提纯方法 发明领域 [0001] 本发明涉及用于放射性药物的组分的提纯。特别地，本发明涉及用于内(endo)放射性核素疗法的络合的钍-227的提纯方法，特别是其中提纯在向人对象的药物施用之前不久进行的情况下。 [0002] 发明背景 特异的细胞杀死对于成功地治疗哺乳动物对象中的多种疾病而言可以是必不可少的。 其典型例子是治疗恶性疾病诸如肉瘤和癌。但是，某些细胞类型的选择性消除还可以在许多其它疾病，特别是免疫性、增生性和/或其它肿瘤疾病的治疗中起关键作用。 [0003] 目前最常用的选择性治疗方法是外科手术、化学疗法和外线束照射。但是，靶向的内放射性核素疗法是一个有前途的并且在发展中的领域，其具有将高细胞毒性辐射递送至不希望的细胞类型的潜力。目前被批准用于人类中的最常见的放射性药物形式采用发射β的和/或发射γ的放射性核素。但是，最近已经对发射α的放射性核素在治疗中的应用产生了浓厚兴趣，因为它们具有更特异性地杀死细胞的潜力。一种发射α的核素，特别是镭-223 223 ( Ra)已经被证实是非常有效的，特别是对于与骨和骨表面有关的疾病的治疗而言。也正在活跃地研究另外的α-发射体，并且一种特别令人感兴趣的同位素是α-发射体钍-227。 [0004] 在生理环境中，典型α发射体的辐射范围通常小于100微米，相当于仅几个细胞直径。这使得这些核非常适合用于治疗肿瘤，包括微转移，因为几乎没有辐射能会超过靶细胞，且因此对周围健康组织的损伤可能最小化(参见Feinendegen等人, Radiat Res 148: 195-201 (1997))。相反，β粒子在水中具有1mm或更长的射程(参见Wilbur, Antibody Immunocon Radiopharm 4: 85-96 (1991))。 [0005] α-粒子辐射的能量比β粒子、γ射线和X-射线高，通常是5-8 MeV，或是β粒子的5- 10倍以及γ射线能量的20倍或更多倍。因此，与γ和β辐射相比，大量能量在非常短距离内的这种沉积会给α-辐射提供特别高的线性能量转移(LET)、高的相对生物效能(RBE)和低的氧增强比(OER) (参见Hall, “Radiobiology for the radiologist”, 第五版, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia PA, USA, 2000)。这些性质解释了发射α的放射性核素的特殊的细胞毒性，并且也对要在体内施用同位素时所要求的纯度水平提出严格要求。在其中任何污染物也可能是α-发射体的情况下，特别是如此，因为它们可以潜在地保留在体内并造成显著的损伤。放射化学纯度应当在适当可行时尽量高，且非靶向放射性核素的污染物应当最小化，特别在污染物是α-发射体时。 [0006] 从227Ac开始的放射性衰变链产生227Th，并然后导致223Ra和其它放射性同位素。如 227 下显示了在该链中的前三种同位素。表显示了 Th以及在它前面和后面的同位素的元素、分子量(Mw)、衰变模式(模式)和半衰期(年(y)或天(d))。227Th的制备可以从227Ac开始，其自身仅以痕量存在于铀矿石中，是起源于235U的天然衰变链的一部分。一吨铀矿石含有约十分之一克锕，且因此尽管227Ac是天然存在的，但是其更通常通过在核反应堆中的226Ra的中子辐照来制备。 [0007] 从该解释可以看出，关于从以上衰变链制备用于药物用途的227Th，具有超过20年的半衰期的27Ac是非常危险的潜在污染物。但是，即使一旦将227Ac除去或降低至安全水平，227Th将继续衰变成具有刚好低于19天的半衰期的223Ra。由于223Ra是一种碱土金属，它不会容易地被针对钍或其它锕系元素设计的配体配位。该223Ra然后形成潜在失控的(未靶向的)衰变链(包括4种α-衰变和2种β-衰变)的开始，然后达到稳定的207Pb。这些显示在下表中： 。 [0008] 从以上两个衰变表显而易见，223Ra不能从227Th的任何制备完全消除，因为后者将 223 不断地衰变并产生前者。但是，显然，从施用给患者的每个 Ra核的衰变将释放出超过25 MeV的辐射能，然后该核到达稳定的同位素。这样的223Ra还可能不被设计成将227Th运输至它的作用部位的螯合作用和特异性结合的系统结合和靶向，这是由于两种元素的不同化学性质。因此，为了靶向细胞杀死、使治疗效果最大化和使副作用最小化的目的，重要的是控制 227 223 任何 Th制品在施用之前的 Ra水平。即使在施用之前必须将产品储存或运输一段时间(例如12至96小时，诸如至多48小时)，仍然重要的是从非常纯的同位素开始，以便仍使被子同位素的污染最小化。 [0009] 分离227Th与223Ra可以在放射学实验室中快速地和方便地进行，诸如在通过227Ac的衰变产生的部位。但是，这并不会总是可能的并且可能不会有效地实现期望的结果，因为得到的经提纯的227Th然后必须运输至施用部位。