[0001] 本发明涉及一种中药提取物，更具体地涉及一种由黄芩山药水煎浓缩提取物、黄芩苷、山药乙醇提取物与山药多糖组成的中药提取物，该中药提取物的制备方法以及该中药提取物在用于制备减少癌症化疗相关性腹泻并对癌症治疗起增效作用的药物中的用途。

[0002] 恶性肿瘤是当前危害人类生存，健康的主要疾病之一，其治疗手段包括手术、化疗、放疗、中医药治疗，而化疗治疗肿瘤的效果尤为突出。化疗药无论单用或联合用均会引起患者腹泻等毒副反应，肿瘤化疗后腹泻又叫化疗相关性腹泻。近年来随着化疗药物如5-氟尿嘧啶、紫杉烷类、羟基喜树碱、伊立替康、希罗达等的面世及推广应用，化疗相关性腹泻的发生率逐年提高，而且若不进行积极治疗，易导致患者脱水、营养不良、血清电解质紊乱、酸碱平衡失调等，不仅对机体的康复带来极大的不利，也给周期性化疗带来一定的困难，因此对化疗相关性腹泻的有效治疗已成为肿瘤患者整体治疗的重要组成部分。

[0003] 化疗相关性腹泻就其临床表现来看，当属中医学“泄泻”范畴，中医药对于泄泻的研究，令人瞩目，但是目前尚无对抗癌症化疗具有减轻腹泻及增效作用的中成药。因此，研发一种高效低毒、价格低廉，易于推广的可用于减轻癌症化疗相关性腹泻并起化疗增效作用的天然中药成为临床亟待解决的问题。

[0004] 黄芩为唇形科植物黄芩的根,主治痢疾，山药为多年生缠绕草本，中药、蔬菜兼用，对脾虚泄泻有治疗作用。近年来，黄芩和山药抗癌作用得到证实，本发明人经过大量的各配方比例的研究和实验，最后获得了本发明的最佳药物比例组合物，并证明了其对癌症化疗相关性腹泻有极好的疗效并能同时对化疗增效，由此完成了本发明。

[0005] 发明内容本发明提供的一种中药提取物，由黄芩山药水煎浓缩提取物、黄芩苷、山药乙醇提取物与山药多糖以重量计按1-3:6-9:3-7:4-6的比例组成。

[0006] 上述中药提取物，其中黄芩山药水煎浓缩提取物、黄芩苷、山药乙醇提取物与山药多糖的用量比例是3:9:7:6。

[0007] 其中，黄芩山药水煎浓缩提取物、黄芩苷、山药乙醇提取物可通过本领域技术人员公知的常规方法进行提纯获得，常规方法获得的这些成分或商业购得的成分组成的本发明的天然药物均能获得相同的疗效。

[0008] 优选地，上述中药提取物中黄芩山药水煎浓缩提取物的制备方法是：按照配伍比例为1-4∶1取黄芩、山药，蒸馏水浸泡，加热煎煮1h，绢布过滤，药渣再加蒸馏水，同法浸泡、煎煮、过滤，将两次滤液混合，加热浓缩，超滤膜过滤，70℃减压干燥即得。

[0009] 上述中药提取物中黄芩苷的制备方法是：黄芩烘干，粉碎过筛，80%乙醇加热提取两次，合并滤液，回收乙醇，加适量蒸馏水，加浓盐酸调pH3-4，静置1h后滤去杂质，滤液于40℃ 调pH1.5-2，保温30min，抽滤，沉淀水洗至pH6.5-7.0，干燥即得。

[0010] 上述中药提取物中山药乙醇提取物制备方法是：取山药粉末，95％乙醇回流提取3次，去掉上清液，滤渣用蒸馏水在45℃提取4次，收集提取液，离心，收集上清液，将上清液浓缩，加入乙醇，4℃放置过夜，离心，收集沉淀，分别用乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，冷冻干燥，即得。

[0011] 上述中药提取物中山药多糖制备方法是：将上述山药乙醇提取物加水复溶配成5％溶液，加入Sevag试剂，震荡，离心，取上清液，加Sevag试剂，如此重复多次，直至无白色中间层沉淀，收集上清液浓缩，分别用自来水和蒸馏水透析，加入乙醇，4℃放置过夜，离心，收集沉淀，分别用乙醇、丙酮和乙醚洗涤沉淀，冷冻干燥，即得。

