗有相应需要的患者的骨损伤或骨缺损的方法，该方法包括将本发明的骨复合材料植入到有相应需要的患者中的步骤。 [0291] 本发明的另外的方面涉及本发明的骨复合材料在治疗骨损伤或骨缺损中的用途。 本发明的骨复合材料可以在创伤和/或癌症患者的治疗中具有特定用途。 [0292] 在又另一个方面中，本发明提供一种试剂盒，该试剂盒包括： [0293] 三维打印机，以及 [0294] 本发明的多部分组合物。 [0295] 附图简述 [0296] 本发明的另外的特征和优点将在附图中变得更加清楚，在附图中： [0297] 图1图示出了对于本发明的三部分组合物的一系列打印测试。具有限定的几何形状的结构被打印出来，并且不同组合物的结果在所示出的网格阵列中概述； [0298] 图2图示出了按照通过ATP细胞增殖测定(Promega)测量的本发明的组合物中hMSC细胞增殖的图； [0299] 图3描绘了按照使用活/死细胞活力测定(Life Technologies)测量的本发明的组合物中hMSC细胞活力的图形； [0300] 图4示出了对于本发明的组合物的hMSC成骨细胞分化测定的结果；以及[0301] 图5图示出了对于本发明的两部分组合物的一系列打印测试。 [0302] 本发明的详细描述的实施例 [0303] 对于本领域普通技术人员来说应当容易地明显的是，本文下文公开的实施例仅代表一般性实施例，并且能够再现本发明的其他布置和方法是可能的并被本发明所包括。 [0304] 实施例1 [0305] 使用本发明的三部分组合物打印具有限定的几何形状的物体。 [0306] 有利地，本发明的组合物允许具有限定的和不规则的形状的结构的准确且精确的打印。下文概述了说明本发明的许多多部分组合物的性能的一系列测试。组合物被加载到 3D打印设备中，并且计算机设计图提供了感兴趣的形状。3D打印设备的操作在本领域普通技术人员的正常技能和能力内。 [0307] 下文概述了本发明的三部分组合物的组分。来源于本发明的多部分组合物并在图 1中图示出的所有骨构建体都包含相同的纤维蛋白原组分(第一部分)和凝血酶组分(第二部分)，纤维蛋白原组分和凝血酶组分在下文表1中定性地概述。 [0308] 纤维蛋白原组分 凝血酶组分 人纤维蛋白原(80mg/mL) 人凝血酶(500IU/mL) 柠檬酸钠二水合物 氯化钙 氯化钠 人白蛋白 精氨酸 氯化钠 异亮氨酸 甘氨酸 谷氨酸单钠 注射用水 注射用水 [0309] 表1 [0310] 由Grifols根据销售授权号EU/1/17/1239/001‑004制造和销售的外科密封剂产品VERASEAL是实施例1‑实施例5中概述的所有实验中使用的纤维蛋白原组分和凝血酶组分的来源。该产品还在美国由Grifols根据生物制剂许可证号(BLN)125640作为FIBRIN SEALANT销售。 [0311] 水凝胶组合物随后使用标准方法以表2中概述的浓度制备。例如，在层流柜中称出海藻酸钠[(75‑200kDa，G/M比率≤1，粘度20‑200mPa*s(PRONOVA UP LVM,DuPont)]5g。将MilliQ水(100mL)加热至50℃，并且在层流柜中在混合的情况下添加海藻酸钠。将水保持在 50℃的恒定温度，直到海藻酸钠粉末不再可见(约1小时)。所得到的溶液被覆盖以维持无菌性并且冷却至约6℃，以加速胶凝过程。 [0312] HYALUBRIX直接从注射器中使用。 [0313] [0314] [0315] 表2 [0316] 表3概述了本发明的多部分组合物的第三部分的成分以及它们的浓度。在将它们并入到水凝胶中之前，将表3中指示的重量的生物相容性无机材料(生物玻璃、TCP等)用8mL的白蛋白水合溶液水合并手动混合。白蛋白水合溶液由在盐水媒介物中的以20mg/mL的浓度的人血清白蛋白组成。盐水和人血清白蛋白[ALBUTEIN]两者获自Grifols。 [0317] 将所得到的悬浮液以140g离心持续2分钟。过量的水合溶液使用微量移液管去除。 水合的生物相容性无机材料使用手动混合与表2中概述的水凝胶组合。