本发明涉及用于在液体样品中检测分析物的存在和/或量的检验装置、方法和试剂盒。具体来说,它涉及包含检验对照物的检验装置、方法或试剂盒。 已经开发并商业化了简单的侧向流免疫分析装置,用于检测液体样品中的分析物,参见例如EP291194。典型情况下,这样的装置包含多孔载体,该载体含有能够与目标分析物结合的干燥的、可移动的、标记的结合试剂,以及在标记的结合试剂下游的检测区中,也能够与被提供的与分析物结合的固定化的结合试剂。对检测区中固定化的标记结合试剂进行检测,为样品中分析物的存在提供了指示。装置,例如上述的装置,适合用于检测尿液中的分析物,例如hCG或滥用的药物。由EP291194公开的侧向流装置也可以包含对照区,用于指示测试进行得是否正确。对照区可以包含例如能够在存在或不存在目标分析物的情况下结合标记的结合试剂的固定化的结合试剂。 但是,通过简单的免疫分析检测某些分析物,需要预处理步骤以便提取分析物,特别是在检测有保护性外壳包围着目标分析物的病原生物体中。例如,检测生物体,例如来自链球菌(Streptococcae)科的生物体,典型情况下依赖于检测到特异性糖类抗原。在可以被检测之前,抗原性分子必需首先从生物体的细胞壁释放。现有多种方法可以用于执行这样的提取处理,这些方法使用了例如亚硝酸、ProNase B酶、热甲酰胺或热HCL。大部分利用侧向流技术的的免疫分析试验,在将含有提取的抗原的样品与检验装置接触之前,使用了例如亚硝酸从生物体提取糖类抗原。但是,亚硝酸是化学不稳定的,需要生成。 EP231750公开了从包含怀疑含有A型链球菌(Streptococcus A)的测试样品的拭子中提取糖类抗原的测试试剂盒。测试试剂盒包含含有聚合酸的第一个容器,以及含有亚硝酸钠溶液的第二个容器。将亚硝酸钠添加到含有聚合酸的容器中,然后加入测试样品以便提取糖类抗原。糖类抗原的提取及其随后的检测一般如下:从例如咽喉后部获取拭子样品,将拭子插入到含有亚硝酸的小瓶中,亚硝酸由添加亚硝酸钠和乙酸的水溶液产生。随后可以将拭子搅拌,以便将抗原释放到溶液中。 WO2006/013329公开了用于在样品中测定链球菌A型抗原的存在的侧向流检验装置,其含有提供在多孔载体中的干燥的聚磺酸试剂和干燥的亚硝酸钠。向检验测试条添加液体样品,导致亚硝酸的原位生成。检验条可以进一步含有检验对照物,其与EP291194中所公开的检验对照物类似。 来自链球菌科之外的许多病原生物体的种特异性分析物或抗原,在检测之前需要预处理。例如,在A或B型流感的检测中,病毒需要用提取试剂预处理,以便破坏病毒粒子并暴露出内部病毒核蛋白。嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)可以在用去污剂和EDTA预处理后,通过非血清型特异性的单克隆抗体来检测。铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)也需要通过去污剂和EDTA处理,以便最适地检测膜孔蛋白F蛋白抗原。微生物病原体可以在种子、水果和蔬菜中发现。已报道,在通过免疫分析在植物组织中检测野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致病型(Xanthomona campestri pv vescatoria)中,使用溶菌酶提取缓冲液增加了灵敏度(J.B.Jones,G.C.Somodi和J.W.Scott;Journal of Applied Microbiology 1997,83,397-401)。目标分析物可以是DNA,它可以从大肠杆菌E.coli O157:H7——一种重要的食物传染的病原体——中提取,并通过PCR检测。