如果使用部位远离 227Th的起源部位，则在储存和运输中将发生223Ra的进一步的累积。 [0010] 此外，227Th可以在227Th的络合以形成药物(例如靶向放射性药物络合物)之前或之后从223Ra提纯。如果该方法在络合之前进行，则提纯可能更简单，特别是如果配体与靶向分子例如抗体缀合的情况下，这是因为大的缀合物可能难以处理。然而，如果可以设计一种提纯方法，该方法可以在照护点处或其附近使用并且可以用于从药用227Th络合物(例如靶向络合物)分离不期望的223Ra，那么这将提供相当大的优势，因为对于络合物的产生而言不需要提纯和施用之间的延迟。 [0011] 考虑到以上内容，提供从污染物223Ra提纯227Th的方法将是一个重要优点，所述方法可以在中心位置进行，经提纯的227Th可以从该位置比同位素的半衰期显著更快地到达施用部位。在经提纯的同位素将储存一些时间(例如12-96小时)的情况下，那么该方法应该提 223 供 Ra的非常高的去除程度，以便仅将由不可避免的生长(in-growth)所产生的镭施用给对象。可替代地，提纯可以使用不需要广泛训练和经验即可完成的简单方法在施用时间时或之前不久在照护点处或其附近发生。在任一实施方案中，该方法应该稳健、可靠和有效，因为所得到的经提纯的227Th (227Th络合物)可能直接用于药物制备。 [0012] 如果这种方法可以在络合的227Th上进行，其优选与靶向部分缀合，那将是另一个优点。从安全性和操作观点看，如果可以避免强无机酸和/或强碱的使用(以及避免敏感组分如靶向络合物的靶向部分的可能降解)，并且还因为这避免了从最终产品中分离这些材料的必要性，这将是一个优点。如果使用的试剂适合于直接用在最终的药物产品中，这特别适用，这是因为速度由此被最大化了。如果可以使用小体积来简化操作和减小污染废物的体积，也是一个优点。如果该方法可以用一组简单的试剂和设备项目(它们可以被提供给这样的同时制备，任选地以试剂盒的形式)完成，将是另一个优点。 [0013] 以前已知的227Th的制品通常用于实验室应用，和/或没有针对药品标准纯度进行试验。在WO2004/091668中，例如，通过阴离子交换从单个柱制备227Th，并在没有验证纯度的情况下用于实验目的。在227Th的大多数制备方法中的分离的主要目的是除去长寿的227Ac母同位素。以前没有为223Ra (其已经在以前从227Ac提纯的227Th样品中生长)的除去设计或优化方法。 [0014] 发明概述 本发明的发明人现在已经确立，可以使用快速且简单的提纯操作从227Th的制品除去 223Ra。该方法允许227Th呈络合形式并且甚至络合并缀合至靶向部分诸如抗体。该方法可以使用单一提纯步骤。以此方式，可以生产非常高放射化学纯度的227Th溶液，同时在所述方法中提供许多合乎需要的优点，特别是关于提纯和施用之间的延迟的减少以及在施用部位较少的产品处理。 [0015] 因此，在第一方面，本发明提供了一种用于从包含络合的227Th和223Ra (络合的或在溶液中)的混合物提纯络合的227Th的方法，所述方法包括： i) 制备第一溶液，其包含在第一水性缓冲剂中的络合的227Th离子和223Ra离子的混合物； ii) 将所述第一溶液加载到分离材料例如强阳离子交换树脂上； iii) 从所述分离材料洗脱络合的227Th，由此产生包含络合的227Th的第二溶液； iv) 任选地使用第一水性洗涤介质冲洗所述分离材料； 通常，步骤i)至iv)将以上面给出的次序进行，尽管其它步骤和过程可以明显地在列出的步骤中或之间进行。 [0016] 该方法在上面的步骤i)之前任选地并优选地还包括下述步骤： X) 使227Th离子与至少一种络合剂在溶液中接触，由此形成络合的227Th的至少一种水溶液。优选地，络合剂是缀合(例如共价缀合)至靶向部分，例如本文所述那些靶向部分的螯合部分。 [0017] 所述方法任选地也包括下述其它步骤中的至少一个，每个通常在上面的步骤i)至iv)之后进行： v) 测定所述第二溶液的227Th含量； vi) 从所述第二溶液蒸发液体； 227 vii) 由在所述第二溶液中所含的络合的 Th的至少一部分形成至少一种放射性药物制剂； viii) 无菌过滤所述放射性药物。 [0018] 步骤vii)形成一个特别优选的另外步骤。 [0019] 在另一个方面，本发明提供了227Th的溶液或其它样品，其包含每1MBq 227Th小于 50KBq 223Ra，优选地每1MBq 227Th小于10KBq 223Ra。这样的溶液任选地通过本文描述的任一方法形成或可形成，并且优选地通过本文描述的优选方法形成或可形成。相应地，本发明的方法优选地用于形成227Th的溶液，其包含每1MBq 227Th小于50KBq 223Ra，优选地每1MBq 227Th小于10KBq 223Ra。还提供了一种对应的药物制剂，其可以是无菌的，且可以包含至少一种络合剂(特别对于227Th)、至少一种靶向试剂(例如缀合至所述络合剂)和任选的至少一种药学上可接受的载体或稀释剂。 [0020] 在仍另一个方面，本发明还提供了试剂盒(通常用于实现本发明的方法的试剂盒)，其包含227Th和223Ra的混合物、第一水性缓冲剂、螯合剂(优选与靶向部分缀合或可缀合)和分离材料(例如阳离子交换树脂)。227Th和223Ra的混合物(与在本发明的其它方面中的第一溶液一样)通常也将包含另外的223Ra子产物。这样的混合物可以是在贮存和/或运输过程中的经提纯或经部分提纯的227Th(任选络合的或在溶液中)的放射性衰变的结果。 [0021] 发明详述 所有类型的药物常规地必须生产至非常高的纯度标准和必须满足标准(例如纯度和无菌度)的非常高的可信度。发射α的放射性核素向对象身体的施用需要所有这些考虑，但是另外增加了对高放射化学纯度的需要。从长寿的前体同位素提纯是放射化学纯度的一个关键方面，但是这通常可以在专业放射化学实验室或工厂中完成，在那里可以利用复杂的方法和处理操作。 [0022] 但是，在目标放射性核素衰变成其它放射性同位素的情况下，放射化学提纯的另一个水平可能是必要的。放射性子同位素的产生可以显著地促进内放射性核素疗法的毒性，且可以是剂量限制性的。在227Th的情况下，所述子同位素是镭(一种碱土金属)，而母体是锕系的过渡金属。这意味着，可能已经适合用于结合钍的任何螯合作用或络合作用将可能在化学上不适合用于保留子代镭。作为动量守恒的结果，在以非常高的速度射出α粒子以后，α衰变另外给子核赋予非常显著的“反冲”能量。该反冲携带比共价键或配位相互作用高许多倍的能量，并且将不可避免地将子核从原始母同位素的直接环境分流出去。 [0023] 由于通过227Th衰变而在体内产生的223Ra及其子代的存在潜在地限制剂量，重要的是，没有另外的、不必要的223Ra施用给对象以进一步限制227Th的可接受治疗剂量或增大副作用。 [0024] 考虑到227Th样品中223Ra的必然发生的生长和使向对象递送的223Ra最小化(只要具有合理的可能性)的需要，已经开发了本发明。由于223Ra最初以每小时约0.2%的总活性的速率生长，所述方法应当在施用之前不超过几小时(例如，在72小时内或在48小时内)进行，以 227 便使不必要的剂量最小化。类似地，如果 Th可以在制备的2-4小时内使用，那么所述方法应当优选地提供就223Ra而言(在制备时)具有约99%(例如95%至99.9%)放射化学纯度的 227Th。更高的纯度可能是徒劳的和/或无意义的，因为在使用之前的生长将破坏更严苛的提纯方法的任何益处，而更低的纯度(例如小于90%或小于95%放射化学纯度)是不希望的，这 223 是因为 Ra的剂量(和因此的毒性)可以适当地受到进一步限制，同时允许现实的施用时间。 [0025] 在一个实施方案中，用于本发明中的227Th和223Ra的混合物将不含有显著量的不在开始于227Th的衰变链中的放射性同位素。特别地，用于本发明的任何方面的227Th和223Ra的 227 227 227 混合物将优选地包含每100MBq Th小于20 Bq Ac，优选地每100MBq Th小于5 Bq 227Ac。 [0026] 本发明提供了一种以适合用于内放射性核素疗法中的纯度水平生产227Th的方法。 本发明方法的附加益处是它可以在已经与螯合剂(优选与靶向部分缀合的螯合剂)络合的227Th上进行。通过对预络合的样品进行分离，该方法减少了产生药物制剂所需的进一步步骤的数量，因此允许在提纯后更快地施用同位素。由于放射性同位素在所有储存条件下都继续衰变，因此在施用前不久的提纯允许得到具有更高同位素纯度的药物。在本发明中，络合的227Th(通常为与缀合至靶向部分的配体络合的离子形式(称为“靶向钍缀合物”-TTC))被直接提纯，优选在施用前不久。 [0027] 下面指出了所述系统的许多优选特征，在技术上可行时，其中的每一个可以与任何其它特征组合使用，除非另外明确指出。 [0028] 本发明的方法和所有对应的实施方案将优选地在适合于患者施用的规模进行。该规模可以是单次治疗剂量，或可以是适合用于许多对象，其中每个对象接受一个剂量。通常，所述方法将以适合用于在1-5小时内施用的规模使用，诸如227Th的约1-10个典型剂量。 单次剂量提纯形成一个优选实施方案。显然，典型剂量将取决于应用，但是预见到，典型剂量可以是0.5-200 MBq，优选1-25 MBq，且最优选约1.2-10 MBq。在可能时进行合并的剂量提纯，其中使用至多20个、优选地至多10个或至多5个典型剂量。因而可以用至多200 MBq、优选地至多100 MBq进行提纯，并在适当时在提纯以后分成单独剂量。 [0029] 本发明的方法的步骤i)涉及包含227Th和223Ra的溶液(且通常也包含223Ra子同位素- 参见上面表中的那些)。