所得到的组合物在表3中概述。生物相容性无机材料的物理特性在下文列出以供参考： [0318] [0319] 表3中使用的#1‑9编号直接对应于图1中图示出的骨构建体的编号。 [0320] [0321] [0322] *＝75％羟基磷灰石(HA):25％β‑TCP [0323] 表3 [0324] 用于打印表1和表3中概述的组合物的3D打印工艺都遵循一般性方法。纤维蛋白原部分和凝血酶部分作为交替的层被打印。打印的层数由操作者决定，但通常是在2‑20之间的范围。在期望数目的纤维蛋白原层和凝血酶层被打印出来后，糊剂组合物被打印在层状纤维蛋白原/凝血酶结构的顶部上。 [0325] 以第三部分组合物#7(海藻酸盐和β‑TCP)作为实例，使用3D打印机，纤维蛋白原组 3 分和凝血酶组分(表1)从单独的容器中如下交替打印。具有0.0177cm (17.7μL)的体积的纤 3 维蛋白原组分的第一层被打印到打印表面区域上。具有0.0177cm (17.7μL)的凝血酶的第二层被打印在前一层纤维蛋白原的顶部上。总共打印与8层凝血酶交织的8层纤维蛋白原，以生成交替的层状结构。 [0326] 随后，0.149cm3(149μL)的表3中概述的第三部分组合物#7被打印在纤维蛋白原和凝血酶的交替的层状结构的顶部上，该材料再次从单独的容器中打印。包括打印到彼此上的三种组合物的所得到的结构被称为第一宏观层(macrolayer)。在该宏观层中，纤维蛋白原组合物与凝血酶组合物与组合物#7的总比为约1:1:1。在宏观层内，纤维蛋白原层和凝血酶层反应以形成纤维蛋白并加强结构。 [0327] 另外的宏观层根据设计文件以相继顺序邻近第一宏观层并且在第一宏观层的顶部上打印，以构建图1中概述的骨构建体。 [0328] 在打印工艺期间，在注射器尖端中作用于组合物的剪切速率被确定为15s‑1和40s‑1 。 [0329] 在将上部的宏观层直接打印在下部的宏观层的顶部上之前，操作者可以进行将基底层打印在下部的宏观层的顶部上的另外的步骤。基底层通常由单层纤维蛋白原和单层凝血酶组成。基底层的周边向上突出，以限定以向上翻转的周边为边界的开放空间。基底层实际上如同嵌套体(nest)一样起作用并且看起来类似于嵌套体。上部的宏观层被打印(如上文所讨论的)到基底层中限定的开放空间中，并且向上翻转的周边提供了嵌套功能，该嵌套功能在上部的宏观层被打印出来后向其增加结构支撑。 [0330] 为了避免任何疑问，打印功能类似于嵌套体以便为其中打印的另外的层提供结构和支撑的基底层的概念是适用于本发明的所有方法步骤并与本发明的所有方法步骤可组合的一般概念。该概念不应被视为孤立于先前段落中讨论的特定实施例。技术人员应当理解基底层或嵌套体层对本发明的方法的一般适用性。 [0331] 实施例2 [0332] 本发明的组合物与人间充质干细胞的相容性 [0333] 本发明的组合物向细胞、蛋白质和其他生物活性材料提供无毒环境的能力是高度有利的。促进细胞存活和细胞分化的3D打印的骨构建体从治疗的角度来看是高度合意的。 [0334] 人间充质干细胞(hMSC)获自人供体的骨髓。hMSC根据GMP规范提取，并且随后在Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)和10％人血清B(hSERB)中进行离体扩增。将细胞培养基离心，并且去除任何过量的液体。所得到的细胞在离心管的底部处形成沉淀物。 [0335] hMSC的沉淀物与表3中示出的组合物#1、组合物#2、组合物#7和组合物#8混合。将hMSC沉淀物与相关的水凝胶混合，并且将所得到的混合物添加到水合的生物相容性无机材料中。将所得到的糊剂手动混合(轻轻地)以避免任何细胞损伤。所得到的组合物在表4中概述，编号为#1’、#2’、#7’和#8’，以便于参考。 [0336] [0337] *＝75％羟基磷灰石(HA):25％β‑TCP [0338] 表4 [0339] 包括hMSC的组合物#1’、组合物#2’、组合物#7’和组合物#8’与表1的纤维蛋白原组分和凝血酶组分体外(没有3D打印)以按体积计1:1:1的近似比混合。