US5731162公开了用于检测选自沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoea)和支原体(Mycoplasma)中的至少两种微生物的免疫分析方法,包括将生物样品在由蛋白酶K和脂肪酶组成的提取试剂中温育。 但是,到目前为止公开过的,与采用试剂预处理步骤的检验装置或试剂盒一起使用的检验对照物,在它们确定检验是否已正确执行的能力方面是有限的,因为检验对照物不能确定预处理步骤是否已实际执行,或它是否已有效地执行。 在某些实施方案中,本发明提供了包含改进的检验对照物的检验装置、试剂盒和方法。 根据本发明的第一方面,本发明提供了用于在液体样品中确定目标分析物的存在和/或量的方法,包括: (a)向含有一种或多种试剂和包含对照分析物的对照物质的检验装置施加样品,其中所述一种或多种试剂与液体样品和对照物质相互作用,以提供可检测或更可检测形式的目标分析物和对照分析物; (b)使目标分析物与第一种标记结合试剂相互作用同时使对照分析物与第二种标记结合试剂相互作用; (c)在检测区检测第一种标记结合试剂,在对照区检测第二种标记结合试剂; 其中在检测区检测到第一种标记结合试剂表明了目标分析物的存在或量,其中在对照区检测到第二种标记结合试剂表明了所述一种或多种试剂提供可检测或更可检测形式的目标分析物的有效性。 因此,在本发明的某些方法中,施加于检验装置的液体样品与所述一种或多种试剂相互作用,提供了目标分析物。同样的试剂也提供了对照分析物。然后,处理过的液体样品与标记结合试剂相互作用,标记结合试剂与液体样品一起,优选向下游运送到检测和对照区。在检测和对照区检测到标记结合试剂,分别表明目标分析物和对照分析物的量和/或存在。液体样品在接触标记试剂之前,可以经历一段时间的温育。液体样品也可以在接触标记结合试剂之前,通过与缓冲试剂相互作用而经历缓冲液处理,以便将样品液体的pH调整到免疫分析的最适pH范围内。 根据本发明的第二方面,本发明提供了用于在液体样品中测定目标分析物的存在和/或量的检验装置,所述检验装置包含液体流道,包含: (a)一种或多种试剂,当其与液体样品接触时,提供了可检测或更可检测形式的目标分析物; (b)对照物质,包含对照分析物,当其与所述一种或多种试剂接触时,提供了可检测或更可检测形式的对照分析物; (c)检测区,用来检测用于目标分析物的第一种标记结合试剂,在所述一种或多种试剂的下游;以及 (d)对照区,用来检测用于对照分析物的第二种标记结合试剂,在对照分析物和所述一种或多种试剂的下游; 其中在检测区检测到第一种标记结合试剂,表明了目标分析物的存在和/或量,在对照区检测到第二种标记结合试剂表明了所述一种或多种试剂提供可检测或更可检测形式的目标分析物的有效性。 根据本发明的第三个方面,本发明提供了用于在液体样品中确定目标分析物的存在和/或量的检验试剂盒,包含: (a)含有对照分析物的对照物质; (b)一种或多种试剂,用于提供可检测或更可检测形式的目标分析物和对照分析物; (c)用于目标分析物的第一种标记结合试剂,和用于对照分析物的第二种结合试剂;以及 (d)用于接收液体样品的检验装置,其含有液体流道,所述流道包括用来检测第一种标记结合试剂的检测区和用来检测第二种标记结合试剂的对照区。 本发明的检验装置包含一个或多个液体可以沿着其流动的液体流道,例如通道,多孔载体例如垂直流或横向流多孔载体,或组合,例如通道与多孔载体的组合。检验流道可以进一步包含其他流体元件,例如液体仓室、阀、过滤器和定时门。 多孔载体可以包含一种或多种多孔载体材料,它们可以以线性或堆叠的排列方式重叠,或者它们可以以其它方式流体连通。多孔载体材料可以是相同的或不同的。多孔载体可以包含检测区和对照区。