这样的混合物将固有地通过227Th样品的逐渐衰变而形成，但是为了用在本发明中，也优选地具有下述特征中的一个或多个，其是单独的或以任何可行组合的形式： a) 227Th放射性可以是至少0.5 MBq (例如0.5 MBq至100 MBq)，优选地至少0.5 MBq，更优选地至少1.4 MBq； b) 所述溶液可以在第一水性缓冲溶液中形成； c) 所述溶液可以具有不超过50 ml (例如0.1-20 ml或0.1-10 ml)、优选地不超过10 ml或5 ml、更优选地3和7 ml之间的体积。 d) 所述第一水性缓冲溶液可以是在3和6.5之间、优选地3.5和6之间、和特别是4和6之间的pH。 e) 所述第一水性缓冲溶液可以以0.01至0.5 M、诸如0.03-0.05 M或0.1-0.2 M的浓度使用。 f) 所述第一水性缓冲溶液可以包含至少一种有机酸缓冲剂、基本上由其组成或由其组成。 g) 所述第一水性缓冲溶液可以包含至少一种选自柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂及其混合物的有机酸缓冲剂、基本上由其组成或由其组成。 h) 所述第一水性缓冲溶液可以任选地另外包含至少一种自由基清除剂和/或至少一种螯合剂(特别是非缓冲性螯合剂)。其中许多是本领域已知的，且包括pABA (清除剂)和EDTA (螯合剂)。 i) 所述第一水性缓冲溶液可以任选地另外包含其它添加剂，包括盐，诸如NaCl。 [0030] 本发明的方法的步骤ii)涉及将所述第一溶液加载到分离材料(诸如阳离子交换树脂)上。该步骤和在其中提及的实体可以具有下述优选特征，其是单独的或以任何可行组合的形式，且任选地以与本文所述的其它步骤的任何特征的任何可行组合的形式： a) 所述分离材料可以是阳离子交换树脂或羟磷灰石，优选强阳离子交换树脂。 b) 所述树脂(例如阳离子交换树脂)可以是基于二氧化硅的树脂； c) 所述阳离子交换树脂可以包含一种或多种酸官能团； d) 所述阳离子交换树脂可以包含至少一个酸部分和优选地至少一个羧酸或磺酸部分，诸如烷基磺酸树脂诸如丙基磺酸(PSA)树脂； e) 所述树脂(例如强阳离子交换树脂)可以具有5-500 μm、优选10-200 μm的平均粒度。 f) 所述分离材料(例如阳离子交换树脂)可以以柱的形式使用。 g) 使用的分离材料(例如树脂)的量(例如填充在柱中)可以是100mg或更少(例如2- 50mg)，优选10-50 mg。 h) 通过在加载第一溶液之前用一个或多个体积的水性介质洗涤，可以预调理所述分离材料(例如树脂)。通常，将缓冲溶液，更优选地将第一水性缓冲剂用于预调理。 [0031] 本发明的方法的步骤iii)涉及从所述分离材料(例如强阳离子交换树脂)洗脱络合的227Th，由此产生包含络合的227Th的第二溶液。该步骤和在其中提及的实体可以具有下述优选特征，其是单独的或以任何可行组合的形式，且任选地以与本文所述的其它步骤的任何特征的任何可行组合的形式： a) 所述洗脱可以借助于洗脱液溶液或借助于“干燥”洗脱，诸如通过在重力下、在离心力下或在来自上面的气体压力和/或来自下面的真空下洗脱； b) 在洗脱借助于洗脱液溶液的情况下，这可以是水性缓冲溶液，诸如本文描述的那些中的任一种，包括有机酸缓冲溶液； c) 所述洗脱可以是通过“干燥”方式，优选地在重力或离心力下，诸如在离心机中旋转。 d) 通过离心力的洗脱可以是在重力的至少1000倍、优选地至少2000倍或至少5000倍的“相对离心力”(RCF) (例如1000-50000 g的rcf)下10秒至10分钟、优选20秒至5分钟的时间段。 [0032] 本发明的方法的步骤iv)涉及使用第一水性洗涤介质冲洗所述分离材料(例如强阳离子交换树脂)的任选步骤。该步骤和在其中提及的实体可以具有下述优选特征，其是单独的或以任何可行组合的形式，且任选地与本文所述的其它步骤的任何特征以任何可行组合的形式： a) 所述第一水性洗涤介质可以是水，诸如蒸馏水、去离子水或注射用水，或可以是缓冲剂诸如本文所述的有机酸缓冲剂； b) 所述第一水性洗涤介质可以包含与所述第一缓冲溶液相同的缓冲剂； c) 所述任选的洗涤步骤可以被省略； d) 所述任选的洗涤步骤可以包括：在本文所述的“干燥”洗脱以后将第一洗涤介质加给所述树脂，并然后“干燥”洗脱所述洗涤介质，诸如通过重力或离心；或在来自上面的气体压力和/或来自下面的真空下。 227 e) 在所述洗涤步骤中洗脱的溶液可以与包含 Th的第二溶液组合。 [0033] 在本发明的方法的步骤iv)以后，通常将分离材料(例如树脂)作为放射性废物处置。因为需要的树脂的量通常非常小(例如小于50mg)，这不代表重大的处置问题。但是，如果为了测定或任何其它原因而希望重新使用所述树脂或回收223Ra，可以使用任何合适的介质洗脱223Ra。用于这样的回收的合适介质包括缓冲溶液，诸如本文描述的那些，和水性无机酸，诸如HCl和H2SO4。如果要重新使用所述树脂，那么通常在重新使用之前用几个体积的第一缓冲溶液将其再生。 [0034] 本发明的方法可以包含许多任选的步骤，其中的每一个可以独立地存在或不存在，只要技术上可行。 [0035] 在分离步骤i)至iv)之前，优选地包括任选的制备步骤X)。步骤X)包括从227Th离子和螯合剂制备络合的227Th。优选地，络合剂包含缀合(例如通过共价键)至靶向部分的螯合剂。该步骤和其中涉及的实体可以具有以下优选特征，其是单独的或以任何可行组合的形式，且可选地以与本文所述的其它步骤的任何特征的任何可行组合的形式。此外，本文所述的放射性药物的所有特征形成本发明药物方面的优选特征，特别是在该药物通过本发明的方法形成或可形成的情况下： a) 与螯合剂接触的227Th的量可以是1 MBq至100 MBq，优选1至10 MBq。 b) 所述络合剂可以包含八齿配体。 c) 所述络合剂可以包含羟基吡啶酮如羟基吡啶酮(HOPO)配体，优选八齿3,2-羟基吡啶酮(3,2-HOPO)。 d) 所述络合剂可以包含靶向部分，其优选与八齿配体如HOPO配体(例如3,2-HOPO)缀合。 e) 所述靶向部分可以是抗体、抗体构建体(construct)、抗体片段(例如FAB或F(AB)’2片段或包含至少一个抗原结合区域的任何片段)或这样的片段的构建体。 f) 所述靶向部分可以是受体或受体结合剂(例如激素、维生素、叶酸盐或叶酸盐类似物)、双膦酸盐或纳米粒子。 g) 所述靶向部分可以对至少一种疾病相关抗原诸如“分化簇”(CD)细胞表面分子(例如CD22、CD33、CD34、CD44、CD45、CD166等)具有特异性。 h) 所述靶向部分可以通过共价连接基连接至配体，由此形成靶向缀合物形式的络合剂。 j) 所述接触可以包括将溶液中的227Th离子与络合剂(尤其是靶向缀合物)一起温育。 这样的温育可以是在低于50℃的温度，优选10-40℃，诸如20-30℃。这样的温育可以持续小于2小时的时间段，诸如1分钟至60分钟(例如1-15分钟)，优选15-45分钟。 k) 接触可以是在缓冲溶液中，优选地在所述第一缓冲溶液中。 [0036] 本发明的方法的步骤v)涉及任选地测定所述第二溶液的227Th含量。该步骤和在其中提及的实体可以具有下述优选特征，其是单独的或以任何可行组合的形式，且任选地以与本文所述的其它步骤的任何特征的任何可行组合的形式： a) 通过γ检测/能谱法，诸如通过使用锗半导体检测器(高纯度锗检测器- HPGe)，可以测定227Th； b) 可以将227Th含量与期望的药物剂量进行对比并稀释至标准浓度，或为了施用而抽取适当剂量。 [0037] 本发明的方法的步骤vi)涉及从所述第二溶液蒸发液体的任选步骤。在最终的药物组合物具有低体积的情况下，该步骤可能是合乎需要的。通常，选择第一水性缓冲剂，以使得它与标记反应(如本文所述)相容且是生理学上可耐受的(即适合用于以所用的浓度和量注射)。以此方式，优选地避免多重操作和改变溶剂，诸如涉及浓缩步骤vi)的那些。在必要时，可以包括该步骤，且在其中提及的实体可以具有下述优选特征，其是单独的或以任何可行组合的形式，且任选地以与本文所述的其它步骤的任何特征的任何可行组合的形式： a) 所述蒸发可以在减压下(例如1-500毫巴)进行。 b) 所述蒸发可以在升高的温度(例如50-200℃，优选80-110℃)进行。 [0038] 本发明的方法的步骤vii)涉及由借助于步骤i)至iv)提纯的227Th的至少一部分形成至少一种放射性药物的任选步骤。该步骤和在其中提及的实体可以具有下述优选特征，其是单独的或以任何可行组合的形式，且任选地以与本文所述的其它步骤的任何特征的任何可行组合的形式。此外，本文中指出的放射性药物的所有特征形成本发明的药物方面的优选特征，特别是在该药物通过本发明的方法形成或可形成的情况下： a) 来自所述第二溶液的络合的227Th的部分(借助于步骤i)至iv)提纯)可以是1 MBq至 100 MBq，优选1-10 MBq。 b) 可以加入药用载体、稀释剂、缓冲剂、盐、防腐剂等，由此形成可注射的放射性药物。 227 c) 基于在步骤v)中得到的活性测量结果，可以将来自所述第二溶液的络合的 Th稀释至标准活性，任选地针对制备(或测量)和施用之间的时间段进行校正。 d) 所述放射性药物可以在照护点处或其附近制备和/或可以在短时间内(例如在从提纯到注射的96小时内，优选在提纯的48小时内或36小时内)使用。 [0039] 在本发明的不同方面形成或可形成的放射性药物可以用于治疗任何合适的疾病，诸如肿瘤或增生性疾病(例如癌、肉瘤、黑素瘤、淋巴瘤或白血病)。所述药物制剂(本身和用于这样的用途)以及对应的对象治疗方法形成本发明的其它方面。这样的对象通常有此需要，诸如遭受肿瘤或增生性疾病(例如本文描述的那些)的对象。本发明将进一步提供将放射性药物施用给对象(例如有此需要的对象)的方法，所述方法包括通过步骤i)至iv)、vii)和任选的步骤v)、vi)和/或viii)中的任一个形成所述放射性药物，和将所述放射性药物施用给所述对象(例如通过静脉内注射或直接地施用至特定组织或部位)。 [0040] 本发明的方法的步骤viii)是一个任选步骤，其包括将所述溶液或药物(特别是在步骤vii)中形成的那些)灭菌。该步骤和在其中提及的实体可以具有下述优选特征，其是单独的或以任何可行组合的形式，且任选地以与本文所述的其它步骤的任何特征的任何可行组合的形式： a) 所述灭菌可以通过加热、通过照射或通过过滤。 b) 所述过滤可以通过合适的膜，诸如0.22 μm (或更小的)膜。 c) 所述过滤可以通过注射器穿过合适的注射器式滤器。 [0041] 除了以上步骤以外，本发明的方法和所有对应方面可以包括额外步骤，例如以验证用于药物目的的227Th的纯度，交换反荷离子，浓缩或稀释所述溶液或控制因素诸如pH和离子强度。这些步骤中的每一个因而在本发明的不同方面中形成一个任选的、但是优选的额外步骤。 [0042] 优选的是，本发明的方法提供了络合的227Th产品的高收率。这不仅因为希望避免废物或有价值的产品，而且因为所有损失的放射性物质形成必须然后被安全处置的放射性废物。因而，在一个实施方案中，在步骤iv)中洗脱步骤ii)中加载的227Th的至少50%(例如 50-90%或50%至98%)。这将优选地是至少70%、更优选地至少80%和最优选地至少85%收率。在一个相关方面，步骤iv)中洗脱的227Th的至少50％以227Th络合物的形式被洗脱(其余部分作为溶液中的未络合的离子洗脱)。这将优选地是至少70％，优选至少80％且更优选至少 90％。在一个优选的实施方案中，在步骤iv)中洗脱的227Th的基本上100％(例如至少95％)以227Th络合物的形式被洗脱。 [0043] 在本发明的一个对应方面，另外提供了药物组合物，其包含络合的227Th(尤其是如本文所述提纯的)和任选的至少一种药学上可接受的稀释剂。这样的药物组合物可以包含本文指出的纯度的227Th，其任选地通过本发明的方法形成或可形成。本领域技术人员众所周知合适的载体和稀释剂，包括注射用水、pH调节剂和缓冲剂、盐(例如NaCl)和其它合适的材料。 [0044] 所述药物组合物将包含本文所述的络合的227Th，其通常作为离子诸如Th4+ 离子的络合物。这样的组合物包含本发明的227Th与至少一种配体(诸如八齿3,2- 羟基吡啶酮(2, 3-HOPO)配体)的络合物。合适的配体公开在WO2011/098611中，其特此通过引用并入，特别是参考其中公开的式I至IX，它们代表典型的合适的HOPO配体。这样的配体可以单独使用或缀合至至少一个靶向部分，诸如抗体。最常见地，配体在如本文所述的步骤i)至iv)之前缀合至靶向部分。抗体、抗体构建体、抗体片段(例如FAB或F(AB)’2片段或包含至少一个抗原结合区域的任何片段)、片段的构建体(例如单链抗体)或其混合物是特别优选的靶向部分。 本发明的药物组合物因而可以包含Th4+ 离子(其与3,2- 羟基吡啶酮(3,2-HOPO)配体和至少一种抗体、抗体片段或抗体构建体的缀合物络合)(如本文所述提纯的)，以及任选的药学上可接受的载体和/或稀释剂。本文关于药物组合物描述的实施方案在可行时也形成对应方法的实施方案，反之亦然。 [0045] 本文中使用的术语“包含”被赋予开放含义，以使得另外组分可以任选地存在(因而公开了“开放”和“封闭”形式)。相反，术语“由……组成”仅被赋予封闭含义，以使得(在有效的、可测量的和/或绝对的程度上)仅会存在指示的那些物质(包括适当的任何任选物质)。相应地，被描述为“基本上由……组成”的混合物或物质将大体而言由所述的组分组成，以使得任何另外组分不在任何显著程度上影响基本性能。这样的混合物可以例如含有小于5%(例如0-5%)的其它组分，优选地小于1%和更优选地小于0.25%的其它组分。类似地，在将术语作为“基本上”、“左右”、“约”或“大约”给定值给出时，这允许确切的给定值，并独立地允许小偏差(variability)，特别是在这不影响所述性质的物质时。这样的偏差可以是例如±5%(例如±0.001%至5%)，优选地±1%，更优选地±0.25%。 [0046] 现在将参考下述非限制性实施例和附图进一步解释本发明，在附图中： 图1显示了227Th随时间的衰变以及223Ra和子同位素在28天中的对应生长。 [0047] 图2显示了227Th经由223Ra至稳定的207Pb的放射性衰变链。 [0048] 图3 显示了在微旋转柱上提纯络合的227Th的样品的实验步骤的示意图，其中227Th部分衰变至223Ra。 [0049] 图4显示了柠檬酸盐缓冲制剂中pH(x-轴)对227Th络合物的放射化学纯度(y轴)的影响。图a)含有NAP5纯度数据。图b)是iTLC纯度数据。在每个图上显示了不含pABA + EDTA(三角形数据系列)和含pABA + EDTA(正方形数据系列)的数据系列。 [0050] 图5 SDS-PAGE色谱图;样品1至4与施涂点与TTC(结合的227Th)和前线(游离的 227Th)。 