将所得到的混合物在上文所讨论的标准条件(DMEM+10％hSERB)中培养持续7天。 [0340] CELLTITER‑GLO 3D细胞活力测定(Promega)用于基于ATP的定量来确定3D细胞培养物中的活细胞的数目，ATP是代谢活性细胞的存在的标志物。在细胞裂解之后，所获得的发光信号与样品中存在的ATP的浓度成比例，并且因此与培养物中存在的活细胞的数目成比例。 [0341] 简言之，将等体积的CELLTITER‑GLO 3D试剂(Promega)添加到细胞培养物体积中，并且将内容物剧烈地混合持续5分钟以诱导细胞裂解。将板在室温孵育持续另外的25分钟，以使待记录的发光信号稳定化。 [0342] 图2图示出了细胞活力测定的结果。从图2中明显的是，组合物#1’、组合物#2’、组合物#7’和组合物#8’中的每一种在第3天和第7天示出ATP浓度的增加。组合物#7’描绘了特别有希望的结果，尽管所有测试的组合物都给出积极的结果。因此，可以得出结论，这些组合物对于hMSC是无毒的。 [0343] 表4中概述的组合物还经历活/死细胞活力测定(Life Technologies)，该活/死细胞活力测定是基于通过采用分别测量细胞内酯酶活性(通过钙黄绿素AM探针)和质膜完整性(通过乙锭同源二聚体(EthD‑1)探针)的两种探针来同时检测活细胞和死细胞。将核内容物用Hoechst 33342荧光染料染色。使用荧光显微镜以使细胞特征可视化。 [0344] 在图3中，我们看到在第0天和第7天用10X物镜捕获的来自细胞活力测定的图像。 该图示出了活的hMSC、死的hMSC和染色的细胞核。在第0天，关于任何组合物存在非常少的值得注意之处。然而，在第7天，大的阴影的、有斑点的区域示出高浓度的细胞当与本发明的组合物混合时是活的。因此，从图3中清楚的是，本发明的组合物适合于允许细胞粘附和在整个骨支架上的空间细胞分布以及促进细胞生长。 [0345] 实施例3 [0346] 确定本发明的组合物的成骨潜力 [0347] 表4中概述的组合物的成骨效力通过细胞分化分析方案来确定。 [0348] 表4中的包括hMSC的组合物#1’、组合物#2’、组合物#7’和组合物#8’与表1的纤维蛋白原组分和凝血酶组分体外(没有3D打印)以按体积计1:1:1的近似比混合。该体积的所得到的混合物补充有等体积的成骨分化培养基(来自GIBCO的STEMPRO基础培养基(90％)+STEMPRO Osteo补充剂10％)。每3天更换成骨分化培养基。 [0349] 在第14天，使用SIGMAFAST BCIP/NBT溶液测试组合物/hMSC的碱性磷酸酶(ALP)活性。在分化培养之前的组合物没有示出ALP染色(参见第0天，图4)。然而，在第14天，大量细胞针对ALP活性呈阳性染色，如通过在图4中在第14天下染色的丝型结构所图示出的。图4图示出了在成骨培养14天之后，对于组合物#1’、组合物#2’、组合物#7’和组合物#8’中的每一种的高数目的ALP阳性细胞。这些发现积极地证实本发明的组合物支持hMSC到成骨细胞的成功分化/骨诱导。此外，在第14天目视检查时，细胞显示出骨细胞样形态。 [0350] 所测定的所有组合物都促进了hMSC到骨细胞的分化。 [0351] 实施例4 [0352] 使用本发明的两部分组合物打印具有限定的几何形状的物体 [0353] 本发明的范围内的两部分组合物根据表5制备。取决于第二组合物包含纤维蛋白原还是凝血酶，第一组合物由如上文表1中概述的纤维蛋白原或凝血酶中的另一种组成。第二组合物包含表5中概述的组分。 [0354] [0355] 表5 [0356] 如图5中图示出的，本发明的两部分组合物不具有本发明的三部分组合物的控制或准确度水平的3D打印。然而，对于组合物#A、组合物#B和组合物#D，获得了有希望的结果，并且实施例4用作概念证明研究，即合适的骨构建体可以用本发明的范围内的两部分组合物进行3D打印并且准确度可以用进一步的努力和时间来提高。