此外,一种或多种试剂和/或对照分析物可以提供在多孔载体上和/或其中。 在一个实施方案中,目标分析物与目标物种相关。所述一种或多种试剂可以用来与目标物种相互作用或反应,以便提供可检测或更可检测形式的目标分析物。例如,目标分析物可位于生物体的保护性外壳或细胞壁内,这样使得它不能用于或不太适用于与结合试剂结合。所述一种或多种试剂可用于提取目标分析物。提取是指加工样品以便使标志物更容易被测量。例如,提取包括从细胞、微生物或细胞器释放和/或溶解出标志物,例如通过(i)破坏或溶解膜、细胞壁、包膜等,以释放出包含或包围在膜、细胞壁、包膜等中,附着在其上和/或整合在其中的标志物,(ii)从较大的化学部分上切下标志物,(iii)破碎和/或溶解多糖外被,和/或(iv)破碎和/或溶解胶状外被。提取还包括从周围样品基质的组分中释放出标志物、细胞、细胞器和/或微生物。基质可以包括生物体或标志物存在于其中的介质。 可选地,目标分析物可能已经以可检测的形式存在于液体样品中,所述一种或多种试剂用于将其提供成更可检测的形式,例如通过增加其溶解性或通过改变检验的操作pH,通过富集步骤或通过用酶处理。多种试剂可以以试剂前体的形式提供,当它们混合时,形成目标试剂。以可检测或更可检测形式提供的目标分析物可以与用所述一种或多种试剂处理之前的分析物相同,或者它可以是作为试剂处理的结果而形成的分析物类似物。 所述一种或多种试剂可以以干燥的状态提供。 所述一种或多种试剂可以包括例如酸,缓冲液,去污剂,酶,试剂前体例如用于产生亚硝酸的酸和碱金属亚硝酸盐,树脂,纤维蛋白裂解试剂。 对照物质可以包含对照分析物或由对照分析物构成,当用一种或多种试剂处理时,对照物质提供了可检测或更可检测形式的对照分析物。可选地,对照物质可以包含对照分析物前体或由其构成,当它们用所述一种或多种试剂处理时,提供了可检测形式的对照分析物。在本发明的某些实施方案中,对照物是对照物种,即对照分析物存在于对照物种中或与对照物种相联。对照物种是可以用所述一种或多种试剂处理,以便提供可检测或更可检测的对照分析物的物种。所述一种或多种试剂可用于从对照物种中提取对照分析物。这种提取可以采取与目标分析物的提取相同的方式。可选地,对照分析物可以按照与目标分析物相同的方式,由一种或多种试剂以更可检测的形式提供。因此,在对照区检测到对照分析物表明试剂的预处理有效地起作用,因此表明其用于提供可检测或更可检测形式的分析物的试剂预处理也是有效的。这种对照区的优点在于,它能够指示所述一种或多种试剂提供可检测或更可检测的目标分析物(或其类似物)的有效性。此外,对照区能够指示液体样品已施加到装置,这样标记结合试剂已经被重新悬浮并输送到对照区,对照区能够检测所述标记结合试剂。因此,当需要分析物预处理步骤时,对照区能够提供检验已经正确执行的另一个置信水平。可以选择对照分析物或对照物种的水平,使得它对应于目标分析物检验范围的下限。它的优点是,在对照区检测到对照分析物表明了所述一种或多种试剂在低水平的分析物的情况下充分起作用。对照分析物也可以作为检验流道的一部分,并被提供在检测和对照区的上游。对照分析物可以在一种或多种试剂的上游、下游,或在它们附近被提供。可选地或者额外地,对照区的信号可用于校正检测区的信号。 目标分析物和对照分析物在检测和对照区的分别检测,可以包括相应的第一和第二种标记结合试剂的固定。因此,检测区可以包含固定结合试剂,用来固定化用于目标分析物的标记结合试剂或标记结合试剂-目标分析物复合物。对照区可以包含固定结合试剂,用来固定化用于对照分析物的标记结合试剂或标记结合试剂-对照分析物复合物。有利地,对照区可以提供在检测区下游。这样,在对照区检测到标记结合试剂表明它已经被运送到检测区之外。 