交叉参考 [001]本发明要求对于2007年2月27日提交的美国申请60/903,587 的优先权，其内容以其全文通过引用合并入本文。 发明背景 [002]丙型肝炎病毒(“HCV”)引起的感染是个引人注意的人类医 学问题。HCV被公认为大多数非甲型、非乙型肝炎病例的病原体，据估 计全球拥有3％的人类患病率 [A.Alberti et al.，“Natural History of Hepatitis C，”J.Hepatology，31(Suppl.1)，pp.17-24(1999)]。 仅在美国就可能有4百万个体被感染 [M.J.Alter et al.，“The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States，Gastroenterol.Clin.North Am.，23，pp.437-455(1994)；M.J.Alter “Hepatitis C Virus Infection in the United States，”J.Hepatology，31(Suppl.1)，pp.88-91 (1999)]。 [003]在第一次暴露于HCV后，只有大约20％的被感染者发生了急 性临床肝炎，而其他人似乎自发地消除了感染。然而，在几乎70％的情 况下，病毒建立了持续数十年的慢性感染 [S. lwarson，“The Natural Course of Chronic Hepatitis，”FEMS Microbiology Reviews，14，pp. 201-204(1994)；D.Lavanchy，“Global Surveillance and Control of Hepatitis C，”J.Viral Hepatitis，6，pp.35-47(1999)]。 这通常导致复发性和渐近性恶化的肝炎，所述肝炎通常导致更严重 的疾病状态例如肝硬化和肝细胞癌 [M.C.Kew，“Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma”，FEMS Microbiology Reviews，14，pp.211-220(1994)；I.Saito等人，“Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA， 87，pp.6547-6549(1990)]。 不幸的是，尚无减弱慢性HCV的进程的广泛有效的治疗。 [004]HCV基因组编码3010-3033个氨基酸的多蛋白(polyprotein) [Q.L.Choo，等人， “Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA， 88，pp.2451-2455(1991)；N.Kato等人，“Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A，Non-B Hepatitis，”Proc.Natl.Acad.Sci. USA，87，pp.9524-9528(1990)；A.Takamizawa等人，“Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers，”J.Virol.，65，pp.1105-1113 (1991)]。 据推测HCV非结构(NS)蛋白质为病毒复制提供必要的催化机器。NS蛋 白质通过多蛋白的蛋白质水解裂解来产生 [R.Bartenschlager等人，“Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions，” J.Virol.，67，pp.3835-3844(1993)；A.Grakoui等人，“Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase：Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites，”J.Virol.，67，pp.2832-2843(1993)；A.Grakoui等人，“Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products，”J.Virol.，67，pp.1385- 1395(1993)；L.Tomei等人，“NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein”，J.Virol.，67，pp.4017-4026(1993)]。 [005]HCV NS蛋白3(NS3)是病毒复制和感染性所必需的 [Kolykhalov，J.Virology，Volume 74，pp.2046-2051 2000“Mutations at the HCV NS3 Serine Protease Catalytic Triad abolish infectivity of HCV RNA in Chimpanzees]。 已知，黄热病病毒NS3蛋白酶的突变降低了病毒的感梁性 [Chambers，T.J.等人，“Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein”，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，pp.8898-8902(1990)]。 已显示NS3的前181个氨基酸(病毒多蛋白的残基1027-1207)包含 加工HCV多蛋白的所有4个下游位点的NS的丝氨酸蛋白酶结构域 [C.Lin等人，“Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase：Trans-Cleavage -Requirements and Processing Kinetics”，J.Virol.，68，pp.8147-8157(1994)]。 [006]HCV NS3丝氨酸蛋白酶和其相关辅助因子NS4A帮助加工所 有病毒的酶，从而被认为是病毒复制所必需的。该加工似乎与通过人免 疫缺陷病毒天冬氨酰蛋白酶进行的加工类似，所述天冬氨酰蛋白酶也参 与病毒酶的加工。