[0012] 本发明还提供了该中药提取物的优选的制备方法，包括：（1）黄芩山药水煎浓缩提取物的制备
按照配伍比例为1-4∶1取黄芩、山药，蒸馏水浸泡，加热煎煮1h，绢布过滤，药渣再加蒸馏水，同法浸泡、煎煮、过滤，将两次滤液混合，加热浓缩，超滤膜过滤，70℃减压干燥即得。

[0013] （2）黄芩苷的制备黄芩烘干，粉碎过筛，80%乙醇加热提取两次，合并滤液，回收乙醇，加适量蒸馏水，加浓盐酸调pH3-4，静置1h后滤去杂质，滤液于40℃ 调pH1.5-2，保温30min，抽滤，沉淀水洗至pH6.5-7.0，干燥即得。

[0014] （3）山药乙醇提取物制备取山药粉末，95％乙醇回流提取3次，去掉上清液，滤渣用蒸馏水在45℃提取4次，收集提取液，离心，收集上清液，将上清液浓缩，加入乙醇，4℃放置过夜，离心，收集沉淀，分别用乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，冷冻干燥，即得。

[0015] （4）山药多糖制备将上述山药乙醇提取物加水复溶配成5％溶液，加入Sevag试剂，震荡，离心，取上清液，加Sevag试剂，如此重复多次，直至无白色中间层沉淀，收集上清液浓缩，分别用自来水和蒸馏水透析，加入乙醇，4℃放置过夜，离心，收集沉淀，分别用乙醇、丙酮和乙醚洗涤沉淀，冷冻干燥，即得。

[0016] （5）按比例选取黄芩山药水煎浓缩提取物、黄芩苷、山药乙醇提取物与山药多糖，均匀混合，即得。

[0017] 上述中药提取物的制备方法，还包括：将步骤（5）制得的产品进一步通过常规的制药手段制成含有中药提取物100mg或200mg规格的胶囊或片剂。

[0018] 本发明中药提取物在抗化疗相关性腹泻及抑制肿瘤方面的有益效果如下：1、本发明中药提取物，在伊立替康导致小鼠腹泻模型的研究表明：对于伊立替康所致小鼠的腹泻反应有明显的对抗作用。

[0019] 2、证明了本中药提取物能增强化疗药物对肿瘤的抑制作用，采用了小鼠肿瘤模型，观察该中药提取物与环磷酰胺联合对小鼠体内肿瘤的抑制作用。研究表明：该中药提取物能明显增加环磷酰胺对于肿瘤的抑制作用。

[0020] 3、本发明人独创地将黄芩山药水煎浓缩提取物、黄芩苷、山药乙醇提取物与山药多糖进行组合，并通过大量实验确定这些组分之间的用量配比，使该组合物发挥了很好的协同作用，经过反复实验研究，本发明的中药提取物各组分的比例在1-3:6-9:3-7:4-6时产生了出乎意料的协同作用，增效明显，对副作用起到非常好的效果，尤其在各组分的用量比例是3:9:7:6时尤其明显，这是本发明人付出大量创造性劳动而获得的，本领域普通技术人员仅仅通过公开的内容无法简单获得这种配比范围以及最佳用量比例。

[0021] 4、该中药提取物黄芩山药水煎浓缩提取物、黄芩苷、山药乙醇提取物与山药多糖各组分均可通过常规手段获得，组分如黄芩苷与山药多糖还可通过商业购得，这样的组合物本身具有获得方便、成本较低的效果。这也是发明人通过大量创造性劳动方获得的兼具极佳疗效和较高工业实用性的产品。

[0022] 下面通过实施例和试验例进一步阐述本发明中药提取物的制备，以及其在抗腹泻和抗肿瘤中应用的有益效果。

[0023] 实施方案第一步：各种提取物的制备
（1）黄芩山药水煎浓缩提取物的制备
按照配伍比例为1-4∶1取黄芩、山药，蒸馏水浸泡，加热煎煮1h，绢布过滤，药渣再加蒸馏水，同法浸泡、煎煮、过滤，将两次滤液混合，加热浓缩，超滤膜过滤，70℃减压干燥即得。