作为在检测区提供固定结合试剂的可选方案,结合试剂可以以能够与目标分析物-标记结合试剂复合物结合的可移动的形式提供。结合试剂可以例如结合到大颗粒例如琼脂糖上,检测区可以包含过滤器,其孔径具有小于大颗粒、但是大于标记结合试剂尺寸的大小,以便过滤器能够捕获任何存在的标记结合试剂-分析物-结合试剂复合物,而任何没有与捕获试剂复合的标记结合试剂能够通过过滤器。此外,可选地,试剂可以以固定化形式提供在检测区中,该试剂能够结合可移动的标记结合试剂-分析物-结合试剂复合物。例如,该结合试剂可以以可移动形式提供,并与结合物种例如生物素结合,固定化在检测区的试剂是互补的结合配偶体例如链亲和素。上面描述的对于检测区的考虑也可以适用于对照区。 本发明的检验装置可以包含用于目标分析物的标记结合试剂,和/或用于对照分析物的标记结合试剂。当用于目标分析物和用于对照分析物的标记结合试剂作为检验装置的一部分存在时,它们被提供在所述一种或多种试剂的下游,并分别在检测和对照区上游。这两种标记试剂可以提供在检测和对照区上游。有利的情况是,用于对照分析物的标记结合试剂不能在检测区检测,例如不能结合或基本上不能结合到检测区。同样地,用于对照分析物的标记结合试剂有利的情况是其不结合或基本上不结合分析物。标记结合试剂可以提供在对照分析物和所述一种或多种试剂的下游。 在一个实施方案中,第一种多孔载体材料包含第一和第二种标记结合试剂,提供在含有检测和对照区的第二种多孔载体材料的上游。缓冲液区可以提供在所述一种或多种试剂下游和第一和第二种标记结合试剂的上游。缓冲液区可以提供在与第一和第二种多孔载体材料分开的多孔载体材料上,并位于第一和第二种多孔载体材料的上游。 检验可以是三明治类型的,即标记结合试剂与分析物结合形成了标记结合试剂-分析物复合物,该复合物然后通过用于分析物的固定结合试剂固定化在检测区。可选地,特别是当目标分析物是半抗原时,标记的分析物或标记的分析物类似物可以以可移动形式提供在检测区中固定结合试剂的上游。此外,可选地,检验装置可以利用抑制反应,其中固定的分析物或分析物类似物提供在检测区,检验装置还包含提供在所述区上游的用于分析物的可移动标记结合试剂。同样的考虑可以适用于对照分析物。 本发明可以包含温育区,以便将液体样品保留一段时间,或用于减慢液体在与标记结合试剂接触之前的流动。温育区用于将液体样品与所述一种或多种试剂温育,从而优化预处理,以及因此优化可检测的目标分析物的可用量。温育区可以包含例如流动阻挡物,例如可打破的密封物,以便保留液体样品并防止它流向下游。在经过适合的时间段后,可以打开流动阻挡物,允许液体样品流向下游。适合的时间长度可以在5秒到1小时的范围内。可选地,温育区可以包含一段足够长或慢流速的流道,使得当液体样品沿着流道流动时能够温育一段时间。 检验装置可以包含提供在标记结合试剂上游的用于包含液体样品的液体仓室。液体仓室可以提供在多孔载体或微流体通道的上游。因此,施加到液体仓室的液体可以经出口端口向下游通向多孔载体或微流体通道。液体仓室可以包含所述一种或多种试剂和/或对照分析物。当提供一种以上试剂时,它们可以作为混合物、彼此分隔开或彼此相邻提供。所述一种或多种试剂可以提供在一个或多个多孔或无孔基质上或包含在其中。基质可以溶解在液体样品中。基质可以分隔开,或例如以堆叠排列方式提供。可选地,所述一种或多种试剂可以作为冷冻干燥的颗粒或作为液体仓室内表面上的涂层提供。液体仓室可以包含液体阻挡物,它典型地提供在液体从液体仓室的出口点处。在提供了液体阻挡物的情况下,液体仓室可以进一步包含开孔,以便允许施加到液体仓室的液体样品通过液体阻挡物。 对照分析物可以与一种或多种试剂提供在相同的基质上,或提供在分开的基质上。