抑制病毒蛋白质加工的HIV蛋白酶抑制剂在人中是有 效的抗病毒剂，这表明干扰病毒生命周期的该阶段导致治疗活性剂。因 此，HCV NS3丝氨酸蛋白酶也是用于药物发现的吸引人的靶。 [007]直至最近，用于HCV疾病的唯一建立的疗法是干扰素疗法。 然而，干扰素具有明显的副作用 [M.A.Wlaker等人，“Hepatitis C Virus： An Overview of Current Approaches and Progress，”DDT，4，pp.518-29(1999)；D. Moradpour等人，“Current and Evolving Therapies for Hepatitis C，”Eur.J.Gastroenterol. Hepatol.，11，pp.1199-1202(1999)；H.L.A.Janssen等人，“Suicide Associated with Alfa- Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis，”J.Hepatol.，21，pp.241-243(1994)；P.F. Renault等人，“Side Effects of Alpha Interferon，”Seminars in Liver Disease，9，pp.273-277 (1989)] 并且只在部分(大约25％)的病例中诱导长期缓解 [O.Weiland， “Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection”，FEMS Microbiol.Rev.，14，pp. 279-288(1994)]。 干扰素的PEG化形式(和)的新近引入和三氮 唑核苷(ribavirin)与干扰素()的联合治疗在缓解率上只导 致略微的提高以及在副作用上只导致部分减轻。此外，有效的抗HCV 疫苗的前景仍然不确定。 [008]因此，存在对更有效的抗HCV疗法的需要。此类抑制剂具有 如同蛋白酶抑制剂，特别是丝氨酸蛋白酶抑制剂，更特别地HCV NS3 蛋白酶抑制剂的治疗潜力。具体地，此类化合物可用作抗病毒剂，特别 地用作抗HCV剂。 [009]VX-950，具有下面显示的其结构的HCV抑制剂，是这样的所 需要的化合物。在PCT公开号WO 02/18369中描述了VX-950，通过引 用将其全文合并入本文。 发明概述 [0010]一般地，本发明涉及包含HCV抑制剂VX-950和特定共晶 体形成剂的组合物。共晶体形成剂是药理学惰性赋形剂，其通过共晶体、 笼形物或其他晶体状固体形式的形成而改变固体药物的晶形。其在本文 中使用的“共形成剂(co-former)”的意义内。在某些情况下，VX-950 和共晶体形成剂一起可形成晶体组合物(crystalline composition)，即 共晶体。与它们的游离形式相比，特定VX-950共晶体是有利的，因为 与无定形VX-950分散体相比，它们具有提高的溶解性(dissolution)、 更高的水溶解度和更大的固体状态物理稳定性。特定的VX-950共晶体 提供了质量减少(reduced mass)的剂型，从而降低了药片负荷(pill burden)，因为VX-950共晶体相对于无定形形式还展示了更高的松密 度(bulk density)。此外，VX-950共晶体相对于需要喷雾干燥、熔体 挤出(melt extrusion)、低压冻干(lyphilization)或沉淀的无定形形式 提供了制造方面的优点。 [0011]在一个方面，由本发明提供的组合物各自包含VX-950和作 为共晶体形成剂的化合物。在一个实施方案中，VX-950和共晶体形成 剂(即，4-羟基苯甲酸)一起以晶形存在于组合物中(即，形成共晶体)。 在一些实施方案中，VX-950与4-羟基苯甲酸的摩尔比在大约5∶1至大约 1∶5(例如，大约1∶1)的范围内。在一些实施方案中，共晶体具有在各自 标准偏差为大约+/-0.3°2-θ的大约17.61、18.07、18.87、19.68和20.75 处的4个X射线粉末衍射峰中的至少2个峰。在一些实施方案中，共晶 体在其DSC热谱图中在标准偏差为大约+/-5℃的大约191.19℃处具有 峰。在其他实施方案中，共晶体具有在各自标准偏差为大约+/-0.3°2-θ 的17.6、18.0、19.7和20.8处的4个X射线粉末衍射峰中的至少2个峰。 在另外其他实施方案中，共晶体在其DSC热谱图中在标准偏差大约为 +/-5℃的大约191℃处具有峰。 [0012]在另一个方面，本发明提供了组合物，所述组合物包含 VX-950；选自4-氨基水杨酸和4-羟基苯甲酸的共晶体形成剂；以及选自 乙腈、乙酸乙酯、乙醇、丙酮、二氯甲烷和甲基叔丁基醚的溶剂。在一 些实施方案中，VX-950、共晶体形成剂和溶剂一起可采取晶体形式(即， 形成共晶体)。由于溶剂的存在，共晶体可以是溶剂化物。在一些其他实 施方案中，溶剂是乙腈。在一些其他实施方案中，VX-950与4-氨基水杨 酸的摩尔比在大约5∶1至大约1∶5(例如，大约1∶1)的范围内。在一些实施 方案中，VX-950与乙腈的摩尔比在大约1∶0.05至大约1∶1(例如，大约 1∶0.34)的范围之内。在一些实施方案中，共晶体具有在各自标准偏差为 大约+/-0.3°2-θ的大约7.711、8.631、9.723和9.959°2-θ处的4个X射线粉 末衍射峰中的至少两个峰。在一些实施方案中，共晶体在其DSC热谱图 中在标准偏差为大约+/-5℃的大约184.71℃处具有DSC峰。在其他实施 方案中，共晶体具有在各自标准偏差为大约+/-0.3°2-θ的大约7.7、8.6、 9.7和10.0°2-θ处的4个X射线粉末衍射峰中的至少2个峰。在其他实施方 案中，共晶体在其DSC热谱图中在标准偏差为大约+/-5℃的大约185℃ 处具有DSC峰。 [0013]在另外一些实施方案中，共晶体形成剂是4-羟基苯甲酸。在 另外一些实施方案中，VX-950和4-羟基苯甲酸的摩尔比在大约5∶1至大 约1∶5(例如，大约1∶1)的范围内。在另外一些实施方案中，溶剂是乙腈。 在另外一些实施方案中，VX-950与乙腈的摩尔比是大约1∶0.05至大约 1∶0.5(例如，大约1∶0.14)。