用于预防和/或治疗血吸虫病的组合物和方法 [0001] 相关申请的交叉引用 [0002] 本申请要求申请日为2014年2月14日的美国临时专利申请No.61/940,041的申请日权益，其公开内容通过提述并入本文。 发明领域 [0003] 本文公开了用于预防和治疗血吸虫病的包含多不饱和脂肪酸和治疗剂的组合物。 本文还公开了用于预防和治疗血吸虫病的方法、赋予针对血吸虫病的抗性的方法和预防血吸虫病复发的方法，所述方法包括施用多不饱和脂肪酸和治疗剂。 [0004] 发明背景 [0005] 血吸虫病(Schistosomiasis)(也称为裂体吸虫病(bilharzias)、裂体吸虫病(bilharziosis)、或腹足热(snail fever))是一种严重的寄生虫病，其由血吸虫属的吸虫(fluke)的数个种引起。该疾病主要见于亚洲、非洲和南美洲，尤其是在有水的区域，所述水含有携带寄生虫的腹足类动物。其是仅次于疟疾的第二常见的寄生虫病，并且主要影响儿童。血吸虫病由血吸虫属(Schistosoma)的扁形虫(platyhelminth worm)引起，其是一种生活在人和动物的血流中的吸虫。三个种(曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)、埃及血吸虫(Schistosoma haematobium)和日本血吸虫(Schistosoma japonicum))占了绝大多数的感染。血吸虫与血流方向反向迁移至它们的长期寄居处，其中曼氏血吸虫(S.masoni)和日本血吸虫(S.japonicum)迁移至下方深层静脉丛(inferior mesoteric)而埃及血吸虫(S.haematobium)迁移至外周膀胱静脉丛。血吸虫在导管(conduit)附近产卵，以便卵通过至外部环境从而完成生命周期。因此，每天有大量的卵从毛细血管排出至肠或膀胱的内腔，由此，其可以通过分析粪便和尿样来检测。 [0006] 花生四烯酸(ARA)，全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸(all-cis 5,8,11,14-eicosatetreanoic acid)，是一种ω-6脂肪酸：20:4(ω-6)，其存在于身体的细胞的膜的磷脂质中，并且推测其起杀伤雌雄曼氏血吸虫和埃及血吸虫幼虫和成虫的作用。 [0007] 吡喹酮(PZQ)是目前仅有的用于治疗血吸虫病(尤其是曼氏血吸虫)的药物。然而，其在儿童中治疗后的治疗失败率与高强度的感染一直是相关的，需要重复治疗且加速了致使血吸虫对该药物产生抗性的威胁。此外，未显示PZQ赋予针对血吸虫的抗性。因此，需要一种单独或与PZQ组合的组合物，其用于治疗和/或预防血吸虫病，及赋予针对血吸虫病的抗性和/或预防血吸虫病的复发。 [0008] 发明概述 [0009] 本发明涉及用于预防和治疗血吸虫病的组合物和方法。本发明还涉及赋予针对血吸虫病的抗性和/或预防血吸虫病的复发的方法。 [0010] 在优选的实施方案中，组合物包含多不饱和脂肪酸(PUFA)和治疗剂。优选地，所述组合物包含的PUFA是ω-6脂肪酸。更优选地，所述组合物包含的PUFA是ω-6脂肪酸，其为全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸，也称为花生四烯酸(ARA)。在优选的实施方案中，所述治疗剂是2-(环己基羰基)-1,2,3,6,7,11b-六氢-4H-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮，也称为吡喹酮(PZQ)，或其衍生物。 [0011] 在一个实施方案中，本发明的方法包括施用多不饱和脂肪酸(PUFA)和治疗剂。在一个实施方案中，所述PUFA以一个剂量施用，而所述治疗剂以第二剂量施用。在另一个实施方案中，所述PUFA和治疗剂以相同剂量施用。优选地，所述PUFA是ω-6脂肪酸。更优选地，所述PUFA是ω-6脂肪酸，其为全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸，也称为花生四烯酸(ARA)。在优选的实施方案中，所述治疗剂是2-(环己基羰基)-1,2,3,6,7,11b-六氢-4H-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮，也称为吡喹酮(PZQ)，或其衍生物。 [0012] 发明详述 [0013] 本文公开了用于预防和/或治疗血吸虫病的组合物，其包含多不饱和脂肪酸和治疗剂。本文还公开了用于预防和/或治疗血吸虫病的方法、赋予针对血吸虫病的抗性的方法和预防血吸虫病复发的方法，所述方法包括以治疗有效量施用多不饱和脂肪酸和治疗剂。 [0014] 本发明的特征和优点可通过阅读下文的详细说明而更容易地为本来普通技术人员所理解。应当了解，本发明出于清楚目的而在上下文中的分离的实施方案所描述的某些特征，也可以组合在一起从而获得其亚组合。 [0015] 本文示例性地鉴定的实施方案意在说明而非限制。 [0016] 术语“约”意在涵盖所述数字之上和之下的变化，所述变化能达到与所述数字基本相同的效果。 [0017] 脂肪酸基于碳链的长度和饱和度特征来分类。微生物油中存在的脂肪酸可具有4- 28个碳原子且基于链中存在的碳原子数目而被称为短链、中链、或长链脂肪酸。当碳原子之间不存在双键时则将该脂肪酸称为饱和脂肪酸，当存在双链时则称为不饱和脂肪酸。当不饱和长链脂肪酸中仅存在一个双键时，其是单不饱和的，当存在多于一个双键时，其是多不饱和的。 [0018] 多不饱和脂肪酸(PUFA)基于其第一个双键距脂肪酸的甲基末端的位置而加以分类；ω-3(n-3)脂肪酸含有的第一个双键位于第3个碳处，而ω-6(n-6)脂肪酸含有的第一个双键位于第6个碳处。例如，二十二碳六烯酸(DHA)是一种ω-3长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)，其具有22个碳的链长及6个双键，常表示为“22:6n-3”。在一个实施方案中，PUFA选自ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸，或其混合物。在另一个实施方案中，PUFA选自长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)。在更进一步的实施方案中，PUFA选自二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)、花生四烯酸(ARA)、γ-亚麻酸(GLA)、二高-γ-亚麻酸(DGLA)、十八碳四烯酸(SDA)，及其混合物。在另一个实施方案中，PUFA选自DHA、ARA，及其混合物。在又一个的实施方案中，PUFA为DHA。在又一个的实施方案中，PUFA为ARA。 [0019] LC-PUFA是含有至少3个双键且具有18个或更多个碳或20个或更多个碳的链长的脂肪酸。ω-6系列的LC-PUFA包括但不限于二-高-γ亚油酸(C20:3n-6)、花生四烯酸(C20: 4n-6)("ARA")、二十二碳四烯酸或肾上腺酸(C22:4n-6)、和二十二碳五烯酸(C22:5n-6)("DPA n-6")。ω-3系列的LC-PUFA包括但不限于二十碳三烯酸(C20:3n-3)、二十碳四烯酸(C20:4n-3)、二十碳五烯酸(C20:5n-3)("EPA")、二十二碳五烯酸(C22:5n-3)、和二十二碳六烯酸(C22:6n-3)。LC-PUFA还包括大于22个碳及4个或更多个双键的脂肪酸，包括但不限于C24:6(n-3)和C28:8(n-3)。 [0020] PUFA可以呈游离脂肪酸、盐、脂肪酸酯(例如甲酯或乙酯)、单酰甘油(MAG)、二酰甘油(DAG)、三酰甘油(TAG)和/或磷脂(PL)的形式。 [0021] 任何PUFA来源均可用于本发明的组合物和方法中，包括，例如动物、植物和微生物来源。优选的多不饱和脂肪酸(PUFA)来源可以是适于在本发明中使用的任何PUFA来源。 [0022] 动物来源的例子包括水生动物(例如鱼、海洋哺乳动物、甲壳类、轮虫类等等)。示例性的植物来源包括微藻、亚麻籽、油菜籽、谷物/玉米、月见草(primrose)和玻璃苣(borage)。微生物的例子包括微藻、原生生物、细菌和真菌(包括酵母)。微生物来源(如微藻)的使用能提供感官优势。 [0023] 根据本发明，用于本文所述组合物中的多不饱和脂肪酸呈多种形式，例如包括但不限于如下的形式：包含PUFA的高度纯化的藻类油、包含PUFA的植物油、包含PUFA的甘油三酯油、包含PUFA的磷脂、包含PUFA的蛋白质与磷脂质的组合、包含PUFA的干燥的海洋微藻类、包含PUFA的鞘脂类、PUFA的酯类、游离脂肪酸、PUFA与另一生物活性分子的缀合物，及它们的缀合物。 [0024] 在一个实施方案中，所述组合物包含多不饱和脂肪酸(PUFA)及治疗剂。优选地，所述组合物包含的PUFA是ω-6脂肪酸。更优选地，所述组合物包含的PUFA是ω-6脂肪酸，其为全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸，也称为花生四烯酸(ARA)。在一个实施方案中，所述组合物包含的治疗剂是杀吸虫剂。优选地，所述组合物包含的治疗剂是杀吸虫剂，其为2-(环己基羰基)-1,2,3,6,7,11b-六氢-4H-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮，也称为吡喹酮(PZQ)，或其衍生物。 [0025] 在一些实施方案中，所述PUFA以一个剂量施用，而所述治疗化合物以第二剂量施用。 [0026] 在一些实施方案中，PUFA以约5mg/kg体重/天、约7mg/kg体重/天、约10mg/kg体重/天、约12mg/kg体重/天、约15mg/kg体重/天、或约5至约15mg/kg体重/天、约7至约12mg/kg体重/天、约9至约11mg/kg体重/天的量施用。 [0027] 在一个实施方案中，PUFA以约10mg/kg体重/天的量施用。 [0028] 在一些实施方案中，PUFA以约10mg/kg体重/天至约600mg/kg体重/天、约20mg/kg体重/天至约550mg/kg体重/天、约40mg/kg体重/天至约500mg/kg体重/天、约50mg/kg体重/天至约450mg/kg体重/天、约60mg/kg体重/天至约400mg/kg体重/天、约70mg/kg体重/天至约350mg/kg体重/天、约80mg/kg体重/天至约300mg/kg体重/天、约90mg/kg体重/天至约 250mg/kg体重/天、约100mg/kg体重/天至约200mg/kg体重/天、约110mg/kg体重/天至约 150mg/kg体重/天、约10mg/kg体重/天约20mg/kg体重/天、约30mg/kg体重/天、约40mg/kg体重/天、约50mg/kg体重/天、约60mg/kg体重/天、约70mg/kg体重/天、约80mg/kg体重/天、约 90mg/kg体重/天、约100mg/kg体重/天、约110mg/kg体重/天、约120mg/kg体重/天、约130mg/kg体重/天、约140mg/kg体重/天、约150mg/kg体重/天、约160mg/kg体重/天、约170mg/kg体重/天、约180mg/kg体重/天、约190mg/kg体重/天、约200mg/kg体重/天、约250mg/kg体重/天、约300mg/kg体重/天、约350mg/kg体重/天、约400mg/kg体重/天、约450mg/kg体重/天、约 500mg/kg体重/天、约550mg/kg体重/天、约600mg/kg体重/天的量施用。 [0029] 在一个实施方案中，PUFA以约150mg/kg体重/天的量施用。 [0030] 在一些实施方案中，PUFA以单剂或多剂施用。 [0031] 在一些实施方案中，PUFA在约30天、约20天、约15天、约10天、约5天、或约1至30天、约1至20天、约1至15天、约1至10天、约1至5天施用。 [0032] 在一些实施方案中治疗剂以约20mg/kg体重/天的量、约25mg/kg体重/天的量、约 30mg/kg体重/天的量、约35mg/kg体重/天的量、约40mg/kg体重/天的量、约45mg/kg体重/天的量、约50mg/kg体重/天的量、约55mg/kg体重/天的量、约60mg/kg体重/天的量、约20至约 60mg/kg体重/天的量、约25至约55mg/kg体重/天的量、约30至约50mg/kg体重/天的量、约35至约45mg/kg体重/天的量施用。 [0033] 在一个实施方案中，治疗剂以约40mg/kg体重/天的量施用。 [0034] 在一些实施方案中，所述血吸虫病是曼氏血吸虫、埃及血吸虫和日本血吸虫。在一些实施方案中，所述血吸虫病是曼氏血吸虫。 [0035] 在一个实施方案中，本文公开的方法包括施用多不饱和脂肪酸(PUFA)和用于治疗或预防血吸虫病的治疗剂。在另一个实施方案中，本文公开的方法包括施用多不饱和脂肪酸和治疗剂以赋予针对血吸虫病的抗性。