基质可以一个排列在另一个的下游,使得施加到液体仓室的液体样品接触多孔基质,因此液体样品与一种或多种试剂和对照分析物相互作用。 缓冲液区可以提供在一种或多种试剂的下游和标记结合试剂的上游,以便例如将处理过的液体的pH调整到检验的最适工作范围内。缓冲液区可以提供在与第一和第二种多孔载体材料分开的多孔载体材料上,并位于第一和第二种多孔载体材料的上游。 在一个实施方案中,检验装置包含液体仓室,液体仓室含有一种或多种试剂和对照分析物,所述试剂和对照分析物提供在含有标记结合试剂和检测以及对照区的多孔载体的上游。在可选实施方案中,多孔载体可以包含试剂和对照分析物。多孔载体也可以包含缓冲液区和温育区。 当该检验作为试剂盒提供时,对照分析物和一种或多种试剂可以独立于检验装置提供。它们可以例如以干燥状态提供在小管中,可以向其中添加怀疑含有目标分析物的液体样品。在适当时间后,如果需要,该液体还可以用缓冲液处理,然后可以将处理过的液体加入到检验装置。可以包含标记结合试剂作为检验装置的一部分,或者它们可以添加到用缓冲液适当处理后的处理过的液体中。可选地,可以包含标记结合试剂和缓冲液作为检验装置的一部分。 目标物种可以是任何需要预处理以提供可检测或更可检测形式的目标分析物的物种。物种可以选自微生物,包括细菌、病毒或真菌包括酵母。物种可以是有害的,即病原性的,或有益的,即共生的。物种可以是例如选自鼻病毒,副流感病毒,A、B或C型流感病毒,呼吸道合胞病毒(RSV),冠状病毒,腺病毒,A型科萨奇病毒,单纯性疱疹病毒,肠道病毒,Epstein-Barr病毒,巨细胞病毒或乳头瘤病毒的病毒。它可以是细菌,例如选自A、B、F或G类链球菌(Streptococci),肠球菌(Enterococci),沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis),弯曲杆菌(Campylobacter),大肠埃希氏杆菌(E.Coli),沙门氏菌(salmonella),艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile),肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridium botulinum),金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus),霍乱弧菌(Vibrio cholerae),链球菌(X 2),埃希氏菌(Escherichia)和卟啉单胞菌(Porphyromonas)。 有利地对照物种可以选自与目标物种相似的物种,或需要类似的预处理步骤以便提供或增强提供目标分析物的物种。例如,如果目标物种是A型流感病毒,对照物种可以是B型流感病毒。如果目标物种是A类链球菌,对照物种可以是B类链球菌。 目标分析物可以是例如糖类、核酸、蛋白或脂类。对照分析物可以是抗原。 液体样品可以源自于任何来源,例如工业、环境、农业或生物来源。样品可以源自于生理来源或由它们构成,包括血液、血清、血浆、间隙液体、唾液、痰液、眼睛晶状体液、汗液、尿液、乳液、腹水液(ascots fluid)、粘液、滑液、腹膜液、经皮渗出物、咽渗出物、支气管肺泡灌洗液、器官吸出液、脑脊液、精液、宫颈粘液、阴道或尿道分泌物和羊膜液。具体来说,分析物可以是唾液,它可以采用稀释形式。液体样品可以从半固体或固体来源通过稀释、处理或提取成水性液体来衍生。 流道可以是侧向流多孔载体。可以用作多孔载体的适合的材料包括硝酸纤维素,醋酸纤维,纤维素或纤维素衍生物,聚酯,聚烯烃或玻璃纤维。多孔载体可以包含硝酸纤维素。它具有结合试剂可以不需要事先化学处理就牢固固定的优点。