在另外一些实施方案中，共晶体具有在各自 标准偏差为大约+/-0.3°2-θ的7.684、8.599、9.605、9.938°2-θ处的4个 X射线粉末衍射峰中的至少两个峰。在一些实施方案中，共晶体在其 DSC热谱图中在标准偏差为大约+/-5℃的大约190.78℃处具有DSC峰。 在另外一些实施方案中，共晶体具有在各自标准偏差为大约+/-0.3°2-θ 的大约7.7、8.6、9.6、9.9°2-θ处的4个X射线粉末衍射峰中的至少两 个峰。在一些实施方案中，共晶体在其DSC热谱图中在标准偏差为大 约+/-5℃的大约191℃(标准偏差为大约+/-5℃)处具有DSC峰。 [0014]在另一个方面，本发明提供了包含VX-950和选自苯丙氨 酸、苏氨酸、酒石酸和己二酸的共晶体形成剂的组合物。在一些实施方 案中，VX-950和共晶体形成剂一起采取晶体形式(即，形成共晶体)。在 一些实施方案中，VX-950和共晶体形成剂的摩尔比在大约5∶1至大约 1∶5(例如，大约1∶1)的范围内。 [0015]在另一个方面，本发明提供了包含VX-950和选自乙酸琥珀 酰酯和脯氨酸的共形成剂的组合物。在一些实施方案中，VX-950和共 形成剂一起形成了共形成物(co-form)(例如通过采取晶体形式，从而 形成共晶体)。如本文中所使用的，术语“共形成物”是指以固定的化学 计量比包含活性药物成分和一种或多种无活性成分(例如本文中使用的 “共形成剂”)的晶体单相物质(crystalline single phase substance)。 术语“共形成物”包括本文中使用的“共晶体”。在一些实施方案中， VX-950与共形成剂的摩尔比在大约5∶1至大约1∶5(例如大约1∶1)的范 围内。 [0016]在另一个方面，本发明提供了包含VX-950和选自4-羟苯甲 酸甲酯、邻氨基苯甲酸、d-生物素和酒石酸的共形成剂的组合物。在一 些实施方案中，VX-950和共形成剂一起形成了共形成物(例如，通过采 取晶体形式，从而形成共晶体)。在一些实施方案中，VX-950和共形 成剂的摩尔比在大约5∶1至大约1∶40的范围内。 [0017]这些组合物除其他以外可用于治疗牵涉HCV或与HCV相关 的疾病。这样，也在本发明的范围内之内的是各自以适当的摩尔比包含 VX-950和上述共晶体形成剂的药物组合物。药物组合物可任选地包含 用于形成溶剂化物的溶剂(例如，乙腈、乙酸乙酯、乙醇或丙酮)。另 外，药物组合物还可包含稀释剂、溶剂、赋形剂、载体或增溶剂 (solubilizing agent)。 [0018]用于制备上述共晶体的方法仍在本发明的范围内。方法可包 括下列步骤：(a)提供VX-950，(b)提供选自4-羟基苯甲酸、4-氨基水杨酸 (任选地在用于形成溶剂化物的溶剂例如乙腈中)、苯丙氨酸、苏氨酸、 酒石酸、己二酸、乙酸琥珀酰酯、脯氨酸、4-羟苯甲酸甲酯、邻氨基苯 甲酸和d-生物素的共晶体形成剂，(c)碾磨、加热、共升华(co-subliming)、 共熔化(co-melting)或在在结晶条件下于溶液中将VX-950与共晶体形 成剂混合，从而形成固相的共晶体，和(d)任选地分离通过步骤(c)形成的 共晶体。 [0019]用于调节上述共晶体的感兴趣的化学或物理性质的方法仍 在本发明的范围内。该方法可包括下列步骤：(a)测量VX-950和选自4- 羟基苯甲酸、4-氨基水杨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、酒石酸、己二酸、乙 酸琥珀酰酯、脯氨酸、4-羟苯甲酸甲酯、邻氨基苯甲酸和d-生物素的共 晶体形成剂的感兴趣的化学或生物性质，(b)测定将导致感兴趣的化学或 物理性质的期望的调节的VX-950和共晶体形成剂的摩尔分数，和(c) 使用步骤(b)中测定的摩尔分数制备共晶体。 [0020]本发明的组合物和共晶体可用于治疗牵涉HCV或与HCV相 关的疾病。因此，治疗此类疾病的方法也在本发明范围内，其包括为有 此需要的对象给药治疗有效量的本发明的共晶体或本发明的组合物。 [0021]本发明的组合物和共晶体还可用作晶种，制备包含可与 VX-950相同或不同的活性成分和共晶体形成剂的另外的共晶体，其中 该共晶体形成剂还可与选自4-羟基苯甲酸、4-氨基水杨酸、苯丙氨酸、 苏氨酸、酒石酸、乙酸琥珀酰酯、脯氨酸、4-羟基苯甲酸甲酯、邻氨基 苯甲酸和d-生物素的共晶体形成剂相同或不同。例如，可将少量本发明 的共晶体置于包含期望的活性成分和共晶体形成剂的溶液中，使混合物 静置以便利用存在的共晶体形成且从其生长出另外的共晶体。 [0022]此外，本发明的组合物和共晶体可用作研究工具。例如，它 们可用于研究不同形式和在一定条件下的VX-950的药理性质(例如生 物利用度、代谢和功效)，或用于开发用于最佳递送和吸收的各种VX-950 制剂。 附图概述 [0023]图1显示用于测定形成VX-950与4-羟基苯甲酸的共晶体的 进程的代表性HPLC色谱。 [0024]图2显示VX-950与4-羟基苯甲酸的共晶体的1H-NMR谱。 [0025]图3显示作为乙腈溶剂化物的VX-950与4-氨基水杨酸的共 晶体的XRPD。 [0026]图4显示作为乙腈溶剂化物的VX-950与4-氨基水杨酸的共 晶体的DSC谱。 [0027]图5显示作为乙腈溶剂化物的VX-950与4-氨基水杨酸的共 晶体的TGA谱。 [0028]图6显示VX-950与4-羟基苯甲酸的的共晶体的TGA谱。 [0029]图7显示VX-950与4-羟基苯甲酸的共晶体的DSC谱。 [0030]图8显示VX-950与4-羟基苯甲酸的共晶体的XRD谱。 [0031]图9显示作为乙腈溶剂化物的VX-950与4-羟基苯甲酸的共 晶体的XRD图。 [0032]图10显示作为乙腈溶剂化物的VX-950与4-羟基苯甲酸的 共晶体的DSC谱。 [0033]图11显示作为乙腈溶剂化物的VX-950与4-羟基苯甲酸的共 晶体的TGA谱。 [0034]图12显示VX-950与4-羟基苯甲酸的共晶体的FTIR谱。 发明详述 [0035]在文献中详细地记录了用于制备和表征共晶体的方法。参 见，例如， Trask等人，Chem.Commun.，2004，890-891；和O.Almarsson and M.J.Zaworotko，Chem.Commun.