实施例 [0051] 材料 乙酸钠三水合物(≥99.0%)、柠檬酸三钠二水合物(≥99.0%)、4-氨基苯甲酸钠盐(pABA, ≥99%)、依地酸二钠(EDTA，满足USP试验规范)和氢氧化钠(98.0-100.5%)购自Sigma-Aldrich (Oslo, 挪威)。无金属水(TraceSELECT)购自FLUKA (Buchs, 瑞士)。氯化钠(用于分析)和盐酸(发烟、37%、用于分析)购自Merck Millipore (Darmstadt, 德国)。柠檬酸一水合物(分析试剂)购自VWR (West Chester, USA)。乙酸(冰醋酸，100%无水用于分析)购自Merck (Darmstadt, 德国)。 [0052] 基于二氧化硅的PSA (丙基磺酸)阳离子交换树脂购自Macherey Nagel (Düren, 德国)。NAP5柱购自GE Healthcare Bio-Sciences AB (Uppsala, 瑞典)。Pierce微旋转柱购自Thermo Scientific Pierce (产品编号89879 (Rockford, USA)。 [0053] 使用来自Herceptin®(150.0 mg粉末，用于输注的溶液的浓缩物)的曲妥珠单抗并且其是Roche Registration Limited (Welwyn Garden City, 英国)的商标。为了制备缀合物，已经将自制的螯合剂连接到所述抗体上。得到的缀合物胶体混悬液是在柠檬酸钠缓冲剂0.10 M pH 5.1和0.90％ (w/w)氯化钠中的5.0 mg/ml缀合物。 [0054] 将在0.05 M盐酸和无金属水(自制产品)中的227Th (作为钍(IV))用作放射性来 227 223 227 源。为了积累至接近1:1的 Th和 Ra (作为镭(II))比例，储存 Th以衰变大约1个19天的半衰期。 [0055] 使用来自Agilent Technologies的用硅胶浸渍的iTLC-SG色谱纸用于即时薄层色谱(iTLC)分析(Santa Clara, CA)。 [0056] 以下材料用于十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE); LDS (4x)样品缓冲剂和NuPage 10% tris-bis凝胶来自Novex (Carlsbad, CA)。MES (20x)缓冲剂来自NuPage (Carlsbad, CA)。Instant blue来自Expedeon (Cambrideshire, UK)，且Precision Plus Protein双色标准来自BioRad (Hercules, CA)。 [0057] 实施例1 - 缓冲制剂的制备 在无金属水中制备储备柠檬酸盐缓冲剂(0.10 M pH 4.0、0.05 M pH 5.0和0.07 M pH 4.8)和储备乙酸盐缓冲剂(0.10 M pH 4.0、0.10 M pH 6.0和0.10 M pH 5.0)并用该无金属水稀释(在需要时)至在DOE的范围中使用的各自的缓冲剂浓度。随后将pABA (2.0 mg/ml )+EDTA (2.0 mM)和氯化钠添加至含有这些赋形剂的各自的缓冲制剂。 [0058] 在环境温度下使用经校准的来自Mettler Toledo (Oslo，挪威)的sevenMulti pH计彻底地控制储备物和最终制剂的pH。 [0059] 使用经校准的来自Mettler Toledo (Oslo, 挪威)的sevenMulti pH计，以在环境温度下测量储备物和最终制剂的pH。 [0060] 实施例2 含有PSA阳离子交换树脂的微旋转柱的制备 在无金属水中制备100.0mg/ml的PSA树脂混悬液。为了确保混悬液的同质性，使用涡旋混合器并将15.0、30.0和22.5mg树脂的所需体积加入到该微旋转柱中。 [0061] 为了调理经填充的树脂，将300μl各自的缓冲制剂加入该柱中，然后在Eppendorf舒适型恒温混合器(Hamburg, 德国)(对于DOE样品n = 1、2或3，并且对于中心点n = 2)上在10000 rcf下旋转1分钟，在进一步使用之前产生干燥的树脂床。 [0062] 用300µl各自的缓冲制剂调理所述柱。通过在恒温混合器上在10000 rcf旋转1分钟来除去多余体积，得到干燥柱(对于测试样品和中心点，n=2)。 [0063] 实施例3 – 络合和提纯 加入到每个样品中的放射性的量是大约250 kBq 227Th (作为TTC)和250 kBq 223Ra。 在使用之前，使冷冻的曲妥珠单抗-螯合物缀合物胶体混悬液平衡至环境温度。将50μl的缀合物加入具有在0.05M盐酸(1-5μl，取决于放射性浓度)中的500kBq 227Th和500kBq 223Ra的Eppendorf管中并与50μl各自的缓冲制剂混合。然后将样品在Eppendorf舒适型恒温混合器上振荡30分钟(22℃，750rpm，10s周期)，以标记具有衰变的227Th的缀合物并形成TTC。