例如,如果多孔固相材料包含纸,那么结合试剂的固定化可以通过化学偶联,使用例如CNBr、羰二咪唑或三氟乙磺酰氯来进行。其上或其中提供有标记结合试剂的多孔载体材料的选择是玻璃纤维。选择用于提供检测和对照区的多孔载体材料是硝酸纤维素。 根据示例性实施方案,多孔载体包含三段部分重叠的多孔载体材料。第一个上游区段包含干燥的缓冲物,以便将处理过的液体样品的pH调整到检验的最适水平。多孔载体材料的第二个区段包含用于目标分析物和对照分析物的标记的结合试剂。多孔载体材料的第三个区段包含检测和对照区。多孔载体的第一个区段也可用于接收液体样品。可选地,可以在第一个区段的上游提供附加的多孔载体材料区段,用于接收液体样品。 术语结合试剂是指结合对的成员,即两种不同的分子,其中一种分子通过化学或物理方式与第二种分子特异性结合。两种分子,在它们的彼此结合使得它们能够将它们的结合配偶体与其他具有类似性质的检验成分区分开的意义上,是相关的。特异性结合对的成员被称为配体和受体(抗配体),结合对成员和结合对配偶体等。分子也可以是用于聚集分子的结合对的成员,例如,针对第二种抗体的免疫复合物产生的抗体及其相应的抗原,可以被当作免疫复合物的结合对成员。 除了抗原和抗体结合对成员之外,其他的结合对包括例如但不限于生物素和亲和素,糖类和凝集素,互补的核苷酸序列,互补的肽序列,效应物与受体分子,酶的辅因子和酶,酶的抑制剂和酶,肽序列和特异性针对该序列或整个蛋白的抗体,聚合酸和碱,染料和蛋白结合物,肽和特异性蛋白结合物(例如核糖核酸酶,S-肽和核糖核酸酶S-蛋白)等。此外,特异性结合对可以包含原始特异性结合成员的类似物的成员。 当用于标记结合试剂的情况中时,“标记物”是指任何能够产生可以通过目测或仪器手段检测的信号的物质。可用于本发明的各种不同的标记物包括通过化学或物理方式产生信号、例如可光学检测的信号的标记物。这样的标记物包括酶和底物,发色团,催化剂,荧光化合物,化学发光化合物,电活性物质,染料分子,放射活性标记物和颗粒标记物。分析物本身可以固有地能够产生可检测信号。标记物可以与结合试剂共价结合。具体来说,标记物可以选自可光学检测的标记物。 标记物可以包含颗粒,例如金,银,胶体非金属颗粒例如硒或碲,染色或带色颗粒例如掺入染料的聚合物颗粒,或染料溶胶。染料可以具有任何适合的颜色,例如蓝色。染料可以是荧光的。染料溶胶可以从可商购的疏水染料例如Foron Blue SRP(Sandoz)和Resolin BlueBBLS(Bayer)制备。适合的聚合物标记物可以选自一系列合成聚合物,例如聚苯乙烯,聚乙烯基甲苯,聚苯乙烯-丙烯酸和聚丙烯醛。使用的单体通常为水不溶性的,并在水性表面活性剂中乳化,以便形成单体胶束,然后通过向乳液加入引发剂来诱导聚合。产生了基本上球形的聚合物颗粒。这种聚合物颗粒的理想的尺寸为大约0.05到大约0.5μm。根据示例性实施方案,标记物是蓝色聚合颗粒或金颗粒。 所述一种或多种试剂可以包含亚硝酸产生试剂,例如酸和亚硝酸盐(例如碱金属亚硝酸盐),它们当在存在水性样品的情况下混合时,形成了亚硝酸。亚硝酸产生试剂可以提供在独立的多孔载体上。这样的实施方案适合于检测链球菌。酸可以是聚合的,例如聚羧酸,聚磺酸,聚苯乙烯磺酸,聚磷酸,聚丙烯酸和聚甲基丙烯酸。酸可以选自例如柠檬酸,丙二酸,苯乙酸,草酸,乙醇酸,氯乙酸,三氯乙酸,氟乙酸,溴乙酸,碘乙酸,琥珀酸,戊二酸,己二酸,庚二酸,辛二酸,苯甲酸,苯磺酸,对甲苯磺酸,壬二酸和癸二酸。可以使用任何在干燥状态下稳定并能够与酸反应产生亚硝酸的适合的酸产生试剂,例如碱金属亚硝酸盐。 酸产生试剂可以包括无机亚硝酸盐,例如亚硝酸钠、钾、锂、钙、锶、钡和银,以及有机亚硝酸酯例如亚硝酸丁基和异戊基酯。