，2004，1889-1896。 这些方法一般也适合用于制备和表征本发明的共晶体。 [0036]此外，可使用下列具体的方法鉴定适合制备共晶体，特别是 本发明的共晶体的共晶体形成剂。 [0037]可在96孔板中在数毫克的规模上进行用于VX-950的可能 的共晶体形成剂的起始鉴定或筛选。XRPD结果与已知晶体VX-950衍 射图的视觉比较可用作可表示整合共晶体形成剂至晶体内的新型晶形 和/或改变的晶格尺寸(crystal lattice dimension)的筛选。已通过该起始 筛选将草酸、4-氨基水杨酸和水杨酸等鉴定为用于与VX-950形成共晶 体的可能的候选物。 [0038]起始筛选的结果可用于鉴定用于VX-950的另外的共晶体形 成剂的建模工作。例如，由于具有更好的物理和化学性质，4-氨基水杨 酸可在通过分子建模鉴定用于VX-950的其他可能的共晶体形成剂中用 作前导分子(lead molecule)。具体地，可使用Quanta软件包(Accelrys Inc.，San Diego，CA)构建4-ASA的模型，然后将其与通过单晶X射线衍 射获得的VX-950的单分子的结构复合。可在VX-950周围的不同位置 人工放置4-ASA分子以在两个分子之间形成最大数目的氢键。使4-ASA 分子的位置坐标的能量最低化，同时使VX-950分子保持固定。通过使 用缺省设置和距离依赖性电介质，将可在Quanta中获得的牛顿-拉斐森 法(adopted-basis Newton-Raphson)用于能量最小化。可使用AutoNom 软件(MDL Information Systems，GmbH)将FDA′s EAFUS(所有食品添加 物(Everything Added to Food)，US)和GRAS(公认安全的(Generally Regarded As Safe))目录中的化合物的名称转变成SMILES格式的2D结 构，从而产生结构的数据库。然后搜索数据库以寻找与使用4-ASA鉴定 的药效基团(pharmacophore)适配的新型共晶体形成剂。可接受的药效 基团具有与VX-950和4-ASA相似的局部能量最小值。 [0039]DSC也可用于筛选共晶体形成剂。在通过DSC进行的筛选 中，在DSC过程中显示固相相互作用(即，共晶熔体的形成)的证据 的共晶体形成剂与VX-950的物理混合物可能更可能形成共晶体。为了 检测VX-950与共晶体形成剂之间的相互作用，可以以1∶1摩尔比混合 组分，然后对其进行以10℃的增量从室温至例如300℃的DSC温度斜 坡法(DSC temperature ramp method)。选择显示在温度上与纯组分的 吸热不同的新的热事件(即，吸热)的混合物。当除了原始组分中的一个 组分的热转变(thermal transition)外，还观察到新热转变时，则可调节 VX-950与共晶体形成剂之间的摩尔比以试图只产生新热转变。可将观 察到的转变温度作为组成的函数来作图，从而产生二元混合物的相图 (phase diagram)。如上所述，可以按比例放大在DSC上产生新热转变 的VX-950与共晶体形成剂的组合，从而产生更大的量(例如，克)。 [0040]可以例如通过使用球磨、溶剂蒸发、在存在或不存在溶剂的 情况下熔化、淤浆转化(slurry conversion)、混和、升华或铸模 (moderling)，而大量(即，按按比例放大)产生具有新热转变的VX-950 与共晶体形成剂的混合物。下面详细地描述了此类方法中的一些方法。 可利用此类已知的方法如XRPD、TGA和DSC来分析或表征这样所制 备的产物，并且还可通过本领域已知的方法测量它们在含水介质中的溶 解度和稳定性。 [0041]球磨：使用适当的溶剂混合等摩尔量的VX-950和共晶体形 成剂。然后使用球磨装置例如Retsch MM200(GlenMills Inc.，Clifton，NJ) 以15Hz的频率碾磨混合物，进行3小时。然后将混合物置于由烧结刚 玉制造的碾磨室中。在碾磨后，将材料置于螺帽闪烁瓶(未盖盖的)中， 然后在真空中于室温下进行干燥。可进行XRPD和DSC分析来表征所 得的混合物。 [0042]在反应块(Reaction Block)中熔化：在使用或不使用溶剂的 情况下，将等摩尔量的VX-950和共晶体形成剂混合。然后将混合物置 于反应块中，例如Radleys Discovery Technologies(Essex，UK)的Model RR98072中，旋紧盖子，然后加热至通过新热转变的DSC鉴定的温度。 然后在打开反应块之前，将混合物在转变温度下保持一段时间，然后在 环境温度下冷却所得的混合物。 [0043]溶剂蒸发：分别将VX-950和潜在的共晶体形成剂溶解入挥 发性溶剂(例如，二氯甲烷或甲基叔丁基醚)或溶剂混合物(例如，50∶50 甲苯∶乙腈)中。可通过搅拌和超声帮助溶解直至获得澄清的溶液。然后 以期望的摩尔比，将VX-950溶液与共晶体形成剂溶液在螺帽闪烁瓶中 混合。在减压的情况下，打开盖子，静置瓶子，通常经过数天的时间使 溶剂蒸发至干燥。获得固体(晶体)材料并且分析。 [0044]如上面所提及的，可使用本领域已知的用于表征固体或晶体 材料的方法来分析本发明的共晶体。表征方法的实例包括热重量分析 (TGA)、差示扫描量热法(DSC)、X射线粉末衍射(XRPD)、溶解度分析、 动态蒸汽吸附(Dynamic Vapor Sorption)、红外废气分析和悬浮稳定性。 TGA可用于检查残留溶剂在共晶体样品中的存在，和用于鉴定各共晶体 样品的分解发生时所处的温度。DSC可用于寻找在共晶体样品中发生的 作为温度的函数的热转变，并测定各共晶体样品的熔点。XRPD可用于 共晶体的结构表征。可进行溶解度分析来反映各共晶体样品的物理状态 的变化。可使用悬浮稳定性分析来测定共晶体样品在溶剂中的化学稳定 性。更详细地描述此类方法中的一些方法。 [0045]X射线粉末衍射(XRPD)：XRPD可通过记录其原始模式图 (Pattern)和监控模式图随时间的变化来用于表征材料的物理形式。可 以例如通过使用配备有密封管放射源(sealed tube source)和Hi-Star面 探测器(Bruker AXS，Madison，WI，USA)的Bruker D8 Discover衍射仪以 反射模式中在室温下获得XRPD模式图。