[0024] （2）黄芩苷的制备黄芩烘干，粉碎过筛，80%乙醇加热提取两次，合并滤液，回收乙醇，加适量蒸馏水，加浓盐酸调pH3-4，静置1h后滤去杂质，滤液于40℃ 调pH1.5-2，保温30min，抽滤，沉淀水洗至pH6.5-7.0，干燥即得。

[0025] （3）山药乙醇提取物制备取山药粉末，95％乙醇回流提取3次，去掉上清液，滤渣用蒸馏水在45℃提取4次，收集提取液，离心，收集上清液，将上清液浓缩，加入乙醇，4℃放置过夜，离心，收集沉淀，分别用乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，冷冻干燥，即得。

[0026] （4）山药多糖制备将上述山药乙醇提取物加水复溶配成5％溶液，加入Sevag试剂，震荡，离心，取上清液，加Sevag试剂，如此重复多次，直至无白色中间层沉淀，收集上清液浓缩，分别用自来水和蒸馏水透析，加入乙醇，4℃放置过夜，离心，收集沉淀，分别用乙醇、丙酮和乙醚洗涤沉淀，冷冻干燥，即得。

[0027] 第二步：制剂的制备（1）本发明中药提取物胶囊制剂的制备
分别称取上述步骤制备的黄芩山药水煎浓缩提取物12mg、黄芩苷36mg、山药乙醇提取物28mg与山药多糖24mg，同时称取淀粉395mg、硬脂酸镁5mg，均匀混合，填充成胶囊。

[0028] （2）本发明中药提取物片剂的制备分别称取上述步骤制备的黄芩山药水煎浓缩提取物12mg、黄芩苷36mg、山药乙醇提取物28mg与山药多糖24mg，同时称取淀粉295mg、乳糖100mg，均匀混合，用湿法制粒、干燥，整粒后与5mg硬脂酸镁混合，压成片剂。

[0029] 药效及药理学资料：在下述试验例子中组合物为：黄芩山药水煎浓缩提取物、黄芩苷、山药乙醇提取物与山药多糖的用量比例为3:9:7:6。发明人对上述各成分用量比例在1-3:6-9:3-7:4-6之间时的多种配比组合获得的组合物进行了与上相同的实验，均发现在这种用量范围内的中药提取物能获得很好的协同作用，对癌症化疗相关性腹泻能起到很好的效果并对癌症的治疗有增效作用。以下是优选的实施方式获得的药效学资料：
试验例1：中药提取物治疗化疗相关性腹泻作用的药效学研究
1、试验材料
（1）黄芩，山药，购于药材市场。

[0030] （2）小鼠，体重20±2g，雄性，实验前自由进食饮水。

[0031] 2、试验方法：将小鼠随机分为5组，每组5只，A组为模型组，B组为黄芩山药水煎浓缩提取物10g.-1 -1
kg (相当于含生药量)，C组为黄芩苷10g.kg (相当于含生药量),D组山药乙醇提取物-1
与山药多糖按7:6比例混合10g.kg (相当于含生药量),E组为本发明的中药提取物10g.-1
kg (相当于含生药量)，伊立替康腹腔注射给药(75mg/kg)，每天1次，连续4天，复制化疗相关性腹泻模型。B、C、D、E组连续用相应提取物灌胃8天，将小鼠置于代谢笼，笼底铺白色滤纸以观察大便情况，并且观察小鼠肛周情况及鼠尾粪便污染情况，结合棉签刺激肛门排便，每日观察记录2次。腹泻程度标准评分如下：0分：大便正常或没有；1分：轻度腹泻，大便可见轻微湿软；2分：中度腹泻，大便较湿且不成型。并且有轻度肛周着色；3分，重度腹泻，水样便并伴有重度肛周着色。

[0032] 3、实验结果与模型组比较，本发明的中药提取物组腹泻发生率明显减轻。结果见表1.
表1 本发明组合物对小鼠化疗相关性腹泻发生率及评分影响
注：a相当于含生药量
试验例2：本发明中药提取物抗肿瘤作用的药效学研究
1、实验材料
（1）昆明种小鼠，体重20±2g，实验前自由进食饮水,24h自然光照射。

[0033] （2）环磷酰胺，江苏恒瑞医药制药股份有限公司产品。

[0034] 2、试验方法：对小鼠S180肉瘤生长的抑制试验