在示例性实施方案中,酸产生试剂包含亚硝酸钠。此外或可选地,试剂可以包含酶,例如Pronase B。 本发明的分析装置可用于测定样品中链球菌物种的存在和/或量。本发明也提供了用于测定A类链球菌物种的分析装置,包含B类链球菌对照物种。 现在将参考随附的图对本发明进行更详细的描述,该图描述了符合本发明的检验装置。 检验装置(10)包含提供在多孔载体测试条(20)上游的提取仓室(18)。干燥的试剂提供在多孔圆盘(11、12和13)上的仓室中,多孔圆盘以垂直排列的方式一个堆叠在另一个上并用唇口(17)固定在位。在该具体实施方案中,提供了三个圆盘,尽管适用的话可以提供任何数量的盘。每个圆盘典型包含不同的试剂。施加到样品提取仓室的液体样品通过多孔圆盘,同时与存在的试剂相互作用。处理过的液体样品然后经提取仓室的下部锥形部分(15)通过多孔载体。在装置中还可以存在液体样品温育机构(未显示),例如可打破的密封物或定时门,以便在处理过的样品通过多孔载体之前将它温育一段时间。液体样品温育机构典型地提供在提取仓室(18)的出口区域(19)。还显示了排气口(14),它可以是任选的,允许液体样品在出口区域被密封的情况下通到仓室的下部中。多孔载体测试条(20)包含三个区段,它们在区域(22)和(23)处彼此重叠。第一个上游区段包含缓冲液衬垫,第二个区段包含标记结合试剂,第三个下游区段包含检测区(25)和对照区(26)。 实施例——含有对照物机构的分析试剂盒的制备 提供了液体样品提取仓室,它包含长度为33mm,内径为9mm并在一段逐渐变细到4mm的塑料空心圆柱体。制备了三个直径9mm的Porex圆盘(80-120μ孔径),各含有干燥的试剂。1号圆盘通过向圆盘施加30μL 2M柠檬酸然后进行干燥来制备。2号圆盘通过施加30μL 4M亚硝酸钠水溶液来制备。3号圆盘通过施加带有8.33×106cfu/mL热失活的B类链球菌细胞的30μL 4M亚硝酸钠水溶液,然后进行干燥来制备。将三个圆盘放置在塑料中空柱体内,其中3号圆盘放置在2号圆盘的上游和顶上,2号圆盘放置在1号圆盘的上游和顶上。 侧向流测试条如下制备: 通过在玻璃纤维(Millipore G041)上施加30μL 1.5M trizma碱并干燥,制备了缓冲液结合的衬垫多孔载体(宽度5mm×长度10mm)。通过在玻璃纤维(Millipore G041)上施加30μL 1.0OD的抗GBS抗体金结合物和30μL 1.0OD的抗GAS抗体金结合物并干燥,制备了结合物衬垫多孔载体(宽度5mm×长度10mm)。通过在硝酸纤维素(宽-度5mm×长度40mm,Millipore HF-90,衬有7mil Mylar)上以1.0μL/cm印刷2.0mg/mL抗A类链球菌抗体以形成检测区,以1.0μL/cm印刷2.0mg/mL抗B类链球菌抗体以形成对照区,制备了多孔载体。检测区沿着硝酸纤维素多孔载体的长度布置10mm,对照区沿着硝酸纤维素多孔载体的长度布置16mm,并位于检测区下游。 缓冲液衬垫与结合物衬垫部分重叠并位于其上游,结合物衬垫与硝酸纤维素载体部分重叠并位于其上游。吸收衬垫(Whatman GB003)提供在硝酸纤维素载体下游,形成了完整的测试条。 将提取仓室以变细的末端放入Eppendorf管最底下。将含有Strep A的400μL液体样品加入到含有Porex圆盘的提取仓室中,并允许在Eppendorf管中温育5分钟。然后,将80μL来自Eppendorf管的液体提取物施加到测试条的缓冲液衬垫上。在5分钟后用肉眼读取检测和对照区。 结果 在对照区检测到的信号表明液体样品已经成功施加到分析试剂盒,分析结合试剂工作令人满意,提取试剂工作令人满意。也在检测区检测到信号,表明液体样品中存在strep A。