可在例如40kV和35mA下操 作铜靶X射线管(Siemens)。由Bruker提供的石墨单色器和0.5mm准 直仪(collimator)可用于产生平行的单色光束(CuKa，样 品与检测器之间的距离可以为大约30cm。可将样品置于Si零背景晶片 (例如，来自The Gem Dugout，State College，PA)上，然后将所述晶片放 置位于在XYZ平台的中部。可使用用于Windows NT，版本4.1.16的 GADDS软件(Bruker AXS，Madison，WI，USA)获得数据。可以各自在2 个不同的2θ角：8°和26°2-θ以每帧120秒的曝光时间记录两帧(frame)。 在曝光过程中，样品在X和Y方面都以1mm的幅度振荡。然后可在3° 至41°2-θ(步长为0.02°)的范围内整合数据，并且将其合并成一个连 续的模式图。刚玉板(NIST standard 1976)可用于校准仪器。 [0046]差示扫描量热法(DSC)：DSC可用于检测样品中发生的作为 温度的函数的热转变和测定晶体材料的熔点。例如使用用铟校准的 MDSC Q100差示扫描量热器(TA Instruments，New Castle，DE)进行差异 扫描量热法。可在用单个针孔产生皱褶的铝盘中制备样品，样品大小为 例如大约2mg。每批开始时各将平衡至25℃，然后以10℃/分钟的升温 速度进行至300℃。在熔化后VX-950分解，分解始于大约240℃。可通 过Thermal Advantage Q SeriesTM软件收集数据并通过Universal Analysis 软件(TA Instruments，New Castle，DE)分析数据。 [0047]热重量分析(TGA)：TGA可用于研究残留的溶剂在样品中的 存在和鉴定样品的分解发生时所处的温度。例如，可使用Model Q500 热重量分析仪(TA Instruments，New Castle，DE)进行TGA测量。样品重 量可在大约3-8mg的范围内，并且可以以大约10℃/分钟的速度被加热 至例如300℃的最终温度。可以例如通过Thermal Advantage Q SeriesTM 软件收集数据并通过Universal Analysis软件(TA Instruments，New Castle， DE)分析数据。 [0048]傅里叶变换红外(FT-IR)光谱法：可使用FT-IR研究VX-950 与共晶体形成剂以不同摩尔比混合的混合物中的氢键。可以使用4000 至625cm-1的Nexus 670光谱仪(Thermo Electron Corp.；Madison，WI)例 如从KBr沉淀获得红外透射谱。 [0049]溶解度的测定：溶解度可表示为VX-950当量。可测量其来 反映材料的物理状态的变化和监控朝向增加VX-950的溶解度的目标的 进程。具体地，可将材料的等分置于具有10mg/mL的靶溶解度的含水 介质中。在设定的时间点上，取出上清液的等分，将其通过0.45微米过 滤器(例如，Millex；Millipore，Billerica，MA)过滤，然后使用HPLC(例如 Agilent 1100；Palo Alto，CA)进行分析。可使用检测器(例如设置在270 nm和Phenyl柱150mm×4.6mm，3.5μm粒径(P/N 186001144) (Waters Corp.，Milford，MA)上1ml/分钟的流速)同等地(isocratically) 分析样品。流动相以60∶40(v/v)的比例包含磷酸钾缓冲液(10mM，pH＝ 7.0)和甲醇。可通过将色谱峰面积与使用已知浓度的标准产生的校准曲 线相比较来测定VX-950的浓度。 [0050]高温热台显微镜(Hotstage Microscope)：可以例如使用具 有偏振片、SLMPlan 50x无限校正的物镜、C-5050数码相机和具有可调 温度控制器的Instec高温热台(hot stage)的Olympus BX51共聚焦显微 镜来拍摄显微图像。实验方法由不同温度步骤(其中让样品平衡数分钟) 之间的线性加热升温速度组成。在整个升温过程中人工采集数码图像以 捕捉所发生的任何转变。 [0051]可将有效量的各自包含VX-950和共晶体形成剂(例如，4- 羟基苯甲酸、4-氨基水杨酸(具有乙腈)、苯丙氨酸、苏氨酸、己二酸、 乙酸琥珀酰酯、脯氨酸、4-羟基苯甲酸甲酯、邻氨基苯甲酸、d-生物素 或酒石酸)的本发明的共晶体或组合物用于治疗牵涉HCV或与HCV相 关的疾病。有效量是对被治疗的对象例如患者提供疗效所需的量。 VX-950和共晶体形成剂的共晶体的有效量在大约0.1mg/kg至大约150 mg/kg(例如，大约1mg/kg至大约60mg/kg)之间。如本领域技术人员所 公认的，取决于给药路线、赋形剂的使用以及与其他治疗的共使用(包 括其他治疗剂和/或疗法的使用)的可能性，有效剂量也将发生变化。 [0052]可通过任何方法对有此需要的对象(例如细胞、组织或患者 (包括动物或人))给药本发明的共晶体或药物组合物，所述方法允许 例如通过口服、静脉内或胃肠外途径递送化合物VX-950。例如，它们 可通过丸剂、片剂、胶囊、气雾剂、栓剂、用于摄入或注射或用作滴眼 液或滴耳液的液体制剂、食品添加物和局部用制剂来进行给药。 [0053]药物组合物可包含稀释剂、溶剂、赋形剂和载体例如水、林 格溶液(Ringer’s solution)、等渗盐溶液、5％的葡萄糖和等渗氯化钠溶 液。在另一个实施方案中，药物组合物还可包含增溶剂例如环糊精。适 当的稀释剂、溶剂、赋形剂、载体和增溶剂的另外的实例可见于例如 U.S. Pharmacopeia 23/National Formulary 18，Rockville，MD，U.S.Pharmacopeia Convention， Inc.，(1995)；Ansel HC，Popovich NG，Allen Jr LV.Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，Baltimore MD，Williams&Wilkins，(1995)；Gennaro AR.