随后加入250μl缓冲制剂并与标记的缀合物(TTC)混合，然后将170μl该样品加入到每个微旋转柱(对于测试样品n = 1、2或3，对于中心点n = 2)。对于具有一个或三个平行样品的样品，根据需要调节放射性和体积，以保持与本文描述的两个平行样品相同的条件。将柱在在恒温混合器上10000 rcf下旋转1分钟，以洗脱该柱，并将经提纯的材料收集在eppendorf管中。 [0064] 实施例4 – 放射性测定 在计算放射性核素在柱和洗出液之间的分布之前，测量在实施例3的分离方法之后在阳离子交换柱上和在洗出液中的223Ra和227Th的量。使用来自Ortec (Oak Ridge, TN)的高纯度锗(HPGe)-检测器(GEM(15)的HPGe谱。该检测器鉴别和定量具有在大约30-1400 keV范围内的γ能量的放射性核素。将通过HPGe-检测器分析的所有样品放在相同位置并计数1 min。测量旋转后的柱上和洗出液中的227Th和223Ra的量，并借助于HPGe-检测器谱计算柱和洗出液之间的放射性核素的分布。该方法可以用于在制备放射性药物之前测定洗出液中的放射性同位素浓度，以确保标准活性和以验证放射化学(放射性同位素)纯度。 [0065] 实施例5 - 稳定性研究：TTC的放射化学纯度 放射性药物的放射化学纯度(RCP)是(在本情况中)以结合形式(即作为TTC)存在的 227Th与游离的227Th之间的关系。由于在高纯度锗(HPGe)检测器GEM(15)上仅测量放射性核素227Th和223Ra，所以TTC数据并不能排除游离的227Th。因此，在测量放射性核素的分离之后，(在同一天内)还使用相同的检测器在环境温度下分析了针对柱上和洗出液中的TTC和223Ra的分离进行分析的一些样品的RCP(凝胶过滤，iTLC，SDS-PAGE)。 [0066] 5.1 在NAP5柱上的凝胶过滤 为了分析TTC的放射化学纯度，使用NAP5柱(具有尺寸排阻的凝胶过滤)。遵循制造商的标准程序，并将200μl的样品体积加入到柱中。记录HPGe-检测器谱，以分析NAP5柱(n = 2)上的TTC的量。参见图4 a)。 [0067] 5.2 即时薄层色谱 将iTLC-SG色谱纸切下并通过在110-120℃的保温箱中加热20-30分钟来干燥以使其活化。用含有0.90％(w/w)氯化钠的大约0.5cm的0.10M柠檬酸盐缓冲剂pH 5.5(流动相)填充烧杯。将1-8μl的样品(在微旋转柱上提纯的TTC)施加到纸条的原点线(n = 2)。将条垂直放入烧杯中，小心避免对表面造成任何损坏。当溶剂到达溶剂前线时，将条从烧杯中取出并使其干燥。通过将条切成两半将条分成上部分和下部分，然后将条的每一部分放入计数管中。 分别测量每一半中的活性5分钟，并且借助于具有HPGe-检测器的Auto HPGe，Ortecγ谱仪(Oak Ridge，TN)计算在前线和施涂点处的227Th的百分比。针对在前线处的来自衰变的227Th的223Ra (其已经在分析的时间期间积累)的存在校正了结果。参见图4 b)。 [0068] 5.3 凝胶电泳(SDS-PAGE) 用SDS-PAGE分析表1(下文)中的柠檬酸盐缓冲的样品(n = 2)。 [0069] 遵循NuPAGE®Bis-Tris Mini Gels制造商的标准程序。通过混合950ml Milli Q水和50ml MES缓冲剂来制备MES运行缓冲剂。通过用LDS样品缓冲剂、Milli Q水和MES缓冲剂稀释至达到1.0mg/ml的缀合物浓度(在0.03M柠檬酸盐缓冲剂pH5.5和0.90％w/w氯化钠中)，制备样品。然后将样品混合并储存在冰上直至使用。将5μg缀合物加载到每个孔中(n = 2)。凝胶电泳在具有Power Pac Adapter，4mm和Power Pac Basic (BioRad，Hercules，CA)的XCell SureLock Mini-Cell (Invitrogen，Carlsbad，CA)上以200V的恒定电压手动运行。将凝胶用Instant Blue染色并在环境温度下温育60分钟。通过用水洗涤凝胶，终止染色反应。然后将凝胶移至透明薄膜并拍摄照片。参见图5。 [0070] 实施例6 – 分离优化。 [0071] 构思实验设计(DOE)来研究和优化在二氧化硅/PSA微旋转柱上分离223Ra与227Th的条件。对于每种缓冲剂(柠檬酸盐和乙酸盐)，研究了以下变量： 。 [0072] 使用在实施例1-5中指出的分离和分析方法研究了每个DoE变量。结果显示在表3中，它们解释了不同参数对放射性同位素吸收在PSA树脂上的影响。 1 2 223 边界线显著的, 用pABA/EDTA运行，高pH和低树脂质量促成了预测的 Ra中的增加的不确定性。 [0073] 发现高效分离条件的一些例子是： 。 [0074] 其中预测的TTC%是TTC在树脂上的预测吸收，且预测的223Ra %是223Ra在树脂上的预测吸收。高分离效率应当组合低TTC吸收和高223Ra吸收。