在另一个实施方案中，本文公开的方法包括施用多不饱和脂肪酸和治疗剂以预防血吸虫病的复发。 [0036] 在一些实施方案中，PUFA是ω-6脂肪酸。更优选地，PUFA是ω-6脂肪酸，其为全-反式5,8,11,14-二十烷四烯酸，也称为花生四烯酸(ARA)。 [0037] 在一些实施方案中，治疗剂是杀吸虫剂。优选地，治疗剂是杀吸虫剂，其为2-(环己基羰基)-1,2,3,6,7,11b-六氢-4H-吡嗪并[2,1-a]异喹啉-4-酮，也称为吡喹酮(PZQ)，或其衍生物。 [0038] 在一些实施方案中，PUFA以一个剂量施用，而所述治疗化合物以第二剂量施用。 [0039] 在一些实施方案中，PUFA以约5mg/kg体重/天、约7mg/kg体重/天、约10mg/kg体重/天、约12mg/kg体重/天、约15mg/kg体重/天或约5至约15mg/kg体重/天、约7至约12mg/kg体重/天、约9至约11mg/kg体重/天的量施用。 [0040] 在一个实施方案中，PUFA以约10mg/kg体重/天的量施用。 [0041] 在一些实施方案中，PUFA以约10mg/kg体重/天至约600mg/kg体重/天、约20mg/kg体重/天至约550mg/kg体重/天、约40mg/kg体重/天至约500mg/kg体重/天、约50mg/kg体重/天至约450mg/kg体重/天、约60mg/kg体重/天至约400mg/kg体重/天、约70mg/kg体重/天至约350mg/kg体重/天、约80mg/kg体重/天至约300mg/kg体重/天、约90mg/kg体重/天至约 250mg/kg体重/天、约100mg/kg体重/天至约200mg/kg体重/天、约110mg/kg体重/天至约 150mg/kg体重/天、约10mg/kg体重/天约20mg/kg体重/天、约30mg/kg体重/天、约40mg/kg体重/天、约50mg/kg体重/天、约60mg/kg体重/天、约70mg/kg体重/天、约80mg/kg体重/天、约 90mg/kg体重/天、约100mg/kg体重/天、约110mg/kg体重/天、约120mg/kg体重/天、约130mg/kg体重/天、约140mg/kg体重/天、约150mg/kg体重/天、约160mg/kg体重/天、约170mg/kg体重/天、约180mg/kg体重/天、约190mg/kg体重/天、约200mg/kg体重/天、约250mg/kg体重/天、约300mg/kg体重/天、约350mg/kg体重/天、约400mg/kg体重/天、约450mg/kg体重/天、约 500mg/kg体重/天、约550mg/kg体重/天、约600mg/kg体重/天的量施用。 [0042] 在一个实施方案中，PUFA以约150mg/kg体重/天的量施用。 [0043] 在一个实施方案中，PUFA以单剂或多剂施用。 [0044] 在一些实施方案中，PUFA在约30天、约20天、约15天、约10天、约5天、约1至30天、约 1至20天、约1至15天、约1至10天、约1至5天施用。 [0045] 在一些实施方案中，治疗剂以约20mg/kg体重/天的量、约25mg/kg体重/天的量、约 30mg/kg体重/天的量、约35mg/kg体重/天的量、约40mg/kg体重/天的量、约45mg/kg体重/天的量、约50mg/kg体重/天的量、约55mg/kg体重/天的量、约60mg/kg体重/天的量、约20至约 60mg/kg体重/天的量、约25至约55mg/kg体重/天的量、约30至约50mg/kg体重/天的量、约35至约45mg/kg体重/天的量施用。 [0046] 在一个实施方案中，治疗剂以40mg/kg体重/天的量施用。 [0047] 在一些实施方案中，所述血吸虫病是曼氏血吸虫、埃及血吸虫和日本血吸虫。在一些实施方案中，所述血吸虫病是曼氏血吸虫。 实施例 [0048] 实施例1 [0049] 受试者 [0050] 对埃及开罗北边约100公里处的姆努菲亚(Menoufiya)省中三个地区的村庄中约 2000名学龄儿童进行了筛选。对每个儿童连续3天通过Kato-Katz方法检查了粪便样品的两个显微镜载玻片，并记录了每克卵计数(epg)。筛选出了66名儿童作为测试受试者，44名男性和22名女性，6-15周岁(均值±SD＝11.7±1.6)，其体重范围为25-52kg(均值±SD＝37.8±8.6)，epg为24-384。