，Remingtons： The Science and Practice of Pharmacy，Easton PA，Mack Publishing Co.，(1995)；Wade A， Weller PJ.Handbook of Pharmaceutical Excipients，第2版，Washington DC，American Pharmaceutical Association，(1994)；Baner GS，Rhodes CT.Modem Pharmaceutics，第3版， New York，Marcel Dekker，Inc.，(1995)；Ranade VV，Hollinger MA.Drug Delivery Systems. Boca Raton，CRC Press，(1996)。 [0054]药物组合物还可包括等渗盐溶液、5％葡萄糖或其他公知的 药学上可接受的赋形剂中的共晶体的含水溶液。增溶剂例如环糊精或对 于本领域技术人员来说是公知的增溶剂可用作用于递送治疗性化合物 VX-950的药物赋形剂。关于给药路线，可通过口服、鼻内、经皮肤、 皮内、经阴道、耳内、眼内、经面颊(buccally)、经直肠、透粘膜或 通过吸入或静脉内给药来给药共晶体或药物组合物。可通过气囊式导管 静脉内递送组合物。可对动物(例如，哺乳动物例如人、非人灵长类动 物、马、狗、牛、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、仓鼠、 沙鼠、白鼬、蜥蜴、爬行动物或鸟类)施用组合物。 [0055]本发明的共晶体或药物组合物还可通过利用可植入装置植 入(例如，通过手术)本发明的共晶体或药物组合物来进行递送。可植 入的装置的实例包括但不限于支架、递送泵、血管滤器和可植入的控制 释放组合物(control release composition)。任何可植入的装置可用于递 送作为本发明的共晶体或药物组合物中的活性成分的化合物VX-950前 提是1)装置、化合物VX-950和任何药物组合物包括化合物是生物相容 的，和2)装置可递送或释放有效量的化合物以对被治疗的患者提供疗 效。 [0056]通过支架、递送泵(例如，小型渗透泵)和其他可植入装置 进行的治疗剂的递送在本领域内是已知的。参见，例如，″Recent Developments in Coated Stents″by Hofina等人，在Current Interventional Cardiology Reports，2001，3：28-36中出版的，其全部内容，包括其中引用 的参考资料，合并入本文。可植入材料例如支架的其他描述可见于美国 专利6,569,195和6,322,847，和PCT国际公开号WO 04/0044405、WO 04/0018228、WO 03/0229390、WO 03/0228346、WO 03/0225450、WO 03/0216699和WO 03/0204168，其各自(以及本文引用的其他出版物) 以其全文通过引用合并入本文。 [0057]下面描述的是制备和表征本发明的共晶体的实施例，其只意 欲进行举例说明而非以任何方式限定本发明。 实施例1.通过球磨法进行的制备 [0058]可用溶剂(例如，甲乙酮或乙酸乙酯)将VX-950与等摩尔 当量的共晶体形成剂(例如，4-羟基苯甲酸)混合。然后使用Wig-L-Bug 装置，例如Retsch MM200(GlenMills Inc，Clifton，NJ)，以15Hz的频率 碾磨组分。在碾磨后，在例如真空中于75℃下干燥批次，进行2小时， 从而产生本发明的共晶体。 实施例2.通过熔化法进行的制备 [0059]可以在使用或不使用溶剂的情况下，例如通过涡旋5分钟来 混合VX-950和等摩尔当量的共晶体形成剂(例如，4-羟基苯甲酸)。然后 将混合物置于反应块(例如，来自Radley Discovery Technologies的RR 98072)中，盖紧盖子，然后加热至恒温。将混合物在恒温温度下保持30 分钟，然后在环境温度下，打开盖子，冷却所得的混合物，并且当使用 时除去溶液，从而产生本发明的共晶体。 实施例3.通过溶剂蒸发法进行的制备 [0060]4-羟基苯甲酸：在50mL乙酸乙酯中加热160mg VX-950和 80mg 4-羟基笨甲酸(Sigma Chemicals Co.，St.Louis，MO，USA)直至两者 溶解，并且获得澄清的溶液。将溶液装入开放的烧杯，使溶剂在减压下 在室温下蒸发12小时。在烧杯中观察到晶体材料，从其中取出晶体材 料，从而产生180mg VX-950和4-羟基苯甲酸的共晶体。 [0061]在乙腈存在的情况下的4-羟基苯甲酸：在50mL乙腈中加热 160mg VX-950和80mg 4-羟基苯甲酸(Sigma Chemicals Co.，St.Louis， MO，USA)直至两者溶解，并且获得澄清的溶液。将溶液装入开放的烧 杯中，使溶剂在减压下在室温下蒸发大约12小时。在烧杯中观察到晶 体材料，从其中取出晶体材料，从而产生190mg作为乙腈溶剂化物的 VX-950和4-羟基苯甲酸的共晶体。 [0062]在乙腈存在的情况下的4-氨基水杨酸：在50mL乙腈中加热 180mg VX-950和80mg 4-氨基水杨酸(Sigma Chemicals Co.，St.Louis， MO，USA)直至两者溶解，并且获得澄清的溶液。将溶液装入开放的烧 杯中，让溶剂在减压下在室温下蒸发大约12小时。在烧杯中观察到晶 体材料，从其中取出晶体材料，从而产生200mg作为乙腈溶剂化物的 VX-950和4-羟基苯甲酸的共晶体。 实施例4.通过结晶进行的制备 [0063]还通过首先将1摩尔VX-950溶解在3倍体积的二氯甲烷中 来制备VX-950和4-羟基苯甲酸的共晶体。然后在搅拌的条件下，向 VX-950溶液中加入5倍体积包含1.4摩尔当量的4-羟基苯甲酸的甲基叔 丁基醚(MTBE)溶液。在结晶开始发生前，让所获得的混合物静置大约1 至3小时。使结晶过程进行5至6小时，然后观察到固体材料。将固体 材料进行过滤，然后用新鲜母液(即，以5∶3的体积比混合的MTBE和二 氯甲烷的混合物)进行清洗。然后在使用或不使用氮气吹洗(nitrogen sweep)的情况下，在真空烘箱中于15至75℃下干燥材料，进行6小时 至3天，从而产生VX-950和4-羟基苯甲酸的共晶体。 [0064]备选地，在下列条件下制备VX-950和4-羟基苯甲酸的共晶 体。在氮气氛下，向第一反应器中加入VX-950(1.00当量)，然后向相同 的反应器中加入二氯甲烷(3倍体积)。将该第一反应器的批次的温度调 整至20-25℃，并且观察到VX-950溶解在二氯甲烷中。向第二反应器中 加入4-羟基苯甲酸(1.30当量)，然后加入甲基叔丁基醚(5倍体积)。也将 该第二反应器的批次的温度调整至20-25℃，然后观察到4-羟基苯甲酸 溶解在甲基叔丁基醚中。然后在90至120分钟的时间内，将甲基叔丁 基醚中的4-羟基苯甲酸溶液从第二反应器转移至第一反应器中的二氯 甲烷中的VX-950溶液，同时将第一反应器的批次温度保持在20-25℃。 在20-25℃下搅拌所获得的溶液，然后取样，每隔2小时使用HPLC对 其进行一次分析直至完成形成VX-950与4-羟基苯甲酸的共晶体的反 应。图A中显示的是显示仍然在溶液中的4-羟基苯甲酸和VX-950的峰 的代表性HPLC谱，然后将其转变成它们剩余的浓度或量。在完成反应 后，过滤所得的淤浆，用2倍体积的二氯甲烷和甲基叔丁基醚(以3∶5 的比例)的混合物清洗滤饼。使用2倍体积的二氯甲烷和甲基叔丁基醚 (以3∶5的比例)的混合物重复清洗。在使用或不使用氮气冲洗的情况下， 在真空下于15至75℃下干燥所获得的VX-950和4-羟基苯甲酸的共晶 体6小时至3天。 实施例5：单晶衍射 [0065]通过使用从母液中挑选的单晶并且将其置于玻璃纤维上，使 用Cu Kα放射线在Bruker APEX II CCD衍射仪上于100K下进行单晶衍 射。将晶体在氮气流系统(nitrogen flow system)中冷却至100K，然后 以角度围绕ω轴拍摄回摆图。用APEX软件将数据编入索引、整合 数据和调节大小。使用SHELX-TL软件包解析结构并且对其精确化。 [0066]作为乙腈溶剂化物的VX-950和4-羟基苯甲酸的共晶体显示 具有空间群P2i2i2i1的斜方晶胞(orthorhombic cell)。单晶胞大小为 α＝90°、β＝90°、γ＝90°。单晶 胞大小可偏差R因子R1＝0.0273，wR2＝0.0688。数据显示共 晶体在不对称单元中包含一个VX-950、一个4-羟基苯甲酸和0.143个乙 腈。 [0067]作乙腈溶剂化物的VX-950和4-氨基水杨酸的共晶体显示具 有空间群P2i2i2i1的斜方晶胞。单晶胞大小为 α＝90°、β＝90°、γ＝90°。单晶胞大小可偏差 R因子R1＝0.0574，wR2＝0.1445。数据显示共晶体在不对称单元中包含 一个VX-950、一个4-羟基水杨酸和0.337个乙腈。 实施例6.热重量分析(TGA) [0068]使用Model Q500热重量分析仪(TA Instruments，New Castle， DE，USA)进行各样品的TGA，该分析仪使用其control Thermal Advantage Q SeriesTM软件，版本2.2.0.248，Thermal Advantage Release 4.2.1(TA Instruments-Water LLC)，所述软件具有下列组成部分： QAdv.exe版本2.2build 248.0；RhDILdII版本2.2build 248.0；RhBase.dll 版本2.2build 248.0；RhComm.dll版本2.2build 248.0；TaLicense.dll版本 2.2build 248.0；和TGA.dll版本2.2build 248.0。此外，所使用的分析软 件是用于Windows 2000/XP的Universal Analysis 2000软件，版本4.1D build 4.1.0.16(TA Instruments)。 [0069]对于所有实验，用于进行TGA的基本程序包括将样品的等 分(大约3-8mg)转移入铂样品盘(盘：Part No.952018.906，TA Instruments)。将盘置于装载平台上，然后使用控制软件将其自动地装载 入Q500热重量分析仪。通常在使用90L/分钟的样品冲洗流速和10L/ 分钟的平衡冲洗流速的流动干燥氮气(被压缩的氮气，等级4.8(BOC Gases，Murray Hill，NJ，USA))下，通过以10℃/分钟的速度跨温度范围(通 常从室温至400℃)单独地加热样品来获得热谱图。观察热转变(例如重 量变化)并且使用随仪器一起提供的分析软件来进行分析。 [0070]如图5中显示的，当达到220℃时，作为乙腈溶剂化物的 VX-950和4-氨基水杨酸(摩尔比为1)的共晶体的TGA谱显示大约10.4％ 的重量损失。 [0071]如图6中显示，VX-950和4-羟基苯甲酸(摩尔比也是1)的 共晶体的TGA谱显示从大约160℃开始连续的重量损失。 [0072]如图11中所示，作为乙腈溶剂化物的VX-950和4-羟基苯 甲酸的共晶体的TGA谱显示从大约140℃开始连续的重量损失。 实施例7.差示扫描量热法(DSC) [0073]使用MDSC Q100差示扫描量热器(TA Instruments)进行DSC 分析，所述量热器使用其control Thermal Advantage Q SeriesTM软件，版 本2.2.0.248，Thermal Advantage Release 4.2.1(TA Instruments-Water LLC)，所述软件具有下列组成部分：QAdv.exe版本2.2build 248.0； RhDILdII版本2.2build 248.0；RhBase.dll版本2.2build 248.0； RhComm.dll版本2.2build 248.0；TaLicense.dll版本2.2build 248.0；和 DSCdII版本2.2build 248.0。此外，所使用的分析软件是用于Windows 2000/XP的Universal Analysis 2000软件，版本4.1D build 4.1.0.16(TA Instruments)。使用铟校准仪器。 [0074]对于所有DSC分析，称取样品的等分(大约2mg)置于铝样 品盘(盘：Part No.900786.901；和盖子：Part No.900779.901，TA Instruments)中。通过用单个针孔产生皱褶来密封样品盘，使其在30℃下 进行平衡，然后装载入配备有自动采样器的Q100差示扫描量热器。在 使用60L/分钟的样品冲洗流速和40L/分钟的平衡冲洗流速)的流动干 燥氮气(被压缩的氮气，等级4.8(BOC Gases，Murray Hill，NJ，USA)) 下，通过以50℃/分钟的速度跨温度范围(通常从室温至400℃)单独地加 热样品来获得热谱图。以与具有样品的盘相同的方式制备的空铝盘用作 参照。观察热转变并且使用随仪器一起提供的分析软件来进行分析。 [0075]如图4中显示的，DSC热谱图显示作为乙腈溶剂化物的 VX-950和4-氨基水杨酸(摩尔比为1∶1)的共晶体在大约191.19℃熔化。 [0076]如图7中显示的，DSC热谱图显示作为乙腈溶剂化物的 VX-950和4-羟基苯甲酸(摩尔比为1∶1)的共晶体在大约184.71℃熔化。 [0077]如图10中显示的，DSC热谱图显示作为乙腈溶剂化物的 VX-950和4-羟基苯甲酸(摩尔比为1∶1)的共晶体在大约190.78℃熔化。 实施例8.X-射线粉末衍射(XRPD) [0078]XRPD模式图可以通过使用配备有密封管放射源和Hi-Star 面探测器(Bruker AXS，Madison，WI，USA)的Bruker D8 Discover衍射仪 在室温下在反射模式中获得XRPD模式图。可在例如40kV和35mA下 操作铜靶X射线管(Siemens)。由Bruker提供的石墨单色器和0.5mm准 直仪(collimator)用于产生平行的单色光束(CuKa，样品 与检测器之间的距离为大约30cm。将样品置于Si零背景晶片(The Gem Dugout，State College，PA)上，然后将所述晶片放置位于XYZ平台的中 部。可使用用于Windows NT，版本4.1.16的GADDS软件(Bruker AXS， Madison，WI，USA)获得数据。可以各自在2个不同的2θ角：8°和26° 上以每帧120秒的曝光时间记录两帧。在曝光过程中，样品在X和Y 方面都以1mm的幅度振荡。随后在3°至41°2-θ(步长为0.02°)的范 围内整合数据，并且将其合并成一个连续的图。刚玉板(NIST standard 1976)用于校准仪器。 [0079J如图3中所显示的，作为乙腈溶剂化物的VX-950与4-氨基 水杨酸(摩尔比为1∶1)的共晶体的XRPD模式图在大约 7.711，8.631，8.949，9.723，9.959，11.564，11.968，12.984，13.354，13.717，14.615，14.910， 16.342，17.235，17.584，18.004，19.040，19.274，19.631，20.173，20.715，21.406，22.013， 23.018，24.245，24.855，26.552，28.445，30.020，32.768， 和34.392°的2-θ处显示有峰。 [0080]如图8中所示，VX-950与4-羟基苯甲酸(摩尔比为1∶1)的 共晶体的XRPD模式图分别在大约17.33、17.61、18.07、18.87、19.34、 19.68、20.75和26.76°的2-θ处显示0.74、0.93、1.00、0.96、0.67、0.77、 0.79和0.65的相对强度。 [0081]如图9中所示，作为乙腈溶剂化物的VX-950与4-羟基苯甲 酸(摩尔比为1∶1)的共晶体的XRPD模式图在大约 7.684，8.599，9.605，9.938，11.502，11.895，12.892，13.317，14.864，16.282，17.199，17.581， 18.051，18.868，19.252，19.616，20.074，20.712，21.435，23.090，24.417，26.752， 和28.643°的2-θ处显示峰。 实施例9.溶解度分析 [0082]将本发明的共晶体置于管中，然后加入含水介质。在设定的 时间点上，取出上清液的等分，通过0.45PTFE微米过滤器(Millex，LCR， Millipore)进行过滤，然后进行高效液相色谱(HPLC)分析(Agilent 1100； Palo Alto，CA，USA)。系统配备有设定在25℃下的自动采样器。关于样 品操作，可用乙腈以1∶1的v/v比稀释共晶体的等分。可使用设定在270 nm，柱子为Phenyl柱150mm×4.6mm，3.5μm颗粒大小(P/N 186001144)(Waters，Milford，MA，USA)的检测器同等地进行样品检测。 移动相可以是以60∶40(v/v)的比例混合的磷酸钾缓冲液(10mM，pH＝ 7.0)∶甲醇。可以以1mL/分钟进行检测，在15分钟内完成。 [0083]通过在摇床上用水平衡共晶体进行24小时，然后通过离心 和分离饱和溶液来在环境条件下测定水溶解度数据。通过在连续搅拌进 行24的条件下向模拟液中加入共晶体来在室温下测定模拟胃液和模拟 肠液(进食的和禁食的)中的溶解度。在选择的时间点上，过滤样品， 然后通过HPLC测定滤液。 [0084]VX-950和4-羟基苯甲酸(摩尔比是1∶1)的共晶体的溶解度 如下：在水中为0.0148mg/mL，在模拟胃液(进食的)中为0.109mg/ml， 在模拟胃液(禁食的)中为0.145mg/mL，在模拟肠液(进食的)中为0.0227 mg/mL，和在模拟肠液(禁食的)中为0.133mg/mL。 实施例10.悬浮稳定性 [0085]还可估计当悬浮于含水介质时本发明的共晶体的物理稳定 性。具体地，可以例如在(1)未缓冲的去离子水中，和(2)1％(w/w)的HPMC 溶液(低粘性级)中于25℃下以大约6mg/mL的公称浓度(nominal concentration)将共晶体粉末调成浆。然后可使用磁力搅拌棒和板混合 浆。可以例如以1、2、6和24小时的时间间隔通过过滤分离固体样品。 其他实施方案 [0086]要理解，虽然已结合其详细的描述对本发明进行了描述，但 上述描述意欲举例说明而不限定由所附权利要求的范围定义的本发明 的范围。其他方面、优点和变化也在下列权利要求的范围之内。