用20名性别、年龄、和社会条件匹配的无寄生虫儿童作为对照。 [0051] 治疗 [0052] 将66名儿童随机分入3组，其中在治疗第一天对第一组的20名儿童给予单口服剂的吡喹酮(PZQ)(40mg/kg体重)，并在随后3周给予安慰剂(5剂/周)(“PZQ-安慰剂治疗”)。所述PZQ为Distocide(Epico,El-Asher-Men-Ramadan City,Egypt)。所述安慰剂为1g VegCap，其含有谷物/玉米-大豆(DSM Nutritional Products,Columbia,Maryland)。第二组的23名儿童在3周(5天/周)接受了15天的ARA(10mg/kg体重/天)(“ARA治疗”)。所述ARA为 1g VegCap(DSM)，其含有约395mg ARA/胶囊。第三组的23名儿童在治疗第一天被给予了吡喹酮(40mg/kg体重)然后接受了15剂的ARA(10mg/kg/天；5剂/周)(“PZQ+ARA治疗”)。 [0053] 研究设计 [0054] 在治疗开始前2-3天和ARA(或ARA+PZQ)治疗结束后3天(其对应于仅PZQ治疗后18天)从每个儿童获得约10ml血液。在ARA治疗结束后1周(对应于仅PZQ治疗后4周)和ARA治疗结束后6周(对应于仅PZQ治疗后9周)，在连续3天从每个儿童获得粪便样品。在每个粪便样品上评估Epg。 [0055] 生化及血液学参数 [0056] 将用于生化分析的样品置于光管(plain tube)并允许其凝结至少60分钟，离心，并收集血清。将2ml血样分装于含有EDTA的管中并通过自动血液学分析仪(XT 1800i,Sysmex Corporation)进行分析。 [0057] 血浆白细胞介素-10(IL-10)及干扰素-γ(IFN-γ) [0058] 在以400g离心20分钟后，从肝素化的血液恢复血浆，并储存于-76℃，直至根据制造商的实验方案通过捕获酶联免疫吸附测定法(ELISA)来测定其的IL-10和IFN-γ水平(ELISA MAXTM Set,BioLegend,San Diego,California)。 [0059] 针对寄生虫抗原的全血细胞因子响应 [0060] 将肝素化的全血细胞以1:4稀释于Roswell Park Memorial Institute(RPMI)- 1640培养基中，所述培养基补充有200U/ml青霉素、200μg/mL链霉素、50ng/mL两性霉素和20μg/mL多粘菌素B(Sigma)作为抗原的任何残余脂多糖污染的抑制剂。在无菌圆底孔微量滴定板的重复的孔中将200μl稀释的血液与50μl的培养基温育，所述培养基含有0或40μg/mL的重组曼氏血吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(rSG3PDH)。于37℃/3％CO2将全血培养物温育72小时，然后于400g离心10分钟。将无细胞上清液转移至无菌平板的孔中，并储存在-76℃直至根据制造商的实验方案通过捕获ELISA来测定其释放的IL-4、IL-17和IFN-γ水平(ELISA TM MAX Set,BioLegend,San Diego,California)。 [0061] 结果 [0062] 将具有<100的初始基线epg计数的受试者分类为具有低度感染。将具有>100但< 400的初始基线epg计数的受试者分类为具有中度感染。将具有>400的初始基线epg计数的受试者分类为具有高度感染。 [0063] 所有治疗组在中度感染组中的％治愈率低于低度感染组。PZQ-安慰剂中度和高度感染组的％治愈为67％，相比之下低度感染组为71％。ARA中度和高度感染组的％治愈为 50％，相比之下低度感染组为77％。PZQ-ARA中度和高度感染组的％治愈率为71％，相比之下低度感染组为94％。PZQ-ARA治疗组相比于PZQ-安慰剂治疗组或ARA治疗组，对于低度感染组产生了较高的％治愈率(分别为94％、71％和77％)。PZQ-ARA的％治愈率相比于PZQ-安慰剂治疗组或ARA治疗组，对于中度和高度感染组产生了较高的％治愈率(分别为71％、 67％和50％)。 [0064] PZQ-安慰剂治疗的效力 [0065] 表1：PZQ-安慰剂治疗 [0066] 具有初始基线epg<100的受试者 [0067] [0068] [0069] 如表1中所示，PZQ-安慰剂治疗对具有低度感染的儿童产生了71％治愈率(10/14的儿童在9周后呈现0epg)。 [0070] 表2：PZQ-安慰剂治疗 [0071] 具有初始基线epg>100的受试者 [0072] 受试者编号 基线epg 第4周处epg 第9周处epg 22 120 0 10 25 192 16 0 28 120 ---- 30 31 168 0 0 43 3312 ---- 0 51 192 0 0 [0073] 如表2所示，PZQ-安慰剂对于具有中度和高度感染的儿童产生了67％治愈率(4/6儿童在9周后呈现0epg)。 [0074] ARA治疗的效力 [0075] 表3：ARA治疗 [0076] 具有初始基线epg<100的受试者 [0077] [0078] [0079] 如表3所示，ARA治疗对于具有低度感染的儿童产生了77％治愈率(10/13儿童在第 9周后呈现0epg)。 [0080] 表4：ARA治疗 [0081] 具有初始基线epg>100的受试者 [0082] 受试者编号 基线epg 第4周后epg 第9周后epg 2 144 96 48 20 192 48 28 23 192 60 20 26 168 96 152 29 384 240 0 38 312 96 0 44 912 749 0 52 286 216 108 55 192 84 0 62 120 0 0 [0083] 如表4所示，ARA治疗组对具有中度和高度感染的儿童产生了50％治愈率(5/10)。 [0084] PZQ-ARA治疗的效力 [0085] 表5：PZQ-ARA治疗 [0086] 具有初始基线epg<100的受试者 [0087] [0088] [0089] 如表5所示，PZQ-ARA治疗对具有低度感染的儿童产生了94％治愈率(15/16儿童在第9周后呈现0epg)。 [0090] 表6：PZQ-ARA治疗 [0091] 具有初始基线epg>100的受试者 [0092] 受试者编号 基线epg 第4周后epg 第9周后epg 15 384 248 0 18 192 88 0 24 192 0 0 27 1800 102 40 30 672 0 0 42 288 0 10 45 120 29 0 [0093] 如表6所示，PZQ-ARA治疗对于具有中度和高度感染内的儿童产生了71％治愈率(5/7儿童在第9周后呈现0epg)。 [0094] 实施例2 [0095] 受试者 [0096] 对来自El Kafr Sheikh的学龄儿童进行了类似于上文实施例1中的那些学龄儿童的筛选。 [0097] 治疗 [0098] 将儿童随机分入三组，其中第一组的儿童在治疗第一天被给予口服剂的吡喹酮(40mg/kg体重)，并在随后3周被给予安慰剂(5剂/周)(“PZQ-安慰剂治疗”)。所述PZQ为Distocide(Epico,El-Asher-Men-Ramadan City,Egypt)。所述安慰剂为1g VegCap，其含有谷物/玉米-大豆(DSM Nutritional Products,Columbia,Maryland)。第二组的23名儿童在 3周(5天/周)接受了15天的ARA(10mg/kg体重/天)(“ARA治疗”)。所述ARA为1g VegCap(DSM)，其含有约395mg ARA/胶囊。第三组的23名儿童在治疗第一天被给予了吡喹酮(40mg/kg体重)然后接受了15剂的ARA(10mg/kg/天；5剂/周)(“PZQ+ARA治疗”)。 [0099] 研究设计 [0100] 在治疗开始前2-3天和ARA(或ARA+PZQ)治疗结束后3天(其对应于仅PZQ治疗后18天)从每个儿童获取约10ml血液。在ARA治疗结束后1周(对应于仅PZQ治疗后4周)和ARA治疗结束后6周(对应于仅PZQ治疗后9周)，在连续3天从每个儿童获取粪便样品。在每个粪便样品上评估Epg。 [0101] 生化及血液学参数 [0102] 将用于生化分析的样品置于光管并允许其凝结至少60分钟，离心，并收集血清。将 2ml血样分装于含有EDTA的管中并通过自动血液学分析仪(XT 1800i,Sysmex Corporation)进行分析。 [0103] 血浆白细胞介素-10(IL-10)及干扰素-γ(IFN-γ) [0104] 在以400g离心20分钟后，从肝素化的血液恢复血浆，并储存于-76℃，直至根据制造商的实验方案通过捕获酶联免疫吸附测定法(ELISA)来测定其的IL-10和IFN-γ水平(ELISA MAXTM Set,BioLegend,San Diego,California)。 [0105] 针对寄生虫抗原的全血细胞因子响应 [0106] 将肝素化的全血细胞以1:4稀释于Roswell Park Memorial Institute(RPMI)- 1640培养基中，所述培养基补充有200U/ml青霉素、200μg/mL链霉素、50ng/mL两性霉素和20μg/mL多粘菌素B(Sigma)作为抗原的任何残余脂多糖污染的抑制剂。在无菌圆底孔微量滴定板的重复的孔中将200μl稀释的血液与50μl的培养基温育，所述培养基含有0或40μg/mL的重组曼氏血吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(rSG3PDH)。于37℃/3％CO2将全血培养物温育72小时，然后于400g离心10分钟。将无细胞上清液转移至无菌平板的孔中，并储存在-76℃直至根据制造商的实验方案通过捕获ELISA来测定其释放的IL-4、IL-17和IFN-γ水平(ELISA MAXTM Set,BioLegend,San Diego,California)。 [0107] 结果 [0108] 将具有<100的初始基线epg计数的受试者分类为具有低度感染。将具有>100但< 400的初始基线epg计数的受试者分类为具有中度感染。将具有>400的初始基线epg计数的受试者分类为具有高度感染。 [0109] 所有治疗组在高度感染组中的％治愈率低于中度感染组或低度感染组。所有治疗组在中度感染组中的％治愈率低于低度感染组。 [0110] PZQ-ARA治疗组的％治愈率相比于PZQ-安慰剂治疗组或ARA治疗组，对于低度感染组产生了较高的％治愈率(分别为74％、57％和50％)。参见表7。 [0111] PZQ-ARA治疗组的％治愈率相比于PZQ-安慰剂治疗组或ARA治疗组，对于中度感染组产生了较高的％治愈率(分别为73％、70％和49％)。参见表8。 [0112] PZQ-ARA治疗组的％治愈率相比于PZQ-安慰剂治疗组或ARA治疗组，对于高度感染组产生了较高的％治愈率(分别为84％、81％和65％)。参见表9。 [0113] 在所有治疗组中显示了降低的循环IL-10和IFN-γ水平。单独用ARA或与PZQ组合的治疗在使儿童的免疫响应改变为趋向减少的IL-10和IFN-γ产生方面是更有效的。这些免疫抑制性IL-10和IFN-γ水平的显著降低指示针对血吸虫再感染的抗性。参见表10和11。 [0114] 表7：用PZQ、ARA或PZQ+ARA的治疗的效果 [0115] 具有初始基线epg<100的受试者 [0116] 治疗 儿童数量 基线均值epg 治愈的％ ％epg降低* PZQ 35 38.7 57(20/35) 50 ARA 43 34.2 50(22/43) -2.6 PZQ+ARA 39 41.3 74(29/39) 52 [0117] *％epg降低＝((均值基线epg–治疗后6周的均值)/均值基线epg)*100[0118] 表8：用PZQ、ARA或PZQ+ARA的治疗的效果 [0119] 具有初始基线epg>100且<400的受试者 [0120] 治疗 儿童数量 基线均值epg 治愈的％ ％epg降低* PZQ 23 226.1 43(10/23) 70 ARA 29 195.6 28(4/19) 49 PZQ+ARA 26 215.8 73(19/26) 73 [0121] *％epg降低＝((均值基线epg–治疗后6周的均值)/均值基线epg)*100[0122] 表9：用PZQ、ARA或PZQ+ARA的治疗的效果 [0123] 具有初始基线epg>400epg的受试者 [0124] 治疗 儿童数量 基线均值epg 治愈的％ ％epg降低* PZQ 26 979.5 30(8/26) 81 ARA 19 961.3 21(8/29) 65 PZQ+ARA 22 805.6 68(15/22) 84 [0125] *％epg降低＝((均值基线epg–治疗后6周的均值)/均值基线epg)*100[0126] 表10：用PZQ、ARA或PZQ+ARA对IL-10水平的治疗效果 [0127] [0128] 表11：用PZQ、ARA或PZQ+ARA对IFN-γ水平的治疗效果 [0129]